亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        利用專家系統(tǒng)評估多菌靈殺菌劑的安全性

        2018-03-01 11:58:20劉超林文鋒程樹軍
        生物化工 2018年1期

        劉超,林文鋒,程樹軍

        (廣東出入境檢驗檢疫局,廣東 廣州 510623)

        植物保護劑的廣泛使用帶來了嚴重的農(nóng)藥殘留問題,農(nóng)藥的健康風險和環(huán)境風險評估,不僅要考慮農(nóng)藥殘留物本身,還要考慮包括環(huán)境生物中的代謝、降解及反應(yīng)產(chǎn)物,如哺乳動物、禽類、家畜、植物內(nèi)的代謝物數(shù)據(jù)和環(huán)境歸宿(包括土壤、水/沉積物中的微生物降解)數(shù)據(jù)以及毒性數(shù)據(jù),這些信息需要大量的試驗支持。考慮到動物福利和成本效益等因素,充分利用包括計算機模型和體外測試在內(nèi)的替代方法是一條可行的途徑。一些模擬新陳代謝的計算機方法,如基于知識的毒性定性預測系統(tǒng)(Derek)、基于結(jié)構(gòu)參數(shù)集的優(yōu)化方法(OASIS TIMES)和化學物質(zhì)生物活性預測(PASS)等,已陸續(xù)應(yīng)用于化學物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物毒性的預測[1]。本文以多菌靈為例,用2種計算機專家系統(tǒng)預測微生物和哺乳動物新陳代謝產(chǎn)生的潛在代謝物,用于健康危害評估[2-4]。

        1 多菌靈殺菌劑模擬

        1.1 多菌靈殺菌劑的特點

        多菌靈是甲基苯并咪唑-2-氨基甲酸酯或2-(苯并咪唑基)氨基甲酸甲酯(IUPAC)的通用名稱,它是一種使用范圍廣的內(nèi)吸性殺菌劑,屬于高選擇性苯并咪唑類化合物,主要用于收割前后或者儲存植物的病害防治,能有效抵制多種子囊菌、擔子菌類和半知菌類。歐盟2006/135/EC第一次把多菌靈列入批準使用的植物保護劑指令附件Ⅰ內(nèi)。歐洲食品安全局(EFSA)重新對多菌靈進行了評估。EFSA審查了多個數(shù)據(jù)的變化差距,其中包括紫外光譜、溶解度、電離常數(shù)、土壤中的好氧生物降解途徑等方面的評估。為了探索用代謝模擬工具來填補數(shù)據(jù)差距的可能性,有人用化學反應(yīng)活性和化學歸宿軟件工具CRAFT Explorer v1.0模擬了多菌靈的生物降解途徑,預測其有多種潛在代謝物。對于多菌靈的哺乳動物代謝已有大量文獻報道,利用這些數(shù)據(jù),可對現(xiàn)有的預測工具(如Meteor 12.0.0和OECD QSAR應(yīng)用工具箱2.0)中關(guān)于代謝模擬的適用性進行評估。

        苯并咪唑殺菌劑的作用方式主要依靠徹底親和真菌微管(β微管蛋白亞單位)破壞其增殖過程,如有絲分裂紡錘體的形成、核分裂、細胞骨架形成。對于不同的有機體,苯并咪唑殺菌劑的選擇性毒性及其相對效力有很大不同,主要取決于化學品本身,及所作用的微管蛋白的結(jié)構(gòu)和親和作用。但是苯并咪唑的也會對其他真核細胞產(chǎn)生毒性作用,例如引起植物染色體畸變、改變?nèi)~綠體的光合作用、影響萌芽和幼苗生長、破壞其他生理過程,改變植物細胞代謝,導致植物形態(tài)發(fā)生變化。苯并咪唑殺菌劑會被土壤有機質(zhì)集中吸附,被非目標植物吸收導致對作物產(chǎn)生有害影響。

