云南開(kāi)放大學(xué)/云南國(guó)防工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650223

月季花(RosachinensisJacq.)早期的藥用記載出自李時(shí)珍《本草綱目》，又名月月紅、四季花、月季紅、四香春、艷雪紅、勒泡，為薔薇科薔薇屬植物，分布于全國(guó)大部分地區(qū)，主產(chǎn)于云南、廣東、湖北和四川，全年均可采收[1]。月季花除具有觀(guān)賞性之外，其藥材為其干燥球形花蕾或微開(kāi)的花朵，氣清香，味淡和微苦。藥理學(xué)研究表明月季的花、根和葉均可入藥[2]。據(jù)報(bào)道月季花的主要活性成分為黃酮和酚酸類(lèi)化合物，另外還有芳香油、鞣質(zhì)和色素等[3-4]。中醫(yī)認(rèn)為其性味甘溫，有活血調(diào)經(jīng)、消腫解毒之功，主治月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、癰瘡腫毒、淋巴結(jié)核等[3]。在民間月季花作為一種常用的活血化瘀藥受到老百姓的歡迎，其中的黃酮苷類(lèi)化合物具有很強(qiáng)的藥理作用，例如槲皮素具有較強(qiáng)的抗腫瘤、抗病毒及抑制血小板聚集的作用[5-7]，山奈酚屬于目前急缺的廣譜抗菌中草藥[8]，萹蓄苷具有利尿、抑菌殺蟲(chóng)和抗氧化的作用[9-11]。目前我省各地薔薇科薔薇屬植物資源豐富，筆者研究這些化合物對(duì)于抗腫瘤、抗炎、抗衰老等藥物的開(kāi)發(fā)和利用具有一定的參考價(jià)值，同時(shí)研究代表藥物月季花中黃酮類(lèi)化合物的藥理作用和機(jī)制等，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用薔薇屬植物奠定了基礎(chǔ)。

本研究所運(yùn)用的技術(shù)為電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)，ESI-MS分析方法可獲得相關(guān)物質(zhì)的分子量、分子式及分子結(jié)構(gòu)的重要信息[12]。其優(yōu)點(diǎn)是分析快速、靈敏、分辨率高、樣品用量少，而且分析范圍廣，可用于氣體、液體、固體有機(jī)樣品的分析，使復(fù)雜的有機(jī)混合物的分離與鑒定能快速的一次完成。質(zhì)譜技術(shù)由于具有靈敏度高、分析速度快以及對(duì)雜質(zhì)承受能力強(qiáng)等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于分析復(fù)雜混合物[13]。筆者采用電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)[14]，通過(guò)直接進(jìn)樣的方法對(duì)云南境內(nèi)3種產(chǎn)地不同的月季花(彌勒、建水、安寧)新鮮花蕾樣品進(jìn)行分析[15]。由于產(chǎn)地不同，其化學(xué)成分也有一些差異[16]，因此建立一個(gè)微量和快速的定性及半定量分析方法，對(duì)不同產(chǎn)地的藥材進(jìn)行區(qū)分和辨別，對(duì)于正確合理使用該藥材具有重要的意義。

1 儀器與材料

ThermoQuestFinnigan LCQDECA電噴霧離子源質(zhì)譜檢測(cè)器(ThermoQuest LC/MS Division, San Jose, CA, USA)。甲醇為分析純?cè)噭?廣東光華化學(xué)廠(chǎng)有限公司)月季花分別采自彌勒、建水、安寧。

2 方法

2.1 溶液的制備 月季花各50 mg，浸泡于20 mL甲醇中，超聲波提取30 min，離心后取上清液待測(cè)。

2.2 測(cè)試條件 負(fù)離子模式檢測(cè)進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜及串聯(lián)質(zhì)譜分析。質(zhì)譜檢測(cè)器參數(shù)：霧化殼氣為氮?dú)?80uit)；霧化輔助氣也為氮?dú)?20uit)；毛細(xì)管溫度：350℃；噴射電壓：負(fù)離子模式下為4.5 kV；碰撞氣為氮?dú)猓慌鲎材芰糠秶?0%～40%；所有數(shù)據(jù)采集和處理采用FinniganXcaliburTMCore Data System Rev.1.2。

