劉富康，李晞晴，楊 璞，曲映紅

（上海海洋大學(xué)，食品科學(xué)與工程國家級實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海 201306）

銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉含有多種生物活性成分，其中的黃酮類化合物具有抗氧化、防止衰老、抑菌抗病毒等功效，且安全可靠，食用健康，可用于加工藥品和保健食品[1-3]。從植物中提取黃酮通常使用的溶劑是水或乙醇水溶液，輔以微波、超聲波等方法能提高黃酮的提取效率[4,5]。有專家分析，黃酮類化合物為銀杏葉中重要的生理活性物質(zhì)，具有防治心腦血管疾病、老年癡呆癥、抗氧化等諸多功效[6]。王立等[7]也從烏飯樹樹葉中提取出了黃酮類色素，并對這些色素進(jìn)行了分離純化，分析了它們清除活性氧自由基的能力。王芳等[8]通過對桑葉中的黃酮類化合物的測定得出，桑葉中的黃酮類化合物主要包括蕓香苷、槲皮素、異槲皮素、二氫山萘素等，含量約占干葉重的1.0%～3.0%，是所有植物莖葉中含量較高的一種。

本文以乙醇水溶液浸提銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉中的粗黃酮，并考察其對DPPH自由基和超氧陰離子自由基的清除能力，旨在為開發(fā)綠色安全的天然抗氧化劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗(yàn)材料：干燥的銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉，均購于上海。

試劑：1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、乙醇、Tris、鹽酸、鄰苯三酚等，所用試劑均為分析純。

儀器：LLJ-306Z粉碎機(jī)，江門市貝爾斯頓電器有限公司；AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KQ5200E超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；752N紫外可見分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 粗黃酮的提取

分別將已干燥的銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉粉碎，過60目篩。精確稱取10.00g碎葉粉末，料液比分別為1:30、1:25、1:20、1:15、1:10。在上述料液比條件下，用 70%乙醇于70℃超聲浸提120min，5000r/min離心5min，上清液即為銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉醇提粗黃酮溶液[9,10]。

1.2.2 DPPH自由基清除率的測定

將提取得到的粗黃酮按照勾明玥和方敏[11,12]的實(shí)驗(yàn)方法，測定樣品和空白反應(yīng)混合物在517nm處的吸光度，根據(jù)下列公式計(jì)算清除率，見公式（1）。

式中，K1為樣品對DPPH自由基的清除率，A1為DPPH溶液加樣品液后的吸光度，A2為樣品液在測定波長的吸光度，A0為DPPH溶液不加樣品液的吸光度。

1.2.3 超氧陰離子自由基清除率的測定

清除超氧陰離子自由基能力的測定采用鄰苯三酚自氧化法[13]。取50mmol/L的Tris-HCl（pH 8.2）緩沖液4.6mL于試管中，25℃水浴中保溫15min，加入粗黃酮溶液1mL，10mmol/L鄰苯三酚溶液0.4mL，混勻于25℃恒溫水浴中反應(yīng)4min，立即加入8mol/L的鹽酸1.0mL終止反應(yīng)，以Tris-HCl緩沖液調(diào)零點(diǎn)，325nm下測其吸光值，即A1'?？瞻讓φ战M（A0'）用乙醇1mL代替樣品溶液，樣品對照組（A2'）用乙醇4mL代替鄰苯三酚溶液，見公式（2）。

式中，K2為樣品對超氧陰離子自由基的清除率，A1'為超氧陰離子溶液加樣品液后的吸光度，A2'為樣品液在測定波長的吸光度，A0'為超氧陰離子溶液不加樣品液的吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉粗黃酮對DPPH自由基的清除率