        此外,苯并咪唑殺菌劑對于哺乳動物的毒性也備受關(guān)注,因為多菌靈不僅作為母體“活性”成分,而且還是苯菌靈[1-(正丁胺基甲酰)苯并咪唑-2-氨基甲酸甲酯]和甲基硫菌靈的代謝產(chǎn)物。哺乳動物毒性試驗表明,多菌靈具有一些毒性特點,如對皮膚、眼睛無刺激性,可引起皮膚致敏,大鼠的短期毒性試驗表明可導致肝重量增加、睪丸重量減輕、無精子癥和體重減輕等。由于對有絲分裂紡錘體蛋白干擾的原因,多菌靈可導致(體內(nèi)和體外的)染色體數(shù)目畸變,但是不會導致基因突變或者染色體畸變。大鼠和兔的經(jīng)口發(fā)育毒性試驗證明多菌靈是一種發(fā)育毒劑和致畸劑?;谏鲜鲅芯?,多菌靈的分類標識為致突變原Cat.2(R46)和生殖Cat.2(R60-61),同時提議其為R43(與皮膚接觸可能會導致過敏)。

        在代謝物的毒性方面,多菌靈乙酸可代謝為2-AB(氨基苯并咪唑),研究表明后者急性毒性比母體更劇烈,而短期毒性相同。多菌靈可能是來自苯菌靈殺菌劑的代謝產(chǎn)物,通過分裂正丁胺基甲酰母體側(cè)鏈產(chǎn)生。它可由甲基硫菌靈形成,通過硫脲基甲酸酯分裂,硫分裂然后環(huán)化形成咪唑部分。多菌靈的毒性與相關(guān)前體的毒性相比時,得出以下結(jié)論:(1)與苯菌靈相比,多菌靈的急性毒性與之相同,短期毒性和長期毒性都更高,生殖、發(fā)育毒性相同;(2)與甲基硫菌靈相比,多菌靈的急性和長期毒性相同,短期、生殖和發(fā)育毒性更高[5]。

        1.2 用CRAFT模擬多菌靈的生物代謝

        1.2.1 CRAFT法和模型設(shè)置

        為了填補科學數(shù)據(jù)的不足,使用CRAFT Explorer v1.0軟件進行多菌靈生物降解途徑的模擬。該軟件由分子網(wǎng)絡(luò)股份有限公司開發(fā),源自明尼蘇達大學生物催化和生物降解數(shù)據(jù)庫(UM-BBD)的各種不同環(huán)境反應(yīng)類型的知識庫。簡單來講,為了預測多菌靈的化學反應(yīng)性和歸宿,應(yīng)把多菌靈參與的一系列降解反應(yīng)及其可能得到的產(chǎn)物集中在一起,構(gòu)建模擬降解途徑作為基礎(chǔ),然后用CRAFT Explorer生成所有從多菌靈開始一直到代謝終點之間一切能想到的反應(yīng),最終生成三個預測的變量:(1)一個適用于估算的概率模型;(2)取消進一步降解時的標準;(3)概率閾值。

        CRAFT Explorer概率模型由幾個反應(yīng)規(guī)律、反應(yīng)類型和分配給各個規(guī)律的概率種類構(gòu)成。反應(yīng)類型是對化學轉(zhuǎn)化的一般定義,提供反應(yīng)形式并注明必要的子結(jié)構(gòu)特性和轉(zhuǎn)化定義。反應(yīng)規(guī)律執(zhí)行某個反應(yīng)類型,把一般定義與具體的反應(yīng)條件和似然估計聯(lián)系起來。軟件中提供了兩個可用的概率模型,即UM-BBD概率模型和酯水解樣品模型。

        UM-BBD概率模型是一種生物轉(zhuǎn)化規(guī)律模型,用于評定生物降解反應(yīng)規(guī)律時,充分考慮了氧氣、土壤(濕度適中)或者水體、pH值(中性)、溫度(25℃)、無競爭性或者有其他有毒的化合物這些反應(yīng)條件。在模擬生物降解樹圖中,用下列分配給每個反應(yīng)規(guī)律的模型種類估算規(guī)定條件下每種已確認的反應(yīng)類型的可能性:(1)極有可能發(fā)生的反應(yīng),即肯定發(fā)生、最優(yōu)先發(fā)生的反應(yīng);(2)很可能發(fā)生的反應(yīng),即幾乎所有微生物都能催化,并與存在于分子里的功能團發(fā)生特定反應(yīng)時使用;(3)中性,適用于那些常見的,但在每個模擬系統(tǒng)中并不一定會發(fā)生的反應(yīng)。例如,由于每個基質(zhì)的原因,有些極可能發(fā)生的反應(yīng)可能會,也可能不會發(fā)生,這需要逐案調(diào)查。

