邢清潔，景建江，楊雪珍，郝建敏

（1.內(nèi)丘縣動物疫病預防控制中心，河北內(nèi)丘054200；2.邢臺縣動物疫病預防控制中心，河北邢臺054001）

2017年秋防集中免疫，內(nèi)丘縣180余萬只雞全部使用了禽流感H5N1Re8株+H7N9 H7 Re1株滅活疫苗 （以下簡稱H5+H7）免疫，免疫注射結束后，為科學評估H5+H7疫苗臨床使用的安全性和免疫效果，我們對其中的80個養(yǎng)雞場共計3.68萬只雞按每戶20只雞抽檢1600份進行了跟蹤調(diào)查及抗體檢測化驗。結果表明，首次免疫注射30天后H7抗體可以達到6以上，加強免疫后的H5N1Re8抗體達到8以上，臨床使用安全，現(xiàn)將檢測結果報告如下：

1　試驗雞群選擇

隨機選擇注射過H5+H7疫苗的80個3000只以上存欄雞場，為了解疫苗對產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能的影響，年齡選擇均為120～400日齡的產(chǎn)蛋雞群。要求雞群健康無發(fā)病史，雞群按常規(guī)免疫程序免疫，在本次免疫之前未使用過含有H7N9流感的疫苗，且本次使用H7N9疫苗免疫后滿30天左右雞，每場采血20份，每羽采血量1ml，分離血清后冷凍保存?zhèn)錂z。

2　疫苗及監(jiān)測試劑

內(nèi)丘縣疫苗使用的為國家統(tǒng)一招標采購的H5+H7疫苗，生產(chǎn)廠家包括哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司、青島易邦生物工程有限公司及廣東永順生物制藥股份有限公司三個廠家，注射劑量為每羽0.5ml，注射部位為胸部或大腿外側。采樣單設計包括雞日齡、注苗時間、注苗量、不良反應描述、曾經(jīng)使用過的禽流感疫苗等幾項關鍵數(shù)據(jù)。檢測用試劑為哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司生產(chǎn)，禽流感病毒H5亞型Re8株病毒血凝抑制試驗抗原，批號為2016005；禽流感病毒H7亞型病毒血凝抑制試驗抗原，批號為2017004。

3　監(jiān)測方法及結果

血凝抑制試驗使用96孔V型135度微量反應板進行，檢測方法按 《高致病禽流感診斷技術》國家標準 （GB／T18936-2003）方法進行檢測。為保證結果的準確性，實驗中設陽性對照、陰性對照，并對配制的4單位病毒均進行回歸試驗。結果判定標準（按log2表述，如4則代表為4 log2）。檢測項目為H5N1-Re8抗體及對應血清的H7抗體。

經(jīng)對1600份血清化驗，其中H5N1-Re8血清血凝抑制抗體均達到8以上，H7血清血凝抑制抗體平均達到6以上。

以上80個養(yǎng)雞場經(jīng)實地調(diào)查注射疫苗后一周內(nèi)產(chǎn)蛋率下降均不超過5%，一周后即恢復正常。

4　結果分析

4.1通過以上實驗證明，H5+H7疫苗田間使用免疫應答性顯著，臨床使用安全。按要求抗體水平達到4以上即可抵抗高致病禽流感的侵襲，首次免疫H7抗體即可達到6以上說明H7N9流感疫苗免疫效果可靠。

4.2本試驗對H5N1使用檢測試劑抗原為H5N1-Re8株，與使用的H5+H7疫苗中H5N1-Re8株對應。 H5N1-Re8抗體水平都在8以上（本次試驗為提高效率實驗只做到8，實際抗體效價可能更高）。盡管抗體效價較高，但不能反應是本次疫苗注射的效果，因為使用H5+H7疫苗前這些養(yǎng)雞戶執(zhí)行的是本次秋防前的免疫程序，按程序均使用過2次以上的禽流感H5N1-Re6.7.8株疫苗。檢測數(shù)據(jù)反映出的是H5N1-Re8加強免疫后抗體水平。分析H5+H7疫苗免疫后H5N1-Re8的抗體效價還有待于雞群完全使用單一的H5+H7疫苗后抽血檢測方可。

4.3為提高結果的準確性，實驗中對4單位病毒配比比例準確性至關重要，每次試驗一定要對配好的4單位病毒進行凝集性回歸試驗。

4.4檢測中發(fā)現(xiàn)個別雞場H7抗體效價有比平均值偏高1～2個滴度的情況，調(diào)查顯示這些戶注射疫苗量都超過0.5ml，說明疫苗注射量明顯影響抗體效價。因此，為了提高保護率，有必要首免后30天內(nèi)再進行一次加強免疫。