圖1 粗黃酮對DPPH自由基的清除率Fig.1 The scavenging rate of crude flavonoids to DPPH radicals

從圖1可以看出，三種植物葉的醇提粗黃酮對DPPH自由基的清除率隨料液比的提高而增大，大小順序?yàn)闉躏垬淙~＞桑葉＞銀杏葉。選定的5種料液比條件下，烏飯樹葉醇提粗黃酮的DPPH自由基清除率都在80%以上，顯示出優(yōu)良的抗氧化活性。隨料液比的增加，桑葉醇提粗黃酮的DPPH自由基清除率快速上升，當(dāng)料液比達(dá)到1:10時(shí)，清除率已上升至近80%。銀杏葉醇提粗黃酮對DPPH自由基的清除率隨料液比的增加上升緩慢，均為50%以下。

2.2 銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉粗黃酮對超氧陰離子自由基的清除率

圖2 粗黃酮對超氧陰離子自由基的清除率Fig.2 The scavenging rate of crude flavonoids to superoxide anion radicals

圖2顯示了粗黃酮對超氧陰離子自由基的清除率，由圖2可以看出，3種植物葉的醇提粗黃酮對超氧陰離子自由基的清除率隨料液比的提高而增大，大小順序?yàn)殂y杏葉＞桑葉＞烏飯樹葉。當(dāng)料液比升至1:20時(shí)，銀杏葉醇提粗黃酮的超氧陰離子自由基清除率達(dá)80%以上；料液比繼續(xù)升高至1:15和1:10時(shí)，桑葉和烏飯樹葉醇提粗黃酮的超氧陰離子自由基清除率也上升至70%以上。

綜上可見，銀杏葉醇提粗黃酮的超氧陰離子自由基清除率高于DPPH自由基清除率，烏飯樹葉醇提粗黃酮對DPPH自由基有較強(qiáng)的抑制作用，桑葉醇提粗黃酮對兩種自由基的清除能力相近。

3 結(jié)論

銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉的醇提粗黃酮均有一定的DPPH自由基和超氧陰離子自由基清除能力，銀杏葉醇提粗黃酮對超氧陰離子的清除能力較強(qiáng)，而烏飯樹葉醇提粗黃酮?jiǎng)t顯示了較強(qiáng)的DPPH自由基清除能力。醇提粗黃酮中抗氧化成分的種類、數(shù)量有待于進(jìn)一步研究。

[1] 汪素娟,康安,狄留慶,等.銀杏葉提取物主要活性成分藥動力學(xué)研究進(jìn)展[J].中草藥,2013,44(5):626-631.

[2] 蔡凌云.烏飯樹葉總黃酮體外抗氧化活性[J].中成藥,2011,33(6):1054-1057.

[3]薛淑萍,張立偉.桑葉中黃酮類化合物的提取工藝的優(yōu)化[J].中國生化藥物雜志[J].2010,31(6):405-406.

[4]房磊.超聲波輔助提取銀杏葉黃酮及體外抗運(yùn)動氧化作用研究[J].食品研究與開發(fā),2016,37(17):153-157.

[5] 賀偉強(qiáng),周奇跡,沈永根.微波輔助水浸提桑葉總黃酮的工藝條件優(yōu)化試驗(yàn)[J].蠶業(yè)科學(xué),2014,40(2):295-300.

[6]張鵬.銀杏葉黃酮的微波提取及其抗氧化研究 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)[J].2009,37(12):5496-5497,5730.

[7] 王立,姚惠源,陶冠軍,等.烏飯樹葉中黃酮類色素的抗氧化活性[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2006,25(4):81-84,88.

[8] 王芳,喬璐,淡小艷,等.桑葉黃酮的提取及抗氧化研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)[J].2011,5:76-73.

[9] 遲曉喆,曹光群.桑葉總黃酮的提取及其抑菌活性研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2012,32(2):163-166.

[10]馬遠(yuǎn)濤,羅國平,梁麗.銀杏葉中總黃酮的提取工藝研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(32):19736-19737.

[11]方敏,王耀峰,宮智勇.15種水果和33種蔬菜的抗氧化活性研究[J].食品科學(xué),2008,29(10):97-100.

[12]勾明玥,劉梁,張春枝.采用DPPH法測定26種植物的抗氧化活性[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2010,(36):148-150.

[13]王德才,高麗君,高艷霞.杭白芷多糖體外抗氧化活性的研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2009,20(1):173-174.