        根據(jù)UM-BBD概率模型預測,得到多菌靈生物降解模型的概率閾值設(shè)置如下:0~0.2表示不會發(fā)生的反應(yīng)(紅色);0.3~0.4表示不太可能發(fā)生的反應(yīng)(橙色);0.5~0.6表示可能發(fā)生的反應(yīng)(黃色表示0.5,淺綠色表示0.6);0.7~0.8表示很可能發(fā)生的反應(yīng)(綠色);0.9~1.0表示極有可能發(fā)生的反應(yīng)(深綠色)。

        接下來是運行CRAFT Explorer模擬程序,前提是要知道發(fā)生的反應(yīng)量、生成的產(chǎn)物量以及生物降解的步驟數(shù)量,如生物降解層數(shù),在模擬程序運行時,軟件會把這些因素都考慮在內(nèi)。假如降解步驟增加,所要確認的產(chǎn)物的數(shù)量也相應(yīng)增多,因為要重復提交所有分子(如在各個降解層生成的產(chǎn)物)。為了有效運行多菌靈生物降解模擬程序,應(yīng)選擇步驟的最大數(shù)(如5)使模擬運行最為徹底。最終生物降解模擬前的最后一步是選擇總概率閾值。根據(jù)CRAFT Explorer的解釋,反應(yīng)產(chǎn)物的總概率可以定義為降解樹圖中之前所有產(chǎn)物中產(chǎn)生其中一種產(chǎn)物的概率,如圖1所示選擇總概率閾值可以讓CRAFT生成不太可能產(chǎn)生的產(chǎn)物減少。閾值越大,軟件要確定的產(chǎn)物越少。假如閾值設(shè)置為0.6,則CRAFT Explorer沒有生成總概率值小于0.6的產(chǎn)物。

        圖1 CRAFT總概率閾值的定義

        1.2.2 多菌靈生物降解樹圖

        圖2的生物降解樹圖直觀地說明了多菌靈及其代謝物的整個過程,包括產(chǎn)生每個已確定的降解產(chǎn)物的所有降解路線。多菌靈的生物降解途徑由17個降解步驟構(gòu)成,產(chǎn)生15種不同的降解產(chǎn)物(P2~P16),即從P2[2-氨基苯并咪唑(2-AB)]到P16[1氫-苯并咪唑-2-基氨基甲酸酯(2-氨基甲酸苯并咪唑)][3]。由于產(chǎn)生的所有代謝物與特定的反應(yīng)類型和特定的UM-BBD反應(yīng)規(guī)律有關(guān),所以CRAFT確認這兩種情況一共產(chǎn)生了7種反應(yīng)類型。總體上看,發(fā)生頻率最高的反應(yīng)類型是UM-BBD bt0005(鄰-未取代的芳香化合物,鄰-二羥基芳族)和UM-BBD bt0367(鄰-未取代的芳香化合物,鄰-雙氫二羥基芳族),兩者反應(yīng)類型都與鄰-未取代的芳香化合物的雙加氧反應(yīng)以及之后的氧化反應(yīng)有關(guān),導致鄰苯二酚衍生物形成,每種類型都導致不同降解層有4種不同降解產(chǎn)物形成。其他反應(yīng)規(guī)律還包括bt0003(醛羧酸酯)、bt0023(二脂族醚乙醇+醛)、bt0065(1-氨基酸-2-未取代的芳香化合物、鄰-二羥基芳族+胺)、bt0318(氨基甲酰胺+碳酸鹽)、bt0384(單烷基碳酸鹽,烷基-醇)。

        圖2 CRAFT Explorer1.0模擬的多菌靈生物降解樹圖

        1.3 用Meteor模擬多菌靈的哺乳動物代謝

        1.3.1 Meteor法和模型

        多菌靈殺菌劑的哺乳動物代謝模擬采用Lhasa公司開發(fā)的Metero v12.0.0軟件。其原理是根據(jù)建立、儲存于知識庫里的新陳代謝方面的專業(yè)知識規(guī)范進行模擬。根據(jù)Metero知識庫的生物轉(zhuǎn)化規(guī)則和推理規(guī)則對多菌靈分子結(jié)構(gòu)進行處理,預測與哺乳動物有關(guān)的代謝產(chǎn)物,生成代謝物的數(shù)量限制在400以內(nèi),任何給定的途徑中最多生成步驟只有四步,生成多菌靈生物轉(zhuǎn)化過程由三步構(gòu)成:

