(佛山市順德區(qū)北滘鎮(zhèn)動物防疫檢疫站， 廣東 佛山 528311)

1 材料與方法

1.1 材料

(1)儀器與設(shè)備。芯片掃描儀，型號：晶芯EcoScan-100，廠家：北京博奧生物有限公司。離心機(jī)，型號：GL-20G-Ⅱ，廠家：上海安亭科學(xué)儀器廠。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，型號：TRACEDSQ，廠家：菲尼根。高效液相色譜儀，2695配紫外檢測器型，廠家：Waters公司。

(2)試劑。ELISA檢測試劑盒、克侖特羅殘留檢測試劑盒以及磺胺二甲基嘧啶殘留檢測試劑盒，這3種試劑盒均由r2Biopharm公司生產(chǎn)。蛋白芯片獸藥殘留檢測試劑盒，則由北京博奧生物芯片有限公司生產(chǎn)。純度為99.6%的克侖特羅和純度為99.0%的鏈霉素的標(biāo)準(zhǔn)品，由中國藥品生物制品檢定所提供。純度為99.0%的磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品，由美國的SIGMA公司生產(chǎn)。純度為100.1%的恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品，由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。

(3)實(shí)驗(yàn)用菌?？莶菅挎邨U菌(Bacillus subtilis)菌株。

1.2 方法

(1)試劑盒的靈敏度評價。①芯片反應(yīng)：按獸藥殘留蛋白芯片檢測試劑盒說明書進(jìn)行[1]。②標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制：依照實(shí)驗(yàn)要求，將各種藥物標(biāo)準(zhǔn)品按步驟配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。③掃描及數(shù)據(jù)處理：芯片反應(yīng)完畢，進(jìn)行圖像掃描和數(shù)據(jù)處理；依照校正后的熒光信號強(qiáng)度對各標(biāo)準(zhǔn)品溶液的藥物濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線；求出每種待測藥物的IC50(熒光信號強(qiáng)度下降一半的獸藥濃度)值。

(2)試劑盒的特異性評價。①芯片反應(yīng)：按獸藥殘留蛋白芯片檢測試劑盒說明書進(jìn)行。②標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制：依照實(shí)驗(yàn)要求，將各種藥物標(biāo)準(zhǔn)品按步驟配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。③掃描及數(shù)據(jù)處理：同上，反應(yīng)完畢后，進(jìn)行圖像的掃描以及相關(guān)數(shù)據(jù)的處理；然后，做標(biāo)準(zhǔn)品曲線；最終求出IC50值。

1.3 樣品前處理

①蛋白質(zhì)芯片檢測試劑盒的樣品前處理按照獸藥殘留蛋白芯片檢測試劑盒說明書進(jìn)行。②磺胺二甲嘧啶(ELISA法)和磺胺二甲嘧啶(HPLC法)：均按國家所頒布的文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。③鏈霉素殘留測定：稱取粉碎后的樣品適量，加入一定pH 1.5的磷酸緩沖液，離心分離后取上清液；再用10 moL/L NaOH調(diào)節(jié)溶液pH至8.5，再離心后取上清液作待檢測樣液[2]。④克侖特羅(EL ISA法)、克侖特羅(GC-MS法)和恩諾沙星(HPLC法)：按照國家所頒布的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。

1.4 樣品測定

按照獸藥殘留蛋白芯片檢測試劑盒使用說明書檢測獸藥殘留；ELISA法測定按國家所頒布的文獻(xiàn)進(jìn)行；鏈霉素殘留的檢測方法以及克倫特羅(GC-MS)檢測(ELISA試劑盒法)按照國家所頒布的文獻(xiàn)進(jìn)行；磺胺二甲基嘧啶和恩諾沙星殘留檢測方法按照相關(guān)文獻(xiàn)方法進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

使用蛋白芯片來進(jìn)行獸藥殘留檢測，能夠更加快速準(zhǔn)確地得出結(jié)果。并且用同一種方法提取了多種獸藥，節(jié)省了實(shí)驗(yàn)的時間。但是，用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)來檢測獸藥殘留成本過高，需要一系類昂貴的尖端儀器。

3 結(jié)語

用蛋白芯片檢測獸藥殘留可以同時檢測多種獸藥，并且還具有特異性強(qiáng)、結(jié)合容量高、前處理簡單等優(yōu)點(diǎn)。蛋白芯片檢測獸藥殘留，有助于了解藥物或毒物與其效應(yīng)相關(guān)蛋白質(zhì)的相互作用，提高檢測效率，使獸藥安全得到更好的監(jiān)控，這也減輕了獸藥殘留對人們帶來的危害。

參考文獻(xiàn)

[1]劉綱,奚鷹,汪寧梅,等.多種獸藥殘留檢測蛋白芯片及其試劑盒[EB/OL].Google Patents.(2010).

[2] 陳愛亮,王國青,王艷,等.獸藥殘留蛋白芯片檢測系統(tǒng)的研制和應(yīng)用[J].中國醫(yī)療器械信息,2008(8):33-36.