徐 立 宋文婷 姚明江 王益民 王 勇 王光蕊 劉建勛

(1 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，中藥藥理北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京，100091； 2 西安步長(zhǎng)中醫(yī)心腦病醫(yī)院，西安，710082)

銀杏葉提取物具有清除自由基，調(diào)整循環(huán)系統(tǒng)，抑制血小板活化因子，抑制血小板聚集，改善血液粘度和血流動(dòng)力學(xué)等作用，臨床用于腦部及周圍血流循環(huán)障礙。天麻蜜環(huán)菌是與天麻伴生的真菌，有類似于天麻的藥理作用，具有定驚熄風(fēng)，鎮(zhèn)靜安神、抗眩暈和鎮(zhèn)痛的作用，臨床用于治療眩暈頭痛，驚風(fēng)癲癇，肢體麻木，腰膝酸痛等癥。

銀杏蜜環(huán)口服溶液系由銀杏葉提取物和天麻蜜環(huán)菌粉組成，臨床上用于治療缺血性心腦血管疾病。有研究表明該藥可明顯改善腦血流動(dòng)力學(xué)和血液流變學(xué)指標(biāo)[1]，減少NIHSS評(píng)分[2]，但兩者配伍使用的藥理學(xué)優(yōu)勢(shì)鮮見報(bào)道。本研究建立多發(fā)性腦梗死大鼠模型，觀察銀杏葉提取物和天麻蜜環(huán)菌及兩者配伍的藥理學(xué)作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 SD大鼠，雄性，180～220 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001，合格證號(hào)：11400700163978。

1.1.2 藥物 銀杏蜜環(huán)口服溶液(邛崍?zhí)煦y制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：160312)，銀杏葉提取物(邛崍?zhí)煦y制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：160402)，天麻蜜環(huán)菌粉(邛崍?zhí)煦y制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20151027)；金納多(銀杏葉提取物片，德國(guó)威瑪舒培博士藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：5260613)；天麻蜜環(huán)菌片(江蘇神華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20160602)。

1.1.3 試劑與儀器 谷氨酸(Glu，≥99%)，-氨基丁酸(GABA，≥99.5%)，50%氫氧化鈉溶液(NaOH)，85%磷酸(H3PO4)，鄰苯二甲醛(OPA)，均為HPLC級(jí)；硼酸(H3BO3)，ACS級(jí)，均為Fluka公司產(chǎn)品；β-巰基乙醇(βME，≥99.5%)，BR級(jí)，磷酸氫二鈉(Na2HPO4)，ACS級(jí)，均為美國(guó)Sigma Aldrich公司產(chǎn)品；甲醇(MeOH)，乙腈(Acn)，HPLC級(jí)，美國(guó)Fisher Scientific公司產(chǎn)品；高氯酸85%(HClO4)，AR級(jí),北京化工試劑二廠產(chǎn)品；水合氯醛，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；注射用青霉素鈉粉針，華北制藥股份有限公司產(chǎn)品。TNF-α試劑盒，批號(hào)：GR2995505-1，由abcam公司提供?？贵wCD34，GFP，NeuN，均由abcam公司提供，批號(hào)分別為GR305367-3，GR129953-4和GR249899-29。CoulArray-5600型高效液相-電化學(xué)工作站、5600A電化學(xué)檢測(cè)器、582液相泵、542自動(dòng)進(jìn)樣器、6210碳石墨電極、CTO-324可控溫元件箱，美國(guó)ESA公司產(chǎn)品。AG2245電子天平，瑞士梅特勒托利多公司產(chǎn)品。UVPMS-BY2 ?180～212 μm熒光微球，美國(guó)Cospheric公司產(chǎn)品，批號(hào)：100309-7。YLS-13A大小鼠抓力測(cè)定儀，北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責(zé)任公司。臺(tái)式MIKRO 22R離心機(jī)，德國(guó)Hettich公司產(chǎn)品。超聲破碎儀，VCX150PB型，美國(guó)SONICS公司。針筒式微孔濾膜過(guò)濾器：水系(0.22 μm)，天津騰達(dá)過(guò)濾器廠產(chǎn)品。TELTA 320 pH計(jì)，上海Mettler Toledo儀器公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 參考文獻(xiàn)[3-4]進(jìn)行改良，建立多發(fā)性腦梗死大鼠模型。動(dòng)物4.0%水合氯醛腹腔注射麻醉(400 mg/kg)，保溫毯上仰臥位固定，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)及頸外動(dòng)脈(ECA)，結(jié)扎ECA并剪斷，CCA用絲線打活結(jié)暫時(shí)阻斷，用動(dòng)脈夾夾閉ICA后，于ECA剪開切口，注射熒光微球混懸血清，致使大腦動(dòng)脈多發(fā)性阻塞。假術(shù)組只分離CCA結(jié)扎ECA，不注射微球。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保溫毯設(shè)定溫度37～37.5 ℃，保持大鼠體溫。術(shù)后24 h動(dòng)物進(jìn)行神經(jīng)學(xué)評(píng)分，剔除0分及4分大鼠，其余隨機(jī)分組：假手術(shù)組，模型組，金納多組(18 mg/kg)，銀杏葉提取物組(9 mg/kg)，天麻蜜環(huán)菌素片組(600 mg/kg)，天麻蜜環(huán)菌粉組(300 mg/kg)，銀杏蜜環(huán)口服溶液組(618 mg/kg)，銀杏蜜環(huán)口服溶液組(309 mg/kg)。