        (1)根據(jù)多菌靈的分子結(jié)構(gòu)搜索知識庫查找生物轉(zhuǎn)化,生成一份潛在代謝物清單;

        (2)根據(jù)絕對推理規(guī)則排除生成的代謝物,絕對推理規(guī)則是以文獻中觀察到的發(fā)生率和產(chǎn)出率、基質(zhì)的物理化學性質(zhì)(Log P和分子重量)、基質(zhì)是否是查詢結(jié)構(gòu)、是否是Meteror生成的代謝物等因素為基礎(chǔ),從而用指定的概率水平選擇代謝物,編制一份更短的代謝物清單。Meteor中與預測的生物轉(zhuǎn)化和代謝物有關(guān)的不確定術(shù)語包括:“可能”(至少有一個有力的正面論據(jù),并且沒有反對的論據(jù))、“似乎可能”(有力的證據(jù)支持)、“模棱兩可”(支持和反對的證據(jù)力度相同)、“可疑”(有力證據(jù)反對該假設(shè))和“不可能”(至少有一個有力的反對論據(jù)證明該假設(shè)是錯誤的,且沒有正面論據(jù));

        (3)根據(jù)相關(guān)推理規(guī)則,通過對比競爭生物轉(zhuǎn)化以及確定哪個有優(yōu)先轉(zhuǎn)化權(quán)來排除更多代謝物。相關(guān)推理規(guī)則只包括最可能的(即“1級”)生物轉(zhuǎn)化作用。

        在完成Meteor分析后,以代謝樹圖的形式把與查詢結(jié)構(gòu)相匹配的知識庫生物轉(zhuǎn)化過程形象地表現(xiàn)出來。

        1.3.2 多菌靈代謝樹圖

        用Meter12.0.0模擬多菌靈代謝樹圖的結(jié)果如圖3所示,從位于頂部的查詢結(jié)構(gòu)(Q)開始,其后是第一代代謝物(M1—M3),其次是它們在各自母體下面的更多代的代謝物(M4)。該軟件除了可以提供多靈菌生物轉(zhuǎn)化作用的整個途徑外,還可以提供轉(zhuǎn)化的概率水平信息。

        圖3 由Meteor 12.0.0模擬的多菌靈代謝樹圖

        Meteor12.0.0可以識別多菌靈在哺乳動物體內(nèi)的兩種一期生物轉(zhuǎn)化反應(yīng),即水解氨基甲酸酯和羥基化稠苯反應(yīng),以及一種二期生物轉(zhuǎn)化反應(yīng),即醛糖酸化芳香族醇反應(yīng)。每個生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)由知識庫參考號和參考名進行識別。

        水解氨基甲酸酯和羥基化稠苯反應(yīng)被認為是可能發(fā)生在哺乳動物體內(nèi)的反應(yīng),預測由兩種一期反應(yīng)產(chǎn)生的代謝物M1、M2、M3的概率為“似乎可能”,其主要根據(jù)是多菌靈的親脂特性。非親脂性的反應(yīng)相關(guān)的概率只能是“可疑”。Meteor還提供了一種篩選特殊生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)中間體的附加選項,如多菌靈在氨基甲酸酯水解反應(yīng)中形成的兩種中間體,即異氰酸鹽和氨基甲酸,由于其預期的親電性高,所以異氰酸鹽屬于“可能加合形成的”中間體。另外,由于氨基甲酸脫羧基作用極為快迅速,不會聚集或著很難發(fā)現(xiàn),所以它被稱為“認定的”中間體(Meteor種類-ap)。對于稠苯化合物的羥基化反應(yīng),代謝物的過程中,應(yīng)用說明2(3)位置比1(4)位置更可能發(fā)生反應(yīng)的關(guān)于氮的補充推理規(guī)則。對于二期生物轉(zhuǎn)化,Meteor12.0.0可以確定芳香族醇醛糖酸化反應(yīng)類型。其發(fā)生概率完全只取決于基團的親脂性,由于基團M3的親脂性為中性,所以估計反應(yīng)為“似乎可能”,因為基團親脂性高,則醛糖酸化反應(yīng)被認為是“可能”的反應(yīng),基質(zhì)親脂性低,則被認為是“模棱兩可的”反應(yīng)。另外,芳香族醇(苯酚和芳雜環(huán)類似物)硫酸化反應(yīng)被認為是醛糖酸化反應(yīng)的競爭反應(yīng),但是最終發(fā)生該反應(yīng)的可能性更低。上述多菌靈的結(jié)構(gòu)及所有生成的一期和二期生物轉(zhuǎn)化代謝物的詳細見表1。