3 結(jié)果與討論

由于其他成分的負(fù)離子ESI-MS質(zhì)譜響應(yīng)不如黃酮類(lèi)化合物，故在3個(gè)產(chǎn)地月季花提取物的負(fù)離子ESI-MS質(zhì)譜圖中(見(jiàn)圖1-3)，主要見(jiàn)到的是一些黃酮及黃酮苷類(lèi)化合物的準(zhǔn)分子離子峰[M-H]-，而且這些準(zhǔn)分子離子峰的豐度較高，碎片峰較少，干擾不大。在月季花的ESI-MS質(zhì)譜圖中主要的峰有m/z 447、301、169、609、615、285、463、599、433等。結(jié)合ESI-MSn推測(cè)這些準(zhǔn)分子離子峰所對(duì)應(yīng)的黃酮等化合物(見(jiàn)表1)。不同產(chǎn)地的月季花主要成分都很相近，比如在3種不同產(chǎn)地的月季花提取物的負(fù)離子質(zhì)譜圖中均可以檢測(cè)到槲皮素、槲皮素-3-O-2″-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖苷、山萘酚-3-O-2″-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷，可見(jiàn)不同產(chǎn)地的月季花其主要黃酮成分大致相同。但是在一些微量成分上有一些差別，比如在彌勒和安寧產(chǎn)的月季花中均檢測(cè)到槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷，但是在建水產(chǎn)的月季花中沒(méi)有檢測(cè)到；在建水和安寧產(chǎn)的月季花中均檢測(cè)到槲皮素-3-O-6”-反式-香豆酰基-β-D-葡萄糖苷，但是在彌勒產(chǎn)的月季花中沒(méi)有檢測(cè)到；在建水產(chǎn)的月季花中有萹蓄苷，但是在彌勒和安寧產(chǎn)的月季花中均未檢測(cè)到。從3個(gè)產(chǎn)地月季花提取物的質(zhì)譜來(lái)看，除沒(méi)食子酸外，槲皮素的峰都最強(qiáng)(基峰)。

分別對(duì)表1所列幾個(gè)化合物的準(zhǔn)分子離子峰作串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-MSn)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步證明了黃酮苷類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)(見(jiàn)表2)，從而發(fā)現(xiàn)黃酮苷的裂解雖簡(jiǎn)單，但仍有規(guī)律可循。以月季花中含量最大的槲皮素為例具體分析，在ESI-MSn中得到m/z283、273、255、229和211等碎片離子，碎片m/z255可由碎片m/z283和273產(chǎn)生，槲皮素的裂解途徑示于圖4。另一個(gè)母核結(jié)構(gòu)山奈酚在ESI-MSn中得到m/z267、257、229、211、169、151等碎片離子，其裂解途徑示于圖5。

表1 不同產(chǎn)地月季花ESI—MSn分析結(jié)果

峰號(hào)[M—H]-化合物ABC1 447槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷++2 301槲皮素+++3 169沒(méi)食子酸++4 609槲皮素-3-O-6″-反式-香豆?；?β-D-葡萄糖苷++5615槲皮素-3-O-2″-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖苷+++6285山萘酚++7463槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷+++8599山萘酚-3-O-2″-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖苷+++9433萹蓄苷+

*A：彌勒產(chǎn)月季花；B：建水產(chǎn)月季花；C：安寧產(chǎn)月季花；+ 表示出峰明顯

表2 月季花中黃酮苷的ESI-MSn主要碎片信息

化合物化合物結(jié)構(gòu)ESI-MS[M H]-ESI-MSn主要離子裂解方式(A、B、C、D、E途徑見(jiàn)圖4-5)槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷477301, -鼠李糖基283, B273, A229 A槲皮素301283, B273, A257, A255, A and B229, A211 A槲皮素-3-O-6-反式-香豆?；?β-D-葡萄糖苷609463, -香豆?；?01, -葡萄糖基283, B257, A229 A槲皮素-3-O-2”-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖苷615463, -沒(méi)食子酰基301 -葡萄糖基283, B273, A255, A and B229, A 山萘酚285267, D257, C229, C211, C169, E151, E

槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷463301, -半乳糖基283, B273, A255, A and B229 A萹蓄苷433301, -阿拉伯糖基283, B273, A255, A and B229 A

綜上，通過(guò)月季花的甲醇總提取物直接進(jìn)樣法的ESI-MSn快速分析，建立了一種快速分析方法。對(duì)總提物進(jìn)行定性和半定量分析，能夠快速簡(jiǎn)便地判斷不同產(chǎn)地月季花藥材的品質(zhì)，預(yù)判藥材的化學(xué)成分。