1.2.2 給藥方法 術(shù)后2 d開始灌胃給藥，給藥體積為5 mL/kg(銀杏蜜環(huán)口服溶液高劑量組給藥體積為6 mL/kg)，連續(xù)給藥28 d。末次給藥后動(dòng)物進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，并測(cè)定左前爪抓力。麻醉取血，分離血清冷凍保存，并迅速取出大腦，離后緣4 mm處冠狀切一刀，分離紋狀體，液氮固化，-80 ℃保存，高效液相-電化學(xué)法測(cè)定中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)，后腦區(qū)福爾馬林固定，經(jīng)脫水、包埋、切片、HE染色，分析腦組織的病理變化，免疫組化觀察微血管、膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的修復(fù)情況。

1.2.3 行為學(xué)檢測(cè) 術(shù)后24 h采用單盲法觀察神經(jīng)行為學(xué)。以Longa 5分制評(píng)分，其標(biāo)準(zhǔn)為：無(wú)神經(jīng)損傷癥狀，0分；不能完全伸展左側(cè)前爪，1分；向非缺血側(cè)轉(zhuǎn)圈，2分；行走時(shí)向非缺血側(cè)傾倒，3分；不能自發(fā)行走，意識(shí)昏迷，4分。給藥28 d后再次評(píng)分

1.2.4 抓力檢測(cè) 右手抓持大鼠后按放在抓力測(cè)定儀的抓力板上，左手向前推住抓力板，然后右手向后滑至鼠尾部，左手輕輕松開抓力板，待大鼠用左側(cè)前爪用力抓住抓力板時(shí)及時(shí)加力后拉，測(cè)定大鼠的最大抓力。每個(gè)動(dòng)物測(cè)定3次，取平均值作為該大鼠的抓力值。

1.2.5 Glu/GABA測(cè)定

1.2.5.1 色譜條件 Waters XTerra MS C18色譜柱(3.0 mm×50 mm，2.5 μm)，流動(dòng)相：100 mM磷酸氫二鈉，20%甲醇，3.5%乙腈，pH值(6.70±0.02)。ESA 582液相泵流速為0.4 mL/min；電勢(shì)+150，+650 mV；柱溫30 ℃。氨基酸衍生程序 4 ℃，吸取50 μL衍生工作液，加入25 μL腦勻漿樣品中，混合3次，30 μL/次，靜置1 min，進(jìn)樣20 μL分析。

1.2.5.2 氨基酸衍生試劑儲(chǔ)備液的配制 27 mg OPA，溶于1 mL甲醇，加入5 μL βME，加入9 mL，0.1 mol/L硼酸溶液(NaOH調(diào)至pH 9.3)，4 ℃保存，5 d內(nèi)使用。

1.2.5.3 衍生工作液的配制 取2.5 mL氨基酸衍生試劑儲(chǔ)備液，加入7.5 mL，0.1 mol/L硼酸溶液(NaOH調(diào)至pH 9.3)，每日現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.6 病理學(xué)檢查 HE染色，光鏡下觀察腦組織梗死灶、神經(jīng)元數(shù)目、病變程度、小膠質(zhì)細(xì)胞增生程度等形態(tài)學(xué)指標(biāo)。

