陳 鶯， 黃 珊， 梁 迪， 魏 博， 薛 原

白塞病(Behcet’s disease，BD)是一種病因不明的系統(tǒng)性血管炎，以復(fù)發(fā)性口腔潰瘍、生殖器潰瘍、眼部疾病及皮膚損害為主要臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重者可累及胃腸道、神經(jīng)及心血管等系統(tǒng)，具有自限性及反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)，主要與環(huán)境、遺傳及免疫相關(guān)。C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)與血沉(erythrocyte sedimentation rate，ESR)常用來評(píng)估疾病的活動(dòng)度，但并不具有特異性，且易受體內(nèi)不同的生理及病理狀況影響。細(xì)胞因子在免疫調(diào)節(jié)中扮演重要的角色。研究認(rèn)為，某些炎癥因子在BD的發(fā)病過程起重要的作用[1]，如腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor，TNF-α)，干擾素γ(interferon，IFN-γ)，白細(xì)胞介素1(interleukin，IL-1)，IL-4，IL-6，IL-8，IL-10，IL-12，IL-13，IL-18，IL-17，IL-21，IL-23等細(xì)胞因子的水平與BD密切相關(guān)；某些炎癥因子如IL-18，TNF-a及抵抗素與疾病的活動(dòng)度、炎癥指標(biāo)相關(guān)[2-4]。本研究通過比較8例BD患者與8例健康對(duì)照者血清中的40種炎癥因子水平，分析炎癥因子與BD患者血清ESR，CRP水平及疾病活動(dòng)度評(píng)分等的相關(guān)性，探討炎癥因子在BD中可能的臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象 收集2015年6月-2016年6月就診的BD患者8例，男性4例，女性4例，年齡(37±10.25)歲(25～54歲)，病程平均3.5年?？谇粷?例，生殖器潰瘍6例，皮疹6例，眼炎2例，關(guān)節(jié)累及1例，心臟累及1例。ESR(20.68±25.62) mm/h(5.4～22. 9 mm/h)，hsCRP(2.70±3.07) mg/L(0.17～8.75 mg/L)，IgA(2.76±0.60) g/L(2.3～3.67 g/L)，IgM(1.43±0.31)g/L(1～1.78 g/L)，IgG(13.73±3.12)g/L(8.7～19.7 g/L)。根據(jù)2006版BD疾病活動(dòng)度評(píng)分(Behcet’s disease current activity form，BDCAF)進(jìn)行評(píng)分[1]，8例患者的評(píng)分分別為3，3，7，5，5，7，3，7。因樣本量較少，未根據(jù)臨床表現(xiàn)及疾病活動(dòng)度進(jìn)行分組。入選的BD患者均符合2013年國(guó)際BD診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除其他風(fēng)濕性疾病、感染、腫瘤等可能影響炎癥因子表達(dá)的其他疾病。

選取同時(shí)期性別、年齡與病例組相匹配的健康對(duì)照者8例作為對(duì)照組，男性4例，女性4例，年齡(33±10.19)歲(23～51歲)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)，所有入選者均充分告知研究相關(guān)獲益及風(fēng)險(xiǎn)，并簽署知情同意書。

1.2檢測(cè)40種炎癥因子水平 準(zhǔn)備好血清樣品與GSH-IMR-1抗體芯片(廣州RayBiotech公司)，嚴(yán)格按說明書操作(類似雙抗體夾心法原理)，半定量檢測(cè)40種炎癥因子的水平(Lipocalin-2，Thrombomodulin，Troponin I，Procalcitonin，E-Selectin，IL-2 Ra，IL-1b，IL-8，CD14，MIP-1b，RAGE，TREM-1，F(xiàn)ASL，IL-2，IL-10，MCP-1，OPN，Resistin，CD163，G-CSF，F(xiàn)as，CD40，MCP-2，PAI-1，ST2，uPAR，ICAM-1，IL-4，IL-13，MIF，PF4，IL-12p70，VCAM-1，IL-1a，IL-6，IL-18，TNF-a，CRP，MIP-1a，VEGF)。

