楊澤林，巫廷建，凌洪權(quán)，孫 燕，董春霞，趙 曼，李永強(qiáng)，熊仲良

（1.重慶市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，重慶 401120；2.璧山區(qū)養(yǎng)殖業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，重慶 401120）

禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類（家禽和野禽）感染和/或疾病綜合征[1]。H5、H7亞型高致病性流感具有潛伏期短、傳播快、發(fā)病急、發(fā)病率和死亡率高等特點(diǎn)，不僅對(duì)家禽造成嚴(yán)重危害，也對(duì)國際貿(mào)易有嚴(yán)重影響，還對(duì)人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅[2-3]。繼H5亞型禽流感強(qiáng)制免疫之后，農(nóng)業(yè)部下發(fā)通知[4]，要求自2017年秋季開始，對(duì)家禽實(shí)施H7亞型流感強(qiáng)制免疫。為進(jìn)一步掌握重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活苗的免疫效果，了解其抗體變化和影響因素，開展了本次免疫效果監(jiān)測，從而為做好禽流感預(yù)防免疫工作提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 控制性試驗(yàn)

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 烏皮紅冠土雞100只。

1.1.2 疫苗 重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活苗（H5N1 Re-8株+H7 Re-8株）：青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)日期20170624，生產(chǎn)批號(hào)170204501。

1.1.3 抗體檢測試劑 禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原（Re-8株）：青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)160053301，有效日期20180511；禽流感病毒H7亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原（H7N9株）：哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)2017007，生產(chǎn)日期20170519，有效期2年。

1.1.4 免疫劑量和采樣時(shí)間 免疫劑量按照廠家說明書，每羽0.3 mL。免疫后2 d內(nèi)，逐只觀察和記錄免疫副反應(yīng)。分別在首免后15 d和22 d翅下靜脈采血1次；每次隨機(jī)采集30羽份，按常規(guī)方法分離血清。

1.1.5 檢測方法 按《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936—2003），采用血凝-血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行抗體檢測。抗體滴度≥4 log2，判為免疫合格。

1.1.6 數(shù)據(jù)處理與分析 對(duì)各組的抗體檢測結(jié)果按病種進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)。

1.2 大面積臨床監(jiān)測

1.2.1 監(jiān)測對(duì)象 2017年10月9日至10月20日，在云陽、璧山、忠縣、萬盛和長壽5個(gè)區(qū)縣的14個(gè)規(guī)模場和19個(gè)散養(yǎng)戶，共采集免疫雞血清414份。

1.2.2 疫苗 政府招標(biāo)采購疫苗。

1.2.3 檢測試劑和檢測方法 同1.1.3和1.1.5。

2 結(jié)果

2.1 控制試驗(yàn)

2.1.1 免疫副反應(yīng) 試驗(yàn)雞未見免疫副反應(yīng)發(fā)生。

2.1.2 H5亞型禽流感抗體效價(jià) 30份血清中，首免疫15 d后合格的3份，合格率為10.00%；首免22 d后合格的18份，合格率為60.00%（表1）。

2.1.3 H7亞型禽流感抗體效價(jià) 30份血清中，首免15 d后合格的21份，合格率為70.00%；首免22 d后合格的28份，合格率為93.33%（表2）。

2.2 大面積臨床監(jiān)測

2.2.1 H5亞型禽流感抗體監(jiān)測 共對(duì)414份雞血清進(jìn)行了H5亞型禽流感抗體監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)免疫抗體合格382份，平均合格率為92.27%（表3）。其中：5個(gè)區(qū)縣的H5亞型禽流感抗體免疫合格率在66.67%～98.89%之間；蛋雞合格率為99.11%（223/225），肉雞合格率為84.13%（159/189）；規(guī)模場合格率為91.67%（275/300），散養(yǎng)戶合格率為93.86%（107/114）。

表2 H7亞型禽流感抗體監(jiān)測情況匯總

表3 5個(gè)區(qū)縣雞血清H5亞型禽流感抗體監(jiān)測情況匯總

2.2.2 H7亞型禽流感抗體監(jiān)測 414份免疫雞血清中，合格315份，合格率為76.09%（表4）。其中：5個(gè)區(qū)縣的H7亞型禽流感抗體免疫合格率在33.33%～94.44%之間；蛋雞合格率為92.00%（207/225），肉雞合格率為57.14%（108/189），規(guī)模場合格率為75.67%（227/300），散養(yǎng)戶合格率為77.19%（88/114）。

表4 5個(gè)區(qū)縣雞血清H7亞型禽流感抗體監(jiān)測情況匯總

3 結(jié)論

控制性試驗(yàn)和秋防免疫監(jiān)測結(jié)果表明，H7亞型禽流感抗體合格率均在70%以上，達(dá)到了農(nóng)業(yè)部規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。在控制性試驗(yàn)中，H7亞型流感抗體產(chǎn)生的時(shí)間比H5亞型要早；雖然免疫22 d后的H5亞型禽流感抗體合格率僅為60%（這與試驗(yàn)動(dòng)物為雛雞，疫苗免疫劑量0.3 mL/只有關(guān)，或者可能與臨床H5亞型免疫過多次有關(guān)），但秋防免疫監(jiān)測的抗體合格率達(dá)到了93.49%。因此，無論是控制性試驗(yàn)，還是秋防抗體監(jiān)測結(jié)果，均表明現(xiàn)行使用的“H5+H7”二價(jià)滅活疫苗免疫效果確實(shí)。

蛋雞的H5和H7亞型流感免疫抗體水平均比肉雞高。因此，在生產(chǎn)實(shí)際中，應(yīng)高度重視肉雞的高致病性禽流感防疫工作。

5個(gè)區(qū)縣大面積高致病性禽流感抗體監(jiān)測結(jié)果表明，部分區(qū)縣仍存在免疫抗體水平不高的養(yǎng)殖場。因此，在新舊疫苗交替使用期間，各地要及時(shí)開展“H5+H7”二價(jià)滅活疫苗免疫效果監(jiān)測與評(píng)價(jià)，對(duì)免疫副反應(yīng)、免疫抗體不達(dá)標(biāo)，免疫失敗情況及時(shí)進(jìn)行調(diào)查處理。

[1]甘孟侯.中國禽病學(xué)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1999.

[2]張秀美，黃艷艷，胡北俠. 關(guān)注禽流感病毒的變異及其公共衛(wèi)生學(xué)意義[J]. 山東畜牧獸醫(yī)，2008，29（7）：1-4.

[3]王琦梅，劉社蘭，陳恩富. 人感染H7N9 禽流感流行病學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2017，51（2）：183-187.

[4]農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局. 關(guān)于切實(shí)做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知[A]：農(nóng)醫(yī)發(fā)（2017）24號(hào). 北京：農(nóng)業(yè)部，2017.