1.2.7 免疫組化 脫水10%中性福爾馬林固定，再行梯度脫水(70%酒精60 min×1、80%酒精60 min×1、90%酒精60 min×1、95%酒精60 min×1、100%酒精30-50 min×1、100%酒精60 min×1)，透明(二甲苯60 min×2)，浸蠟(蠟Ⅰ60 min×1、蠟Ⅱ60 min×1、蠟Ⅲ30 min×1)。包埋：用干凈的石蠟融化后澆注組織。切片：切片厚度5 μm。指標(biāo)檢測(cè)及檢測(cè)方法采用PV-6000二步法免疫組化法。采集圖像及圖像分析：CREB抗體著色表達(dá)細(xì)胞核，其余抗體著色表達(dá)細(xì)胞胞質(zhì)，高倍鏡下拍攝3個(gè)視野，將采集的圖像應(yīng)用Image-pro Plus 5.1圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，所得數(shù)據(jù)作免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性信號(hào)累積光密度(IOD)，以IOD值作為組織表達(dá)的定量標(biāo)準(zhǔn)。累積光密度(IOD)=平均光密度(AOD)×陽(yáng)性面積(A)。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)MCI大鼠神經(jīng)功能評(píng)分和抓力的影響 術(shù)后24 h進(jìn)行為學(xué)評(píng)分，假手術(shù)組動(dòng)物神經(jīng)行為未發(fā)現(xiàn)異常；手術(shù)造成大鼠肢體行為學(xué)異常，可見明顯的神經(jīng)功能損傷，主要表現(xiàn)為左肩內(nèi)收、屈曲，前肢無(wú)力，向非缺血側(cè)轉(zhuǎn)圈，行走時(shí)向非缺血側(cè)傾倒等。按評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，去掉4分和0分大鼠并隨機(jī)分組，使組間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但與假手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。給藥28 d后，模型組行為學(xué)功能變化不大，與模型組比較，對(duì)照藥金納多18 mg/kg劑量組和銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg和309 mg/kg均有改善神經(jīng)癥狀的作用，其中銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg作用最強(qiáng)，309 mg/kg次之，但與金納多組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。給藥28 d后，與假手術(shù)組大鼠比較，MCI模型組大鼠抓力顯著減小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組大鼠比較，對(duì)照藥金納多組、銀杏葉提取物組以及銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg和309 mg/kg組大鼠抓力均明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.01)，與蜜環(huán)菌片及蜜環(huán)菌粉比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.01)。見表1。

2.2 對(duì)MCI大鼠腦組織谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)的影響 模型組大鼠腦組織內(nèi)腦內(nèi)谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)水平有所增加，與假手術(shù)組大鼠比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組大鼠比較，銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg組大鼠腦組織中Glu水平顯著降低；蜜環(huán)菌片600 mg/kg組、銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg組及309 mg/kg組的GABA水平顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.01)，金納多、銀杏葉提取物和天麻蜜環(huán)菌粉因大鼠個(gè)體差異較大，數(shù)據(jù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg組與金納多組比較，Glu水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg組與金納多、銀杏葉提取物組比較，GABA水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 對(duì)MCI大鼠神經(jīng)功能評(píng)分和抓力的影響

注：與假手術(shù)組比較,*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較,△P<0.05，△△P<0.01；與銀杏葉提取物比較,▲P<0.05，▲▲P<0.01；與天麻蜜環(huán)菌片比較,□P<0.05，□□P<0.01；與天麻蜜環(huán)菌粉比較,■P<0.05，■■P<0.01

表2 對(duì)MCI大鼠腦組織Glu、GABA的影響

注：與假手術(shù)組比較,*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較,△P<0.05，△△P<0.01；與金納多組比較,▲P<0.05，▲▲P<0.01；與銀杏葉提取物比較,□P<0.05，□□P<0.01

表3 對(duì)MCI大鼠血清TNF-α的影響

注：與假手術(shù)組比較,*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較,△P<0.05，△△P<0.01；與金納多組比較,▲P<0.05，▲▲P<0.01；與銀杏葉提取物比較,□P<0.05，□□P<0.01；與天麻蜜環(huán)菌片比較,■P<0.05，■■P<0.01；與天麻蜜環(huán)菌粉比較,#P<0.05，##P<0.01

2.3 對(duì)MCI大鼠血清TNF-α的影響 模型組大鼠血清TNF-α水平升高，與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較，金納多18 mg/kg組，天麻蜜環(huán)菌片600 mg/kg組，銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg和309 mg/kg組大鼠血清TNF-α水平均顯著降低(P<0.05～0.01)，以天麻蜜環(huán)菌片600 mg/kg組，銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg和309 mg/kg組最優(yōu)，天麻蜜環(huán)菌片600 mg/kg組與金納多組、銀杏葉提取物組以及天麻蜜環(huán)菌粉組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.01)；銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg和309 mg/kg組與金納多組、銀杏葉提取物組、天麻蜜環(huán)菌片組以及天麻蜜環(huán)菌粉組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表3。

