吳彥

（兒童發(fā)展與學(xué)習(xí)科學(xué)教育部重點實驗室，東南大學(xué)生物科學(xué)與醫(yī)學(xué)工程學(xué)院，江蘇南京 210096）

目前，我國艾滋病的防治形勢依然嚴(yán)峻。截至2017年7月底，全國報告現(xiàn)存活HIV病毒感染者/AIDS病人728 270例，死亡223 798例[1]。我國實行艾滋病免費(fèi)抗病毒治療政策，采用多種藥物聯(lián)合用藥的高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法，以實現(xiàn)疾病防治。拉米夫定和奈韋拉平是我國一線免費(fèi)用藥方案中的重要組成部分。在實際服藥過程中，由于藥物毒副作用和外部環(huán)境的影響，患者往往不遵從醫(yī)囑服藥，導(dǎo)致用藥依從性低，從而降低抗病毒治療效果。而監(jiān)測患者體內(nèi)藥物濃度能有效評價服藥依從性，提高治療效果。

目前研究者建立了不同生物樣品中拉米夫定和奈韋拉平藥物濃度準(zhǔn)確定量的方法，但方法優(yōu)缺點各有不同。張麗軍等[2]曾從藥物理化性質(zhì)、LC-MS檢測方法以及藥代動力學(xué)參數(shù)三方面詳細(xì)闡述LC-MS法用于檢測血漿中抗艾滋病藥物濃度的研究進(jìn)展，但未提及從頭發(fā)中檢測藥物濃度，以及其他分析檢測技術(shù)。

本文從生物樣品和檢測技術(shù)角度，總結(jié)近年從不同生物樣品中檢測拉米夫定和奈韋拉平濃度的方法的優(yōu)缺點，進(jìn)而為后續(xù)抗HIV藥物濃度的檢測研究提供參考。

1 生物樣品的選取

生物樣品是藥物檢測研究中重要的實驗對象，合適的生物樣品更有利于實驗研究?，F(xiàn)有研究已選取多種生物樣品定量檢測人體內(nèi)拉米夫定和奈韋拉平藥物濃度。

本文對近幾年來研究選用的生物樣品進(jìn)行梳理，發(fā)現(xiàn)選擇的生物樣品主要分為兩大類。

（1）體液，如血漿、血液和尿液等。樣品中藥物濃度較高，對儀器檢測要求低，可反映藥物短時間內(nèi)的濃度變化，但血漿的采集成本較高，儲存要求嚴(yán)苛。

（2）固體組織，如頭發(fā)等。樣品中藥物濃度較低，對檢測方法要求高，但樣品的采集成本低，易于儲存，可反映藥物長期的濃度變化。因此，血漿等樣品適合短時間內(nèi)藥物濃度監(jiān)測和用藥依從性，而頭發(fā)則更適合于長期服藥依從性評價。

2 拉米夫定和奈韋拉平檢測技術(shù)

為適應(yīng)不同樣品的檢測要求，分析儀器從單一化向多種儀器聯(lián)用發(fā)展，越來越多先進(jìn)的分析方法被開發(fā)，并用于定量檢測生物樣品中拉米夫定和奈韋拉平。本文通過比較各種方法的技術(shù)參數(shù)，對國內(nèi)外先進(jìn)的檢測方法進(jìn)行分析，見表1。

2.1液相色譜法

由于血漿中藥物濃度較高，鄒尚榮等[3]就選用液相色譜，配以C18反相色譜柱，與紫外檢測器相連，在波長為268 nm處進(jìn)行檢測，建立了液相色譜-紫外法（LC-UV），同時檢測血漿中拉米夫定和奈韋拉平濃度。但該方法的定量限較高，不適合低濃度樣品的檢測。

2.2氣相色譜法

相較于LC-UV法，氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS）能減少雜質(zhì)峰的干擾，具有更好的靈敏度和特異性。Vogel等[4]建立了檢測血漿中奈韋拉平濃度的GC-MS法，該方法的定量限低于LC-UV法。但抗HIV藥物不易氣化，需要衍生為易氣化的化合物，從而導(dǎo)致實驗操作繁瑣。

表1 生物樣品中拉米夫定和奈韋拉平檢測的方法參數(shù)