2 結(jié) 果

BD疾病組與對(duì)照組40種細(xì)胞因子水平差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。BD疾病組40種細(xì)胞因子水平與ESR，CRP，體液免疫及疾病活動(dòng)度的Pearson相關(guān)性分析顯示，Resistin與疾病活動(dòng)度成正相關(guān)，CD163與疾病活動(dòng)度負(fù)相關(guān)；PF4及IL-18與CRP正相關(guān)；IL-18與ESR正相關(guān)，OPN與ESR負(fù)相關(guān)；40種炎癥因子與體液免疫(IgG，IgM，IgA)未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性(表1)。

表1 40種細(xì)胞因子與疾病活動(dòng)度及CRP，ESR的Pearson相關(guān)性分析

BD：白塞??； BDCAF：疾病活動(dòng)度評(píng)分； CRP：C反應(yīng)蛋白；ESR：血沉.

3 討 論

BD是一種以慢性炎癥為主要特點(diǎn)的自身免疫性疾病，主要與遺傳、免疫、感染和基因相關(guān)，被認(rèn)為是外在因素作用于基因易感個(gè)體導(dǎo)致體內(nèi)免疫紊亂所致的疾病。炎癥因子在BD的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。BD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣，在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中存在多途徑的細(xì)胞體液免疫紊亂，通過高通量的細(xì)胞因子抗體芯片半定量檢測(cè)，可以同時(shí)發(fā)現(xiàn)其異常。本研究顯示，40種炎癥因子譜中，IL-18，OPN，PF4，Resistin及CD163與BD的疾病活動(dòng)度、炎癥指標(biāo)具有相關(guān)性。結(jié)合其他相關(guān)研究，推測(cè)這些細(xì)胞因子可能通過介導(dǎo)相關(guān)的免疫細(xì)胞，如中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞，從而在BD的發(fā)病過程中起作用[5-8]；IL-18通過激活Th1細(xì)胞免疫、OPN及CD163通過激活單核-巨噬細(xì)胞免疫、PF4及Resistin通過激活中性粒細(xì)胞，參與BD的發(fā)病過程。

IL-18主要由抗原提呈細(xì)胞(單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞)分泌，可誘導(dǎo)活化的Th1細(xì)胞產(chǎn)生大量的IFN-γ，是已知最強(qiáng)的IFN-γ的誘生因子。Belguendouz等研究發(fā)現(xiàn)，IL-18可作為疾病活動(dòng)度和療效預(yù)測(cè)的重要指標(biāo)[3,9]；Xu等的研究也發(fā)現(xiàn)，IL-18的基因多態(tài)性與BD相關(guān)[10]。本研究結(jié)果顯示，IL-18與ESR及CRP正相關(guān)，與上述結(jié)果類似。IL-12及IFN-γ是Th1細(xì)胞標(biāo)志性細(xì)胞因子，可促進(jìn)T細(xì)胞的增殖以及增強(qiáng)Fas L介導(dǎo)的Th1及NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，推測(cè)IL-18可能通過增強(qiáng)Th1的細(xì)胞免疫參與BD免疫失衡。

OPN是一種強(qiáng)大的單核-巨噬細(xì)胞化學(xué)趨化因子和黏附分子，能誘導(dǎo)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的粘附、遷移、增殖活化，促進(jìn)細(xì)胞因子IL-12，TNF-α，IFN-γ的釋放，增強(qiáng)Th1細(xì)胞免疫，還可通過促進(jìn)IL-17的分泌，促進(jìn)Th17細(xì)胞免疫，參與BD的發(fā)病過程。OPN可促進(jìn)血管生成，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)的關(guān)節(jié)軟骨破壞中起重要作用，還可通過調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)儲(chǔ)影響正常骨代謝，與多種風(fēng)濕性疾病相關(guān)，如RA、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體相關(guān)性血管炎[11]。Bassyouni等研究發(fā)現(xiàn)，BD患者血清中的OPN水平較健康人群升高，并與疾病活動(dòng)度、嚴(yán)重性及血管累及程度相關(guān)[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，OPN與ESR成負(fù)相關(guān)，與上述結(jié)果相反，考慮可能與本研究樣本量少、且多數(shù)患者經(jīng)治療后癥狀已緩解有關(guān)。

