馬長庚，王麗娟，孫興盛，翟瑞仁

(1濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東濰坊261031；2陽光融合醫(yī)院)

2018年全世界大約有1 810萬例新發(fā)癌癥患者，約960萬例癌癥患者死亡，病死率為8.2%，居所有死亡原因的第5位[1]。根據(jù)2018年國家癌癥中心發(fā)布的最新數(shù)據(jù)顯示，我國胃癌的發(fā)病率已經(jīng)居所有惡性腫瘤的第2位[2]。胃癌的發(fā)生是一個(gè)多步驟、多因素進(jìn)行性發(fā)展過程，需要多種因子的參與。E1A轉(zhuǎn)錄因子(E1AF)是ETS癌基因轉(zhuǎn)錄因子家族的成員[3]，可參與機(jī)體的多種生理過程，如細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡及組織發(fā)育、新生血管生成和器官形成等。此外，E1AF還與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，在腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。E1AF是激活多種基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)亞型的啟動因子，在腫瘤細(xì)胞突破基底膜屏障進(jìn)而浸潤、轉(zhuǎn)移過程中具有重要作用[4]。MMPs是一類高度同源的蛋白水解內(nèi)肽酶，以酶原形式分泌，能降解細(xì)胞外基質(zhì)中的各種蛋白成分，可破壞影響腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移的組織學(xué)屏障，在惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵性作用。MMP-7是降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)最重要的蛋白水解酶，與多種腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究觀察了胃癌組織E1AF、MMP-7表達(dá)變化，并探討其意義?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選取濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2015年1月～2016年6月手術(shù)切除的胃癌組織及其配對的癌旁正常組織標(biāo)本各52例份(分別作為觀察組和對照組)，男35例，女17例；年齡32～79歲、平均53.1歲，其中≤50歲20例、>50歲32；腫瘤直徑：≤5 cm 29例，>5 cm 23例；腫瘤部位：胃底22例，胃體30例；臨床分期(2010年美國癌癥聯(lián)合委員會推薦的胃癌分期標(biāo)準(zhǔn))：Ⅰ、Ⅱ期30例，Ⅲ、Ⅳ期22例；浸潤深度：T1、T2期32例，T3、T4期20例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例。所有標(biāo)本經(jīng)術(shù)后組織病理檢查明確診斷，且患者術(shù)前未接受任何抗腫瘤治療。本研究經(jīng)濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者或其家屬知情同意。

1.2 E1AF、MMP-7表達(dá)檢測 E1AF、MMP-7多克隆抗體，通用型SP系列工作液試劑盒(SP-9000)，DAB顯色試劑盒(AR1022)，均購自武漢博士德生物工程有限公司。取手術(shù)切除的組織標(biāo)本，制作石蠟切片。將切片置于0.01 mol/L枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)中，煮沸(98 ℃，15～20 min)抗原修復(fù)。以PBS代替一抗作為陰性對照。E1AF、MMP-7陽性染色定位于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色或黃褐色顆粒。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，每視野觀察100個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽性染色細(xì)胞數(shù)。陽性細(xì)胞所占比例評分：<5%計(jì)0分，5%～25%計(jì)1分，>25%～50%計(jì)2分，>50%計(jì)3分；評價(jià)每張切片陽性染色強(qiáng)度評分，無著色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。根據(jù)兩項(xiàng)評分之和綜合判斷陽性表達(dá)。二者評分之和≥3分為陽性表達(dá)，<3分為陰性表達(dá)[5]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組E1AF、MMP-7表達(dá)比較 觀察組與對照組E1AF陽性表達(dá)率分別為61.5%(32/52)、9.60%(5/52)，MMP-7陽性表達(dá)率分別為73.1%(38/52)、21.1%(11/52)。兩組比較P均<0.05。

2.2 胃癌組織E1AF、MMP-7陽性表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 胃癌組織E1AF、MMP-7陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、臨床分期有關(guān)(P均<0.05)。見表1

表1 胃癌組織E1AF、MMP-7陽性表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 胃癌組織E1AF陽性表達(dá)與MMP-7陽性表達(dá)的關(guān)系 胃癌組織E1AF陽性表達(dá)與MMP-7陽性表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.500，P<0.05)。

