劉 博 張 欣 翟 艷

結(jié)腸癌是一種高發(fā)性腫瘤，在西方國家中，結(jié)腸癌占所有癌癥的10%以上[1]。在中國，結(jié)腸癌的發(fā)病率也顯著增加。目前，判斷結(jié)腸癌預(yù)后常用的方法就是監(jiān)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況[2]。然而，現(xiàn)在并沒有預(yù)測遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移和局部復(fù)發(fā)的可靠指標(biāo)。一些常見的結(jié)腸癌預(yù)后因子主要是分子和生化標(biāo)志物，但是高昂的檢測成本限制了其在臨床的廣泛應(yīng)用[3]。

細(xì)胞因子是一種由淋巴細(xì)胞分泌的具有免疫調(diào)節(jié)功能的激素，其中IL-6已被證實和多種腫瘤相關(guān)[4-7]。CRP也是一種常見細(xì)胞因子，在乳腺癌中可作為患者存活的獨立預(yù)后因素[8]，但在結(jié)腸癌中，循環(huán)CRP水平和預(yù)后的關(guān)系尚無定論[9]。此外，結(jié)腸癌患者術(shù)前血清中EGF和腫瘤中EGFR水平之間的關(guān)系也很少有研究報道。在本研究中，我們通過回顧性分析Ⅲ期結(jié)腸癌患者術(shù)前血清中細(xì)胞因子(EGF、IL-6和 CRP)的水平，研究了其與患者預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2013年9月至2016年9月于我院經(jīng)結(jié)腸癌根治術(shù)的83例Ⅲ級結(jié)腸癌患者的臨床資料，其中男性47例，女性36例；≥60歲患者61例，<60患者22例；根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅲ期79例，Ⅳ期4例。N1患者73例，N2患者10例。淋巴血管侵犯患者13例。所有患者均接受標(biāo)準(zhǔn)輔助化療83例。臨床資料來源于患者術(shù)后復(fù)查，檢查項目包括血清癌胚抗原(CEA)、胸部X線攝影、腹部計算機斷層掃描(CT)、結(jié)腸鏡檢查、腹部超聲檢查、血常規(guī)、血清中腫瘤標(biāo)志物檢查。所有患者均接受了標(biāo)準(zhǔn)輔助化療。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者年齡18～80歲；手術(shù)前未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移且術(shù)后病理檢查確診為結(jié)腸癌；術(shù)前無呼吸或循環(huán)系統(tǒng)重大疾??；無術(shù)前化療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡<18歲或者>80歲的患者；手術(shù)中發(fā)現(xiàn)多發(fā)轉(zhuǎn)移或肝轉(zhuǎn)移，無法根治切除；其他臟器有重大疾病的患者；隨訪時間在3個月以下。

1.3 血清樣本的處理

收集患者術(shù)前血液樣本，在3 000 r/min條件下離心處理5 min。移除血清并將樣品保存于-80 ℃條件下，以備生化分析。

1.4 細(xì)胞因子的檢測

通過EGF和IL-6的免疫試劑盒(上海生工生物工程有限公司)檢測EGF和IL-6的含量，依照試劑盒說明書進(jìn)行操作。通過免疫比濁法測定血清中CRP的含量。

1.5 免疫組化測定EGFR的含量

通過檢測細(xì)胞膜棕黃色沉淀判斷EGFR的表達(dá)水平，其中，0分表示無著色、1+表示弱膜著色、2+表示中等程度膜著色、3+表示強的完全膜著色。

1.6 統(tǒng)計分析

研究的終點設(shè)定在根治切除后，且在腫瘤復(fù)發(fā)之前。無病生存期定義為從根治切除后直到腫瘤復(fù)發(fā)的時間。通過t檢驗對兩樣本平均值進(jìn)行比較，使用方差分析進(jìn)行多樣本間比較。通過χ2檢驗或Fisher精確概率法進(jìn)行樣本間率的比較。通過Cox比例模型進(jìn)行多變量分析。使用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)前血清中細(xì)胞因子的水平

