張俊花+林辰壹

摘要 采用對比法，對哈巴河縣野生楊樹菇不同液體培養(yǎng)基進行篩選。結(jié)果表明，在溫度25 ℃、濕度80%的條件下，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基適宜野生楊樹菇菌種分離和菌絲擴大繁殖。該結(jié)果可為今后栽培生產(chǎn)楊樹菇提供技術(shù)指導。

關鍵詞 野生楊樹菇；菌種分離；培養(yǎng)基篩選；新疆哈巴河

中圖分類號 S646 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）01-0057-02

楊樹菇（pleurotus ostreatus），因自然發(fā)生在哈巴河縣楊樹樹干或伐樁上而得名。野生楊樹菇富含氨基酸和維生素，菇體肥厚，香氣濃郁，脆嫩爽滑，味道鮮美。楊樹菇子實體大型，菌蓋扁半球形或呈扇形，直徑4～20 cm，初期淺黑色，后期逐漸變淡，成熟時呈淺灰色或白色；菌蓋表面平滑，菌肉白色，肥厚；菌柄短，長2～8 cm，基部有絨毛，側(cè)生或偏生，內(nèi)實，基部相連，菌蓋重疊[1]。楊樹菇既是新一代高檔的珍稀食用菌，也是一種極具開發(fā)價值的藥用菌[2]。本文進行3種培養(yǎng)基篩選試驗，找出適合野生楊樹菇的最佳培養(yǎng)基。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試儀器設備。純水及超純水系統(tǒng)（HY-CJ-1A）、手提式壓力蒸汽滅菌鍋（YXQ-280SD）、生化培養(yǎng)箱（SPX-250）、生物安全柜（BSC-1360ⅡA2）、溫度濕度計、電子天平、培養(yǎng)皿。

1.1.2 供試試劑。馬鈴薯葡萄糖瓊脂（不含抗生素）、蛋白胨、麥芽浸膏、瓊脂粉和酵母膏，由北京奧博星生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。供試菌株采自哈巴河縣。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)基配方與制作。①PDA（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）[3]：將200 g馬鈴薯去皮，去芽眼，切成小條放入鋁鍋中，加入1 000 mL水，煮沸20～30 min至馬鈴薯酥而不爛時，用6～8層紗布過濾，取濾汁于鍋中，再補水至1 000 mL，加入瓊脂20 g溶化，再加入葡萄糖20 g攪拌均勻，趁熱分裝于試管中，用棉花塞塞好，每個試管10 mL。②市售PDA（北京奧博星生物技術(shù)有限公司）：取試劑38 g，加水1 000 mL水煮沸，攪拌均勻，趁熱分裝于試管，用棉花塞塞好，每個試管10 mL。③MYPA（麥芽酵母膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基）[4]。先在鋁鍋中加入1 000 mL水加熱，再取麥芽浸膏20 g、酵母膏2 g、蛋白胨1 g、瓊脂20 g，放入鍋中攪拌均勻后煮沸，趁熱分裝于試管，用棉花塞塞好，每個試管10 mL。

1.2.2 母種培養(yǎng)。將分裝好的不同的試管培養(yǎng)基放入滅菌器內(nèi)，當鍋內(nèi)壓力達到0.15 MPa（鍋內(nèi)溫度127 ℃）時保持30 min，滅菌結(jié)束后待鍋內(nèi)壓力自然降至0時才可打開鍋蓋[5]。待培養(yǎng)基滅菌完成后，取出傾斜放置在生物安全柜中冷卻。在滅菌的同時，將采集好的菌株先后用純水、超純水、75%酒精清洗干凈放置在生物安全柜中。

接種前開啟紫外燈30 min，關閉紫外燈后，開啟無菌循環(huán)系統(tǒng)，先用75%酒精棉球擦手，點燃酒精燈，將小刀和鐵絲在火焰上方消毒，用小刀將菌株沿菌蓋至菌柄中間縱向切開，在菌柄和菌蓋交界處，用小刀切出一小塊菇體，每塊0.8 cm左右，厚度0.2 cm，然后用鐵絲挑起菇體放入培養(yǎng)基斜面中心處[6]，每接種1次都要對小刀、鐵絲在酒精燈上消毒。接種完成后放在25 ℃左右的培養(yǎng)箱內(nèi)暗光培養(yǎng)，每天通風換氣，控制空氣相對濕度80%左右，觀察記錄菌絲生長情況，待生長最快的菌絲接近培養(yǎng)基另一端時，進行菌種復壯培養(yǎng)[7]。

1.2.3 母種擴繁。根據(jù)菌絲的生長情況，選擇菌絲長勢很好且無雜菌的培養(yǎng)基中進行擴繁。接種前開啟紫外燈30 min，手、臺面、接種工具、母種管用酒精棉球擦拭消毒，點燃酒精燈，火焰上方灼燒接種藥勺后冷卻，凡是伸進試管的桿部均過火滅菌。將原始母種和空自斜面培養(yǎng)基同時握在左手，右手拔掉棉塞，用手將試管口在火焰上方不斷攪動，先用藥勺棄去原始母種前端1 cm處，然后快速移取0.5 cm2大小的菌種接入試管斜面培養(yǎng)基中央。抽出藥勺，再將試管口在火焰上方攪動，在火焰旁塞上棉塞，另一只手換接種管，重復上述操作，接種完畢后貼上標簽。接種后，放在培養(yǎng)室內(nèi)避光培養(yǎng)，培養(yǎng)初期每天都要仔細觀察，對污染的試管及時挑除，以免菌絲將污染處蓋住，難以挑出，造成損失。