圖1 各組腦組織病理形態(tài)比較

注：A假手術(shù)組，B模型組，C金納多組，D銀杏葉提取物組，E天麻蜜環(huán)菌片組，F(xiàn)天麻蜜環(huán)菌粉組，G銀杏蜜環(huán)口服溶液高劑量組，H銀杏蜜環(huán)口服溶液低劑量組。HE染色，×40

2.4 對(duì)MCI大鼠腦組織病理形態(tài)的影響 假手術(shù)組：腦組織均未見明顯異常，未見組織壞死灶及神經(jīng)元變性/壞死。模型組腦組織標(biāo)本均可見腦組織壞死灶，發(fā)生區(qū)域以單側(cè)丘腦區(qū)壞死灶最為常見，其次為大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)；主要表現(xiàn)為丘腦組織局灶性、多灶性或片狀壞死，壞死區(qū)可見組織細(xì)顆粒樣崩解或中央液化性壞死，神經(jīng)元變性/壞死(皺縮濃染)或消失，可伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)，以及壞死區(qū)和周圍組織膠質(zhì)細(xì)胞增生、組織空泡形成等壞死后修復(fù)反應(yīng)；大腦皮質(zhì)可見明顯組織壞死所致組織溶解缺失。與模型組比較，金納多組、銀杏蜜環(huán)口服溶液309 mg/kg組和618 mg/kg組腦組織壞死發(fā)生率均明顯降低，程度亦有明顯減輕，這3組腦組織均以壞死后組織修復(fù)反應(yīng)為主要表現(xiàn)，壞死急性期的反應(yīng)如組織崩解和液化性壞死發(fā)生率較低或程度較輕，大腦皮質(zhì)均未見明顯組織壞死，可明顯緩解和改善動(dòng)物腦梗死狀態(tài)；天麻蜜環(huán)菌片組腦組織壞死發(fā)生率和病變程度亦有降低，但不如上述3組明顯；天麻蜜環(huán)菌粉組腦組織壞死發(fā)生率略有降低，但病變程度無(wú)明顯降低；銀杏葉提取物9 mg/kg組腦組織壞死發(fā)生率和病變程度均無(wú)明顯降低，對(duì)緩解和改善動(dòng)物腦梗死狀態(tài)效果不顯著。見圖1。

表4 對(duì)MCI大鼠腦CD34、GFAP和NeuN表達(dá)的影響

注：與假手術(shù)組比較,*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較,△P<0.05，△△P<0.01

2.5 對(duì)MCI大鼠腦CD34、GFAP和NeuN表達(dá)的影響 免疫組化結(jié)果顯示，模型組CD34、GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多，表明壞死組織在修復(fù)；銀杏蜜環(huán)口服溶液309 mg/kg組和618 mg/kg組腦組織的CD34和蜜環(huán)菌粉組、銀杏蜜環(huán)口服溶液309 mg/kg組和618 mg/kg組腦組織的GFAP著色更重，與假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明修復(fù)作用強(qiáng)于模型組。模型組NeuN正常著色減少，壞死程度較重，與假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；天麻蜜環(huán)菌片600 mg/kg組，天麻蜜環(huán)菌粉300 mg/kg組，銀杏葉提取物9 mg/kg組及銀杏蜜環(huán)口服溶液618 mg/kg組的NeuN著色加強(qiáng)，與模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示銀杏蜜環(huán)口服溶液對(duì)緩解和改善動(dòng)物腦梗死狀態(tài)有促進(jìn)作用，對(duì)血管內(nèi)皮、膠質(zhì)細(xì)胞以及神經(jīng)元均有修復(fù)作用。見表4，圖2～4。

圖2 各組腦組織CD34表達(dá)的比較

注：A假手術(shù)組，B模型組，C金納多組，D銀杏葉提取物組，E天麻蜜環(huán)菌片組，F(xiàn)天麻蜜環(huán)菌粉組，G銀杏蜜環(huán)口服溶液高劑量組，H銀杏蜜環(huán)口服溶液低劑量組。×400

圖3 各組腦組織GFAP表達(dá)的比較

注：A假手術(shù)組，B模型組，C金納多組，D銀杏葉提取物組，E天麻蜜環(huán)菌片組，F(xiàn)天麻蜜環(huán)菌粉組，G銀杏蜜環(huán)口服溶液高劑量組，H銀杏蜜環(huán)口服溶液低劑量組?！?00

