張爽，尹茉莉 ，冷雪，李福軍

（1.吉林市園林管理中心，吉林 吉林 132000；2.吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林 吉林 132000；3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，吉林 吉林 130000）

犬瘟熱（Canine distemper，CD）是一種急性、熱性的病毒性傳染病?？筛腥舅?、狐、貉等多種動(dòng)物，是我國毛皮動(dòng)物的一種重要的傳染病[1]。在全世界大部分國家和地區(qū)均有犬、狐、貉、水貂和多種野生動(dòng)物暴發(fā)犬瘟熱的報(bào)道。死亡率很高，平均為23.2%，每年不斷暴發(fā)流行，發(fā)病率約10%，給毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。目前，預(yù)防犬瘟熱最有效的方法是免疫接種犬瘟熱疫苗。在毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)，傳統(tǒng)疫苗的使用一直是該病的主要防控手段，但是隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，各類新型疫苗已被深入研究，并取得較大進(jìn)展。

1 滅活疫苗

Puntoni首次使用福爾馬林滅活感染CDV的犬腦組織，制備了組織滅活苗，該疫苗無法有效地控制犬瘟熱。夏咸柱等用靜水壓高壓方法滅活CDV后，以蜂膠為佐劑制備的犬瘟熱滅活疫苗，該疫苗對(duì)犬的保護(hù)率達(dá)89%。國外對(duì)于水貂、狐、貉犬瘟熱的防治曾使用臟器滅活疫苗，由于犬瘟熱滅活苗免疫原性差、產(chǎn)生抗體水平較低、保護(hù)期短等缺點(diǎn)，現(xiàn)已很少使用。

2 弱毒活疫苗

國外研制多種疫苗用于犬瘟熱的防治，在弱毒活疫苗研究方面曾使用雞胚成纖維細(xì)胞制備弱毒疫苗，目前主要使用Vero細(xì)胞傳代制備犬瘟熱弱毒疫苗。在我國從60～80年代學(xué)者主要從國外引進(jìn)的弱毒疫苗中分離毒種，接種雞胚成纖維細(xì)胞制備水貂犬瘟熱弱毒疫苗,如錢國成等從國外水貂犬瘟熱弱毒疫苗中分離出左FDV3毒種，接種雞胚致病變，成功研制了水貂犬瘟熱弱毒雞胚細(xì)胞疫苗，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)證明，能控制犬瘟熱流行。目前，國內(nèi)也使用Vero細(xì)胞增殖犬瘟熱病毒制成犬瘟熱弱毒活疫苗，目前國內(nèi)使用最廣泛的犬瘟熱弱毒疫苗主要有吉林特研生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的水貂犬瘟熱活疫苗（濕苗、凍干苗）、齊魯動(dòng)物保健品公司生產(chǎn)的犬瘟熱凍干活疫苗，能有效的防治、控制毛皮動(dòng)物犬瘟熱的發(fā)生。由于水貂犬瘟熱活疫苗存在毒種變異、散毒、不利于保存等問題，研制一種安全有效的疫苗防控毛皮動(dòng)物犬瘟熱發(fā)生具有重要意義。

3 重組活載體疫苗

活載體疫苗是應(yīng)用基因工程技術(shù)將能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈免疫應(yīng)答的相關(guān)抗原基因通過某些非致病性病毒或細(xì)菌進(jìn)行表達(dá)，然后利用分子生物學(xué)的方法將一種抗原基因整合入另一種病原的非編碼區(qū)內(nèi)構(gòu)成的重組活載體疫苗。在研究犬瘟熱重組活載體疫苗時(shí)國內(nèi)外學(xué)者使用痘病毒和腺病毒為載體的較多。

4 基因疫苗

基因疫苗是指將編碼外源性抗原的基因插入到含真核表達(dá)系統(tǒng)的質(zhì)粒上，然后將質(zhì)粒直接導(dǎo)入人或動(dòng)物體內(nèi)，讓其在宿主細(xì)胞中表達(dá)抗原蛋白，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。

張紹興為了研制新一代安全、高效的基因工程疫苗,將構(gòu)建的真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES H、pIRES F、pIRES N1和pIRES N2為基因疫苗,進(jìn)行了小鼠和貉子的動(dòng)物免疫試驗(yàn),對(duì)免疫鼠和貉子體內(nèi)免疫應(yīng)答水平進(jìn)行了ELISA檢測(cè),并對(duì)貉子進(jìn)行了攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示所構(gòu)建的基因疫苗可以誘導(dǎo)小鼠和貉子產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)，基因疫苗免疫貉子后的保護(hù)率為33%～77%，對(duì)犬瘟熱基因免疫進(jìn)行了初步研究，為進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。羅彬構(gòu)建帶有 CDV-H 、N及2者聯(lián)合表達(dá)的pVAX真核重組質(zhì)pVAX-CDV-H、pVAX-CDV-N、pVAX-CDV-H-N，為探索犬瘟熱病毒DNA疫苗免疫效果，免疫Balb/c小鼠，設(shè)立注射劑量梯度，使用間接ELISA試驗(yàn)檢測(cè)小鼠血清中抗體水平。確定了試驗(yàn)中最佳免疫劑量為10μg～30μg，聯(lián)合表達(dá)載體效果優(yōu)于單獨(dú)表達(dá)。蘇鳳艷等應(yīng)用已構(gòu)建的水貂源犬瘟熱病毒F基因真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-CDVF肌注免疫日本大耳白兔，在兔體內(nèi)初步探討其免疫應(yīng)答，為研究在自然宿主水貂體內(nèi)免疫試驗(yàn)打下基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該重組表達(dá)質(zhì)粒在家兔體內(nèi)產(chǎn)生了針對(duì)CDV的特異性抗體，該基因疫苗的免疫效果不及弱毒疫苗，但可刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫且安全性較好。

隨著我們特種毛皮動(dòng)物飼養(yǎng)規(guī)模的加大，而特種毛皮動(dòng)物飼養(yǎng)管理水平較落后，使我國毛皮動(dòng)物犬瘟熱常呈流行性爆發(fā)，嚴(yán)重威脅毛皮動(dòng)物的生命安全。目前，對(duì)于犬瘟熱疫病防控主要使用的犬瘟熱弱毒活疫苗，該疫苗免疫效果好并且遺傳穩(wěn)定，但是存在弱毒疫苗可能會(huì)發(fā)生毒力反祖現(xiàn)象或者與野生毒株發(fā)生基因重組的現(xiàn)象，同時(shí)弱毒疫苗穩(wěn)定性較差，要求有較高的保存和運(yùn)輸條件?；诜肿由飳W(xué)研究的不斷深入，使我國犬瘟熱基因工程疫苗的研究取得了長足的進(jìn)展，為尋求更安全、更有效的新型犬瘟熱疫苗奠定基礎(chǔ)，對(duì)于我國毛皮動(dòng)物犬瘟熱疫情的防控具有重要意義。

[1]王珺瑋.貂、狐、貉源犬瘟熱病毒分離鑒定與分子生物學(xué)特性研究[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

[2]羅國良,趙建軍,張海玲,等.2006-2007年我國水貂、狐和貉主要疾病發(fā)生和流行情況調(diào)查與分析[J].特產(chǎn)研究,2008,30（4）：71-74.