2.3 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS）

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS）具有高靈敏度和高選擇性，樣本的前處理簡單，尤其適合低濃度生物樣品檢測，可實現(xiàn)多種物質(zhì)快速分離和同時定量分析，被廣泛用于藥物濃度檢測研究。質(zhì)譜系統(tǒng)常用的電噴霧電離離子化源（ESI）適合極性和弱極性物質(zhì)檢測，而抗HIV藥物的極性也較強(qiáng)，現(xiàn)有研究主要采用ESI為離子化源。Kromdijk等[5]和李力等[6]就選用ESI正離子模式，分別建立檢測血漿中拉米夫定濃度的LC-MS法。Valluru等[7]則選用ESI負(fù)離子模式建立LC-MS法，實現(xiàn)同時檢測血漿中拉米夫定和奈韋拉平濃度，但回收率稍低于檢測標(biāo)準(zhǔn)。對于藥物濃度低的頭發(fā)樣品，Yan等[8]和Huang等[9]也選用ESI正離子模式，分別建立檢測頭發(fā)中拉米夫定和奈韋拉平濃度的LC-MS法。上述LC-MS方法均表現(xiàn)出良好的檢測性能，并被用于長期依從性評價研究。

Sichilongo等[10]以 LC-UV、GC-MS和 LC-MS三種方法檢測血漿中奈韋拉平濃度，對比發(fā)現(xiàn)LC-MS法檢測限、定量限最低，方法特異性更好。

3 結(jié)論

梳理近年來抗HIV藥物研究可以看出，由于血漿中藥物濃度高，對檢測要求低，研究者選用的生物樣品以血漿等居多，用于臨床藥物濃度監(jiān)測，評價短期用藥依從性。隨著檢測技術(shù)的發(fā)展，頭發(fā)作為新型生物樣品，也逐漸被用于檢測藥物濃度，評價長期用藥依從性。

較之HPLC-UV和GC-MS等方法，LC-MS法具有更高的靈敏度和選擇性，是目前生物樣品中拉米夫定和奈韋拉平的主要檢測方法。此外，ESI離子化源檢測范圍較廣，常用于LC-MS法測定拉米夫定和奈韋拉平。

生物樣品中藥物濃度的檢測可評價患者服藥依從性、指導(dǎo)個性化用藥，對艾滋病抗病毒治療具有重要意義。本文對國內(nèi)外有關(guān)拉米夫定和奈韋拉平檢測方法研究進(jìn)行詳細(xì)綜述，將為后續(xù)拉米夫定和奈韋拉平等藥物濃度檢測方法研究提供參考。

[1]中國疾病預(yù)防控制中心.2017年7月全國艾滋病性病疫情[J].中國艾滋病性病,2017,(8):473.

[2]張麗軍,姚亞敏,孫建軍,等.LC-MS檢測艾滋病常用藥物濃度的研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2009,26(13):1112-1115.

[3]鄒尚榮,李燕青,周波,等.HPLC法同時測定人血漿中拉米夫定、齊多夫定和奈韋拉平的濃度[J].中國藥房,2014,25(18):1665-1668.

[4]N.B.M.Vogel,J.C.Wasmuth,J.Emmelkamp,et al.Determination of Nevirapine in Plasma by GC-MS[J].Journal of Chromatographic Science,2010,48(2):91-94.

[5]W.Kromdijk,S.A.Pereira,H.Rosing,et al.Development and Validation of an Assay for the Simultaneous Determination of Zidovudine,Abacavir,Emtricitabine,Lamivudine,Tenofovir and Ribavirin in Human Plasma Using Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry[J].Journal of Chromatography B,2013,919-920(12):43-51.

[6]李力,關(guān)業(yè)勍,沈琦,等.高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法同時測定人血漿中5種核苷類抗病毒藥物濃度[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2015,31(9):747-750.

[7]R.K.Valluru,B.R.B.Phani,S.S.Kalyan,et al.High Throughput LC-MS/MS Method for Simultaneous Determination of Tenofovir,Lamivudine and Nevirapine in Human Plasma[J].Journal of Chromatography B,2013,931(6):117-126.

[8]J.Yan,J.Liu,B.Su,et al.Lamivudine Concentration in Hair and Prediction of Virologic Failure and Drug Resistance among HIV Patients Receiving Free ART in China[J].Plos One,2016,11(4):e0154421.

[9]Y.Huang,Q.Yang,K.Yoon,et al.Microanalysis of the Antiretroviral Nevirapine in Human Hair from HIV-infected Patients by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry[J].Analytical &Bioanalytical Chemistry,2011,401(6):1923-1933.

[10]K.Sichilongo,M.Chinyama,A.Massele,et al.Comparative Chromatography-mass Spectrometry Studies on the Antiretroviral Drug Nevirapine-analytical Performance Characteristics in Human Plasma Determination[J].Journal of Chromatography B,2014,945-946(2):101-109.