CD163屬于一種清道夫受體，可識(shí)別和清除體內(nèi)的內(nèi)源產(chǎn)物和一些外源物，可通過激活單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，分泌大量細(xì)胞因子，引起B(yǎng)D患者的免疫紊亂。Alpsoy等研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)激素治療后，BD患者體內(nèi)的CD163水平發(fā)生顯著改變[8]。本研究結(jié)果顯示，CD163與BD的活動(dòng)度呈負(fù)相關(guān)。

PF4由巨核細(xì)胞合成，是巨核細(xì)胞成熟和血小板活化的標(biāo)記物，屬于CXC趨化因子家族成員之一。研究發(fā)現(xiàn)，在RA、骨關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡中抗體生成增加，考慮PF4-肝素復(fù)合體參與多種免疫性疾病[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，炎癥因子PF4水平與CRP成正相關(guān)。炎癥、血管內(nèi)皮損傷和血液高凝狀態(tài)與BD密切相關(guān)，PF4參與BD的發(fā)病可能是其能促進(jìn)中性粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮粘附，IgG Abs和PF4-肝素復(fù)合體形成的免疫復(fù)合物結(jié)合并激活血小板，促進(jìn)血液凝固，參與BD的發(fā)病。

Resistin主要來源于脂肪細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞，促炎癥細(xì)胞因子可促使其表達(dá)水平明顯增加，Pehlivan等研究發(fā)現(xiàn)，與健康人比較，BD患者的TNF-a和Resistin水平升高，推測(cè)其可能與BD的發(fā)病機(jī)制及活動(dòng)度相關(guān)[15]。本研究中，Resistin與疾病活動(dòng)度成正相關(guān)，與上述結(jié)果類似，推測(cè)其參與BD的發(fā)病機(jī)制可能是通過促進(jìn)中性粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮粘附，產(chǎn)生活性氧，并且造成血管內(nèi)皮損傷和脂質(zhì)過氧化，引起血管炎，激活血小板，從而參與BD的發(fā)生[16-18]。

既往研究認(rèn)為，TNF-α，IL-1，IL-4，IL-6等炎癥因子在BD患者血清中的水平升高，其中TNF-α等因子與疾病的活動(dòng)度、炎癥指標(biāo)相關(guān)[1-4]。然而本研究未得出類似的陽(yáng)性結(jié)果，考慮可能與種族、入選患者的疾病亞型不同及BD本身疾病異質(zhì)性較大等因素有關(guān)，相關(guān)結(jié)論仍需進(jìn)一步減少入選患者異質(zhì)性、擴(kuò)大樣本等得以證實(shí)。

本研究尚存在不足之處，主要是納入實(shí)驗(yàn)的BD患者長(zhǎng)期接受免疫抑制藥物的治療，病情處于控制狀態(tài)，ESR、CRP、體內(nèi)炎癥因子水平及疾病活動(dòng)度降低，可能是與健康對(duì)照比較無明顯差異的原因之一。入組患者的臨床表現(xiàn)及受累系統(tǒng)不一，體內(nèi)炎癥因子水平差異較大，且本次實(shí)驗(yàn)樣本量不足，仍需進(jìn)一步增大樣本量，選擇新發(fā)未經(jīng)過治療的患者，盡量減少患者之間的異質(zhì)性，有條件的情況下可將系統(tǒng)受累嚴(yán)重程度進(jìn)行分類研究，以得到更有臨床意義的結(jié)果。