圖4 各組腦組織NeuN表達(dá)的比較

注：A假手術(shù)組，B模型組，C金納多組，D銀杏葉提取物組，E天麻蜜環(huán)菌片組，F(xiàn)天麻蜜環(huán)菌粉組，G銀杏蜜環(huán)口服溶液高劑量組，H銀杏蜜環(huán)口服溶液低劑量組?！?00

3 討論

Glu是哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，研究發(fā)現(xiàn)Glu可以有效促使培養(yǎng)的成人脊髓神經(jīng)元以及成人海馬神經(jīng)元恢復(fù)神經(jīng)電生理活動(dòng)。不僅如此，生理狀態(tài)下Glu通過(guò)激活興奮性氨基酸受體對(duì)神經(jīng)元的分化、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞耦聯(lián)以及長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)效應(yīng)和記憶的形成都有重要作用。只有在腦缺血缺氧急性損傷等病理情況下，Glu過(guò)度釋放，在神經(jīng)元外周間隙大量積聚時(shí)，可造成神經(jīng)元損傷。正常情況下，GABA受體的激活起到抑制興奮毒性、鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥、降血壓等生理作用，但在腦缺血時(shí)，其過(guò)度激活卻對(duì)神經(jīng)細(xì)胞有毒性作用[5]。本研究結(jié)果顯示，模型大鼠腦組織內(nèi)谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)水平顯著升高，銀杏蜜環(huán)口服溶液經(jīng)口給藥28 d，腦內(nèi)Glu和GABA水平顯著降低。

腦缺血發(fā)生后，會(huì)有一列的細(xì)胞因子介導(dǎo)炎性反應(yīng)，腫瘤壞死因子(TNF-α)就是其中之一。TNF-α是一種多肽類細(xì)胞因子，主要是由激活的單核巨噬細(xì)胞分泌產(chǎn)生的細(xì)胞因子，T細(xì)胞、B細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元都是其分泌細(xì)胞[6]。腦缺血發(fā)生時(shí)，TNF-α能介導(dǎo)白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)等多種炎性遞質(zhì)的產(chǎn)生。TNF-α還可以通過(guò)上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞上的黏附因子(ICAM-1)的表達(dá)加劇腦內(nèi)炎性反應(yīng)，增加血管通透性[7]；TNF-α還可刺激前列環(huán)素(PGI2)和血栓素B2(TXB2)的釋放，引起血管收縮和血小板聚集。TNF-α的水平與腦梗死以及行為障礙程度呈正相關(guān)[8]。本研究觀察到模型組大鼠血清TNF-α水平升高，銀杏蜜環(huán)口服溶液組血清TNF-α水平顯著下降。

CD34、GFAP、NeuN這3種抗體均可用來(lái)評(píng)價(jià)腦組織壞死后血管內(nèi)皮、膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元的修復(fù)反應(yīng)[9-11]，CD34和GFAP染色越強(qiáng)，說(shuō)明組織修復(fù)越明顯，在組織壞死及修復(fù)早期，這2種抗體染色較強(qiáng)，在組織修復(fù)后期會(huì)逐漸減弱。本研究觀察到模型組大鼠CD34、GFAP染色強(qiáng)于假手術(shù)組，表明腦損傷后腦組織有自修復(fù)的作用，灌胃給藥后，銀杏蜜環(huán)口服溶液組大鼠腦組織中CD34、GFAP染色強(qiáng)于模型組，表明血管內(nèi)皮、膠質(zhì)細(xì)胞的修復(fù)作用進(jìn)一步增強(qiáng)。NeuN正常著色減少越明顯，說(shuō)明腦組織壞死越嚴(yán)重，壞死周圍組織NeuN加深，可能提示壞死組織有修復(fù)趨勢(shì)。本研究觀察到模型組NeuN著色減輕，銀杏蜜環(huán)口服溶液組著色加深，表明有明顯的組織修復(fù)作用。

此外，銀杏蜜環(huán)口服溶液對(duì)神經(jīng)功能的改善和抑制腦內(nèi)Glu、GABA過(guò)度釋放作用顯著優(yōu)于銀杏葉提取物；增加抓力作用顯著優(yōu)于天麻蜜環(huán)菌；降低血清TNF-α水平程度則同時(shí)優(yōu)于兩者。結(jié)論：銀杏蜜環(huán)口服溶液有保護(hù)腦缺血，改善神經(jīng)功能的作用，復(fù)方優(yōu)于單一組份，且有一定的協(xié)同增效的作用。

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