1.2.4 菌絲生長量測定。先將配制好的不同的培養(yǎng)基200 mL分裝于250 mL的錐形瓶內(nèi)，用棉塞塞好，然后將平面培養(yǎng)皿與錐形瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌0.15 MPa時保持30 min，滅菌完成后在超凈工作臺內(nèi)趁熱將不同的培養(yǎng)基倒入平面培養(yǎng)皿上，平面培養(yǎng)皿的厚度為2 mm。冷卻后，通過從已培養(yǎng)好的楊樹菇母種試管中，用環(huán)狀接種針在火焰旁取大小相等的菌塊，放入平面培養(yǎng)皿的中央，在溫度25 ℃、濕度80%的恒溫培養(yǎng)箱中倒置避光培養(yǎng)9 d，每隔3 d測量1次，第3天開始用“十”字法測量菌落直徑并觀察菌絲的長勢情況[8]。每個處理3次重復。

1.3 數(shù)據(jù)分析

利用SPSS 20.0軟件對所有數(shù)據(jù)進行單因素ANOVA Duancan差異顯著性分析比較（P<0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長情況

由表1可知，組織分離后的組織塊在自制PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲萌發(fā)期時間最長，菌絲生長稀疏，30 d長滿試管；市售PDA和MYPA培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲萌發(fā)期時間為2 d，菌絲生長潔白、濃密、粗壯、整齊，明顯優(yōu)于自制PDA培養(yǎng)基。市售PDA（擴繁）培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲萌發(fā)快，2 d后開始萌發(fā)菌絲，菌絲生長粗壯、濃密、潔白、整齊、有序，20 d可長滿試管。由此表明，在溫度25 ℃、濕度（RH）80%±5%的條件下，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基適于該菌的室內(nèi)培養(yǎng)。

2.2 菌絲生長量

由表2可知，在溫度25 ℃、濕度（RH）80%±5%的條件下進行培養(yǎng)時，第3天和第6天時，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基上的菌絲生長量顯著高于自制PDA（P<0.05），在第9天時，MYPA培養(yǎng)基上菌絲生長量最大，顯著高于其他2個處理，并且市售PDA培養(yǎng)基顯著高于自制PDA培養(yǎng)基（P<0.05）。方差分析結(jié)果表明，在溫度25 ℃、濕度（RH）80%±5%的條件下，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基均適于該菌的室內(nèi)培養(yǎng)。

3 結(jié)論與討論

通過查找資料選擇了常用的3種培養(yǎng)基（自制PDA、市售PDA和MYPA培養(yǎng)基）對野生楊樹菇進行菌絲培養(yǎng)，自制PDA中馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g；市售PDA中馬鈴薯浸粉3 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g；MYPA培養(yǎng)基中麥芽浸膏20 g、酵母膏2 g、蛋白胨1 g、瓊脂20 g。通過培養(yǎng)觀察，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲萌發(fā)期時間2 d，菌絲生長潔白、濃密、粗壯、整齊，明顯優(yōu)于自制PDA培養(yǎng)基，且試管長滿時間較自制PDA培養(yǎng)基短；在菌絲生長量方面市售PDA和MYPA培養(yǎng)基顯著高于自制PDA，而在菌絲生長量的第9天，MYPA培養(yǎng)基明顯高于市售PDA培養(yǎng)基。3種培養(yǎng)基中MYPA培養(yǎng)基中氮源豐富，市售PDA次之，自制PDA最少，一定量的氮源對該菌絲的生長很重要。但MYPA培養(yǎng)基在配制過程中因是膏狀，稱樣復雜，市售PDA操作方便。市售PDA和MYPA培養(yǎng)基各有利弊。綜上，在溫度25 ℃、濕度（RH）80%±5%的條件下，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基適于該野生楊樹菇的菌種分離和菌絲體的擴大繁殖。

4 參考文獻

[1] 晏忠誠.楊樹菇栽培技術(shù)[J].農(nóng)村科技，2010（8）：84.

[2] 張亦誠，雷朝云，何成勇.楊樹菇引種栽培試驗初報[J].貴州農(nóng)業(yè)科學，2005（1）：69.

[3] 楊順強，羅家剛，桑正林，等.不同pH值PDA培養(yǎng)基對平菇、香菇母種培養(yǎng)的影響[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2016（14）：67-68.

[4] 宋金.平菇毛木耳金針菇高效栽培技術(shù)[M].南京：江蘇科學技術(shù)出版社，2012.

[5] 李峰，趙建選，胡曉強.規(guī)范制種程序制作優(yōu)質(zhì)平菇菌種[J].食用菌，2012（6）：31-32.

[6] 丁超，余傳生，董宏.圖文精講反季節(jié)平菇栽培技術(shù)[M].南京：江蘇科學技術(shù)出版社，2009.

[7] 侯軍，胡梅，殷偉敏，等.楊樹菇母種培養(yǎng)基篩選試驗[J].洛陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W校學報，2002（1）：10-12.

[8] 劉拴成，穆俊祥，曹興明，等.不同微量元素對平菇菌絲生長的影響[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學，2017（4）：103-108.