吳亞堅,徐 賽,李 飛,韓沖沖,彭文文,李保同
(江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院,南昌 330045)
吡蚜酮(pymetrozine)是一種具有內(nèi)吸和觸殺活性的吡啶雜環(huán)類殺蟲劑,主要用于飛虱和蚜蟲等刺吸式口器害蟲的防治[1];殺蟲雙(bisultap)是一種具有胃毒、觸殺及內(nèi)吸活性的沙蠶毒素類殺蟲劑,主要用于二化螟和稻縱卷葉螟等鱗翅目害蟲的防治[2]。由吡蚜酮與殺蟲雙復(fù)配加工的緩釋粒在稻田施用1次,可控制水稻整個生育期的主要害蟲。目前,吡蚜酮和殺蟲雙單劑的分析方法較多[3-7],而對該復(fù)配制劑中有效成分同時進(jìn)行分析的方法尚未見報道。本文建立了利用高效液相色譜同時測定該復(fù)配制劑中2種有效成分的方法,方法操作簡便,線性關(guān)系良好,可用于該制劑質(zhì)量控制。
Agilent-1260型液相色譜儀,配紫外可變波長檢測器和Zorbax Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱;孔徑約0.45 μm的過濾膜;SB-5200DT超聲波清洗機。
吡蚜酮(≥98.5%)和殺蟲單(≥98.3%)標(biāo)準(zhǔn)品,均由國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心提供;0.5%吡蚜酮·殺蟲雙緩釋粒(0.1%吡蚜酮+0.4%殺蟲雙),由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院提供;乙腈、甲醇(色譜純);二次蒸餾水;磷酸鹽緩沖液(KH2PO4,0.043 mol/L)。
流動相:乙腈+水+磷酸鹽緩沖液(體積比4∶86∶10);流速1.0 mL/min;檢測波長242 nm;柱溫25℃;進(jìn)樣量5μL。在上述色譜條件下,吡蚜酮保留時間約4.7 min,殺蟲單約3.0 min。色譜圖見圖1、圖2。
圖1 吡蚜酮和殺蟲單標(biāo)樣溶液高效液相色譜圖
圖2 0.5%吡蚜酮·殺蟲雙緩釋粒高效液相色譜圖
1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制
稱取吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品約0.01 g(精確至0.02 mg)、殺蟲單標(biāo)準(zhǔn)品約0.04 g(精確到0.02 mg),置于50 mL容量瓶中,加乙腈溶解,超聲波水浴助溶10 min,冷卻至室溫,定容,搖勻,過0.45 μm濾膜,濾液備用。
1.3.2 試樣溶液的配制
稱取試樣10.00 g(精確到0.02 mg),置于50 mL容量瓶中,加乙腈溶解,超聲波水浴助溶10 min,冷卻至室溫,定容,搖勻,離心分離,取上層清液過0.45 μm濾膜,濾液備用。
在上述色譜操作條件下,待儀器基線穩(wěn)定后,連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液,直至相鄰2針響應(yīng)值相對變化小于1.0%時,按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣測定。
吡蚜酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1(%)按照式(1)計算。
式(1)中:A1為吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品峰面積;A2為試樣中吡蚜酮峰面積;m1為吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品稱樣量(g);m2為試樣稱樣量(g);P為吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。
式(2)中:A1為殺蟲單標(biāo)準(zhǔn)品峰面積;A2為試樣中殺蟲雙峰面積;m1為殺蟲單標(biāo)準(zhǔn)品稱樣量(g);m2為試樣稱樣量(g);P為殺蟲單標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%);355.4為殺蟲雙的摩爾質(zhì)量(g/mo1),351.4為殺蟲單的摩爾質(zhì)量(g/mo1)。
殺蟲雙質(zhì)量分?jǐn)?shù)w2(%)按照式(2)計算。
據(jù)文獻(xiàn)[8]記載,殺蟲雙標(biāo)樣極易吸潮,不便制備和貯存,而殺蟲單標(biāo)樣不易吸潮,易于制備和貯存。由于殺蟲雙和殺蟲單在水溶液中沒有本質(zhì)的區(qū)別,且理化性質(zhì)相同,故本方法選擇殺蟲單標(biāo)準(zhǔn)品替代殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)品,計算時僅需進(jìn)行系數(shù)折算即可。
[3-7]中吡蚜酮和殺蟲單(或殺蟲雙)的分析方法,采用不同比例甲醇+水和乙腈+水流動相組合進(jìn)行實驗,色譜峰對稱性較差。在峰形相對較好的乙腈+水組合中加入適當(dāng)比例的磷酸鹽緩沖溶液,取得了良好的效果。當(dāng)以乙腈+水+磷酸鹽緩沖液(體積比4∶86∶10)為流動相,流速在1.0 mL/min時,2個組分分離時間適中,峰形對稱,且與雜質(zhì)分離良好。
通過紫外可變波長檢測器對吡蚜酮和殺蟲單的標(biāo)樣溶液進(jìn)行全波長掃描。吡蚜酮在299 nm有最大吸收峰,在237 nm的吸收峰次之;而殺蟲單在242 nm有最大吸收峰。選擇237 nm左右系列波長作為檢測波長,發(fā)現(xiàn)在242 nm波長下2個組分均有較強的吸收峰,且無雜質(zhì)干擾。因此,確定242 nm為檢測波長。
稱取吡蚜酮標(biāo)樣約0.10 g(準(zhǔn)確至0.02 mg)、殺蟲單標(biāo)樣約0.40 g(準(zhǔn)確至0.02 mg),置于50 mL容量瓶中,加乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為標(biāo)樣母液備用。分別移取標(biāo)樣母液1,2,4,8,16 mL于50 mL容量瓶中,用乙腈稀釋至刻度,配制系列標(biāo)樣溶液,搖勻,按上述色譜條件測定其峰面積。以標(biāo)樣溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。吡蚜酮線性回歸方程為y=66.446 2 x+1.744 1,相關(guān)系數(shù)為0.999 9(n=5);殺蟲單線性回歸方程為y=61.532 5 x+0.845 2,相關(guān)系數(shù)為0.999 8(n=5)。由此說明,在選定的色譜條件下,吡蚜酮和殺蟲單的質(zhì)量濃度與響應(yīng)值均具有良好的線性關(guān)系。
取同一0.5%吡蚜酮·殺蟲雙緩釋粒樣品,在上述色譜條件下平行測定8次。吡蚜酮和殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.000 8和0.001 4,變異系數(shù)分別為0.76%和0.35%。表明該方法的精密度較高(見表1)。
表1 分析方法精密度實驗結(jié)果
稱取5份已知含量的0.5%吡蚜酮·殺蟲雙緩釋粒試樣,置于50 mL容量瓶中,分別加入一定量的吡蚜酮和殺蟲單標(biāo)樣溶液,按上述方法測定有效成分的總質(zhì)量(殺蟲單折算成殺蟲雙)。吡蚜酮平均回收率為99.59%,殺蟲雙平均回收率為99.23%(見表2)。
本實驗以Zorbax Eclipse XDB-C18柱為分離柱,乙腈+水+磷酸鹽緩沖液(體積比4∶86∶10)為流動相,242 nm為檢測波長,測定0.5%吡蚜酮·殺蟲雙緩釋粒中有效成分含量。方法操作簡便,分離效果好,雜質(zhì)干擾較小,線性關(guān)系良好,且具有較高的準(zhǔn)確度和精密度,適用于該制劑的質(zhì)量檢測。
表2 分析方法準(zhǔn)確度實驗結(jié)果
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