EGF、IL-6和CRP水平的中位數(shù)分別為183.2(10～221)pg/mL、8.81(0.01～305)pg/mL和1.27(0.5～5.0)mg/dL。

2.2 術(shù)前血清中細(xì)胞因子水平與無病生存率的相關(guān)性分析

術(shù)前IL-6水平高于9 pg/mL與無病生存率顯著相關(guān)(P<0.05)，CRP和EGF水平與無病生存率并無顯著關(guān)系(P=0.227；P=0.304)。見表1。

表1 患者術(shù)前血清中細(xì)胞因子和無病生存之間的關(guān)系(例，%)

2.3 血清EGF水平與腫瘤組織EGFR以及血清IL-6水平的相關(guān)性分析

在83例患者中，EGFR陽性61例(73.5%)，陰性22例(26.5%)。腫瘤中EGFR的陽性與血清中EGF水平之間并無顯著相關(guān)性(γ=0.234,P=0.479)。此外，EGF與IL-6之間也沒有顯著相關(guān)性(γ=0.211,P=0.297)。見表2。

表2 血清EGF水平與腫瘤組織EGFR陽性的相關(guān)性/例

3 討論

近年來，結(jié)腸癌的外科手術(shù)技術(shù)和藥物治療得到了長足的進(jìn)展，然而，患者的預(yù)后依然很不理想[9-10]。造成這種情況的原因之一就是預(yù)測預(yù)后的指標(biāo)的缺乏。所以，發(fā)現(xiàn)并驗證預(yù)后相關(guān)指標(biāo)，對患者的總體生存和無病生存率進(jìn)行預(yù)測是很有必要的。

研究已經(jīng)證實，IL-6與很多種癌癥的發(fā)生與發(fā)展都有緊密的聯(lián)系，其在臨床診斷中的作用也被越來越多地認(rèn)識到[11]。在我們的研究中，IL-6在Ⅲ級結(jié)腸癌患者血清中是高表達(dá)的，這與前人的研究是一致的[12]。本研究旨在發(fā)現(xiàn)IL-6對結(jié)腸癌患者預(yù)后的意義，以及其與EGF、EGFR之間的關(guān)系。EGFR通路可誘導(dǎo)核因子kappaB的活性，促進(jìn)驗證因子的表達(dá)，包括IL-6和IL-8[13]。然而，在本研究中，患者術(shù)前血清中EGF的水平與血清IL-6的水平(P=0.297)與腫瘤組織EGFR的表達(dá)(P=0.479)并無顯著的相關(guān)性。

腫瘤患者IL-6高表達(dá)的原因包括癌胚抗原介導(dǎo)的Kupffer細(xì)胞分泌IL-6，以及慢性應(yīng)激導(dǎo)致的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞分泌IL-6。相應(yīng)的，我們的研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)前血清中高水平的IL-6與無病生存率有關(guān)(P=0.027)。這可能與IL-6通過自分泌的途徑增加腫瘤細(xì)胞運動能力有關(guān)。另外，通過旁分泌途徑，腫瘤細(xì)胞分泌的IL-6能夠刺激間質(zhì)細(xì)胞分泌肝細(xì)胞生長因子，而肝細(xì)胞生長因子與腫瘤細(xì)胞上的干細(xì)胞因子受體結(jié)合后，也會增加腫瘤細(xì)胞的運動能力。目前，國內(nèi)關(guān)于Ⅲ級結(jié)腸癌患者術(shù)前血清中IL-6的水平與預(yù)后的關(guān)系的研究還很少有報道。我們的研究表明，IL-6有潛力作為預(yù)測低生存率的預(yù)后生物指標(biāo)之一。對于CRP，雖然已有研究證明了其與結(jié)腸癌復(fù)發(fā)的關(guān)系[14]，但是在我們的研究中并未發(fā)現(xiàn)CRP與無病生存的關(guān)系。所以，今后的研究需要進(jìn)一步增大樣本量以驗證本研究結(jié)果。