3 討論

胃癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居于我國消化系統(tǒng)惡性腫瘤的首位，并且近年來發(fā)病呈低齡化趨勢。盡管胃癌的早期診斷和綜合治療取得了很大進(jìn)步，但其仍為我國現(xiàn)階段發(fā)病率最高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，每年有超16萬人死于胃癌[6,7]。胃癌的浸潤和轉(zhuǎn)移是影響患者生存質(zhì)量和預(yù)后的主要因素。浸潤和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征，其中腫瘤新生血管生成和腫瘤周圍基質(zhì)破壞，在腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移過程中具有關(guān)鍵性作用。

E1AF是小鼠PEA3基因的人類同源基因。E1AF基因定位于染色體17q21，有兩個(gè)主要功能區(qū)，即酸性區(qū)和ETS區(qū)，分別由3個(gè)外顯子編碼[8]。ETS區(qū)位于ETS蛋白C區(qū)，由85個(gè)氨基酸組成。ETS區(qū)能特異性識別結(jié)合嘌呤的DNA靶心序列GGAA/T[9]。ETS區(qū)域作為一個(gè)特異性DNA結(jié)合區(qū)域，存在于大多數(shù)病毒的DNA調(diào)控序列中，還存在于與細(xì)胞外基質(zhì)降解及血管生成相關(guān)多種基因的5′-側(cè)翼調(diào)節(jié)區(qū)，具有反式活化功能[10]。E1AF在組織分化程度高的腫瘤細(xì)胞中低表達(dá)，而在組織分化程度低的腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)[11]。E1AF是ETS癌基因家族的成員[3]，是各種MMPs亞型的啟動因子，可上調(diào)與腫瘤發(fā)生相關(guān)許多基因的啟動子[12]。Yamamoto等[13]發(fā)現(xiàn)，胃癌組織E1AF陽性表達(dá)與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯和pTNM分期等臨床病理特征相關(guān)，且與MMPs陽性表達(dá)密切相關(guān)，在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中具有關(guān)鍵性作用。

MMPs是一類鋅依賴性內(nèi)肽酶,活性部位都含有一個(gè)Zn+，能降解一種或幾種細(xì)胞外基質(zhì)，在血管壁的穿透以及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和基質(zhì)降解過程中起主導(dǎo)作用。目前發(fā)現(xiàn)的MMPs至少有28種[14]，根據(jù)其作用底物不同及片段同源性，可分為五類[15]。MMP-7是MMPs家族中的最小成員，是惡變上皮細(xì)胞特異性表達(dá)的酶類。MMP-7不但能參與胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移，而且與患者預(yù)后有關(guān)[16～18]。有研究顯示，腫瘤瘤體體積大小是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因子[19]。Grigioni等[17]發(fā)現(xiàn)，胃腸道腫瘤組織MMPs含量明顯高于正常組織，且表達(dá)強(qiáng)度與胃癌分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)關(guān)系。Yamamoto等[13]將E1AF反義轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞MKN-45，結(jié)果顯示MMP-7表達(dá)下降，而且其侵襲性比模擬轉(zhuǎn)染的MKN-45細(xì)胞亦明顯降低。Keld等[20]研究也發(fā)現(xiàn)，胃癌組織E1AF表達(dá)與MMP-7表達(dá)具有相關(guān)性。文獻(xiàn)報(bào)道，MMPs的活性可被MMP-7抗體抑制[21]。因此，E1AF被認(rèn)為是MMP-7的上游調(diào)控因子，通過調(diào)節(jié)MMP-7，上調(diào)胃腺癌相關(guān)蛋白和mRNA表達(dá)。

本研究顯示，觀察組E1AF、MMP-7陽性表達(dá)率高于對照組,并且E1AF、MMP-7陽性表達(dá)與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)；胃癌組織E1AF陽性表達(dá)與MMP-7陽性表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。由此推測，E1AF、MMP-7可能協(xié)同促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展；E1AF有可能成為預(yù)測胃癌發(fā)生的一個(gè)生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。

總之，胃癌組織E1AF、MMP-7表達(dá)升高，二者表達(dá)變化與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)；二者可能協(xié)同促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展。