        表1 由Meteor12.0.0 生成的多菌靈代謝物(警示結(jié)構(gòu)標為紅色)

        2 結(jié)果與討論

        2.1 多菌靈的生物降解

        根據(jù)文獻綜合分析,多菌靈在裸土里被分解時,其半反應(yīng)期為6~12個月,草皮里的半反應(yīng)期為3~6個月,有氧和無氧條件下,在水中的半反應(yīng)期分別為2個月和25個月。主要的微生物代謝產(chǎn)物是2-氨基苯并咪唑(2-AB),然后2-AB被進一步生物降解。

        本文用CRAFT軟件預測了多菌靈的P3、P4、P5、P6和所有“二醇”衍生物,其中預測2-AB主要代謝產(chǎn)物,并確認了很多理論上會產(chǎn)生的產(chǎn)物(見表1)。這些預測結(jié)果有助于對該物質(zhì)進行風險評估,了解其主要生物降解路線及產(chǎn)物,便于確定進一步的研究方向。但不能把預測結(jié)果直接用于填補目前的數(shù)據(jù)空白,也不能用于決策。因為,用于監(jiān)管目的還應(yīng)考慮更充足的信息,例如:模擬工具的局限性,證據(jù)是否充分和足夠(例如:可能有某些降解物/代謝物產(chǎn)生的部分證據(jù)),如何用(預測的)毒理學資料補充代謝物信息(例如用QSAR預測工具)等。

        2.2 多菌靈的哺乳動物代謝

        目前,關(guān)于多菌靈哺乳動物代謝途徑的文獻比較多,包括用大鼠、小鼠、兔、狗、羊和牛的代謝研究。研究表明多菌靈生物轉(zhuǎn)化的基本途徑與羥基化作用有著密切聯(lián)系,其主要代謝物為氨基甲酸甲酯5-羥基苯并咪唑-2-基(5-HBC),次要產(chǎn)物是氨基甲酸甲酯5,6-二羥苯并咪唑-2-基(5,6-DHCB)。羥基化代謝物較容易形成可排泄的硫酸鹽和葡萄糖醛酸結(jié)合物。還有少量的5,6-HOBC氮氧化物。水解作用的主要代謝物是2-氨基苯并咪唑(2-AB)。

        比較后發(fā)現(xiàn),Meteor12.0.0應(yīng)用工具箱預測的代謝物和實驗確認的代謝物差異并不大,主要取決于軟件使用者選定的限制條件,這對于預測的準確性非常關(guān)鍵。由于Meteor用于預測代謝途徑的概率級別為“似乎可能”,所以它只確認多菌靈羥基化作用的主要產(chǎn)物(如5-HBC),并不預測次要代謝物(5,6-DHBC)。同樣,預測葡萄苷酸化5-HBC產(chǎn)生的代謝物(5-HBC-G),而不預測競爭性硫酸化反應(yīng)產(chǎn)生的副產(chǎn)物(5-HBC-S),因為該反應(yīng)的概率沒有達到“似乎可能”級別。

        如果用不同的Meteor初始設(shè)置來模擬多菌靈的哺乳動物代謝物,可能會得到不同的預測結(jié)果。首先,把最小概率從“似乎可能”改成“模棱兩可”并且選擇“全程”選項,則可模擬產(chǎn)生323種不同的預測代謝物,不僅有來自原始模擬確認的生物轉(zhuǎn)化(如水解氨基甲酸酯、羥基化稠環(huán)和葡萄苷酸化芳香族醇)產(chǎn)生的代謝物,還有如氮氧化芳香氮等概率為“模棱兩可”的其他反應(yīng)產(chǎn)生的代謝物,預測結(jié)果會導致形成實驗確認的代謝物(如5,6-HOBC-氮氧化物)。可見,代謝模擬的結(jié)果完全取決于使用者指定的軟件設(shè)置值,因此必須根據(jù)調(diào)查目的仔細選擇軟件設(shè)置值。