綜上所述，術(shù)前血清中IL-6的水平對于Ⅲ級結(jié)腸癌患者預(yù)后的判斷具有重要價值。IL-6有潛力作為判斷不良預(yù)后的指標(biāo)。而IL-6的水平與EGF的水平以及腫瘤組織中EGFR的陽性與否并沒有顯著相關(guān)性。所以，術(shù)前檢測血清IL-6的水平有助于預(yù)后的預(yù)測。

[1] Siegel R,Ward E,Brawley O,et al.Cancer statistics,2011:the impact of eliminating socioeconomic and racial disparities on premature cancer deaths〔J〕.CA Cancer J Clin,2011,61(4):212-236.

[2] Parnaby CN,Scott NW,Ramsay G,et al.Prognostic value of lymph node ratio and extramural vascular invasion on survival for patients undergoing curative colon cancer resection〔J〕.Br J Cancer,2015,113(2):212-219.

[3] Petrelli F,Coinu A,Cabiddu M,et al.Prognostic factors for survival with bevacizumab-based therapy in colorectal cancer patients:a systematic review and pooled analysis of 11,585 patients〔J〕.Med Oncol,2015,32(2):456.

[4] 趙汗青.結(jié)腸癌患者術(shù)前炎癥標(biāo)志物水平改變的臨床意義〔J〕.實用癌癥雜志，2015,30(8):1132-1134.

[5] De Simone V,Franze E,Ronchetti G,et al.Th17-type cytokines,IL-6 and TNF-α synergistically activate STAT3 and NF-kB to promote colorectal cancer cell growth〔J〕.Oncogene,2015,34(27):3493-3503.

[6] Grivennikov S,Karin E,Terzic J,et al.IL-6 and Stat3 are required for survival of intestinal epithelial cells and development of colitis-associated cancer〔J〕.Cancer Cell,2009,15(2):103-113.

[7] 夏志強，杜彥挺，杜光勇，等.顱咽管瘤中IL-1α、IL-6的表達(dá)的臨床意義〔J〕.中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志，2016,44 (5):564-567.

[8] Onitilo AA,Engel JM,Stankowski RV,et al.High-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP) as a biomarker for trastuzumab-induced cardiotoxicity in HER2-positive early-stage breast cancer:a pilot study〔J〕.Breast Cancer Res Treat,2012,134(1):291-298.

[9] Bertelsen CA,Neuenschwander AU,Jansen JE,et al.Disease-free survival after complete mesocolic excision compared with conventional colon cancer surgery:a retrospective,population-based study〔J〕.Lancet Oncol,2015,16(2):161-168.

[10] 王靜宇，黃凌鯤.結(jié)腸癌KRAS蛋白磷酸化與化療抵抗的相關(guān)性研究〔J〕.湖南師范大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2015，12(3)：76-78.

[11] De Simone V,Franze E,Ronchetti G,et al.Th17-type cytokines,IL-6 and TNF-α synergistically activate STAT3 and NF-kB to promote colorectal cancer cell growth〔J〕.Oncogene,2015,34(27):3493-3503.

[12] Shiga K,Hara M,Nagasaki T,et al.Preoperative serum interleukin-6 is a potential prognostic factor for colorectal cancer,including stage Ⅱ patients〔J〕.Gastroenterol Res Pract,2016，2016:9701574.

[13] Liu X,Ye F,Xiong H,et al.IL-1β Induces IL-6 production in retinal Müller cells predominantly through the activation of P38 MAPK/NF-κB signaling pathway〔J〕.Exp Cell Res,2015,331(1):223-231.

[14] Nimptsch K,Aleksandrova K,Boeing H,et al.Association of CRP genetic variants with blood concentrations of C-reactive protein and colorectal cancer risk〔J〕.Int J Cancer,2015,136(5):1181-1192.