        2.3 微生物降解與哺乳動物代謝的相似之處

        就微生物降解與哺乳動物代謝之間的相似之處來講,在任何情況下,水解和羥基化都是最重要的反應(yīng)。所有軟件工具都能確認主要多菌靈代謝物2-氨基苯并咪唑(2-AB),它的急性毒性比母體化合物(非劇毒)高。很多母體分子或者形成的(中間體)代謝物的羥基化產(chǎn)物由三種軟件工具進行確認,而這些軟件確認的產(chǎn)物多菌靈哺乳動物代謝的實驗數(shù)據(jù)相一致。

        3 結(jié)論

        大多數(shù)代謝模擬工具并不僅有唯一的一組預測結(jié)果,使用者應(yīng)根據(jù)調(diào)查目的,通過更改模型限制條件,模擬多種生成途徑和代謝物的可能性。CRAFT Explorer和Meteor都能根據(jù)使用者的調(diào)查目的,擴大或者縮小模擬的范圍來估算形成特定代謝物的概率。這也為使用者完善預測提供了一個合理依據(jù)。如果知道被軟件忽略的反應(yīng)(由于不可能發(fā)生),使用者可以用自己掌握的知識來決定是否也要考慮遺漏的生物轉(zhuǎn)化。如果研究的目的是要確認相關(guān)的有毒代謝物,可以把代謝模擬的結(jié)果和所知道的或預計的代謝物的毒理性質(zhì)一起加以考慮。得到預測結(jié)果后,還可以結(jié)合其他毒理學理論,如根據(jù)TTC法,將代謝剖析圖與母體化合物的毒理學剖析圖進行比較、評估,判定是否任何相關(guān)的有毒代謝物的TTC閾值都小于母體化合物。如果把計算機模擬、現(xiàn)場監(jiān)測和實驗室數(shù)據(jù)整合使用,可以為制定管理決策提供更豐富的預測支持[6]。

        [1]程樹軍.化妝品評價替代方法標準實施指南[M].北京:中國標準出版社,2017

        [2]Berglof T,Van Dung T,Kylin H & Nilsson I.Carbendazim sorptiondesorption in Vietnamese soils[J].Chemosphere,2002,48:267-273.

        [3]CRAFT (Chemical Reactivity and Fate Tool) Explorer 1.0[Z].Molecular Networks GmbH,Erlangen,Germany,http://www.molecular-networks.com/.

        [4]Dimitrov SD,Breton R,Macdonald D,et al.Quantitative Prediction of Biodegradability,Metabolite Distribution and Toxicity of Stable Metabolites[J].SAR and QSAR in Environmental Research,2002,13(3-4):445-455.

        [5]Dimitrov SD,Kamenska VB,Walker JD,et al.Predicting the Biodegradation Products of Perfluorinated Chemicals Using CATABOL[J].SAR and QSARin Environmental Research,2004,15(1):69-82.

        [6]EFSA.Applicability of QSAR analysis to the evaluation of the toxicological relevance of metabolites and degradates of pesticide active substances for dietary risk assessment[J/OL].2010,http://www.efsa.europa.eu/en/scdocs/scdoc/50e.htm

        国产美女a做受大片免费| 国产尤物av尤物在线观看| 国产全肉乱妇杂乱视频| 国产91对白在线观看| 国产av大片久久中文字幕| 亚洲综合极品美女av| 777午夜精品免费观看| 国产午夜亚洲精品理论片不卡| 日韩亚洲午夜精品一区二区三区 | 高清不卡一区二区三区| 99爱这里只有精品| 插入中文字幕在线一区二区三区| 国产亚洲91精品色在线| 无码字幕av一区二区三区| 亚洲av无码专区亚洲av桃| 色综合久久五月天久久久| 19款日产奇骏车怎么样| 国偷自产视频一区二区久| 日韩在线看片| 熟妇人妻丰满少妇一区| 人人妻人人澡人人爽精品日本| 九九精品国产亚洲av日韩| 久久综合视频网站| 中文字幕东京热一区二区人妻少妇| 久久精品国产亚洲av果冻传媒| 秋霞鲁丝片av无码| 国产在线AⅤ精品性色| 91精品久久久中文字幕| 小蜜被两老头吸奶头在线观看| 成年女人免费v片| 亚洲国产av精品一区二| 精品国产一区二区三区2021| 老头巨大挺进莹莹的体内免费视频| 超级碰碰人妻中文字幕| 中文字幕久久久人妻人区| 人人色在线视频播放| 亚洲最大成av人网站| 亚洲av网站在线免费观看| 国产乱人对白| 偷窥村妇洗澡毛毛多| 日本道免费一区日韩精品|