王瑞娟，王 輝，晉小軍

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院，甘肅 蘭州 730070；2.甘肅長征藥業(yè)集團有限公司，甘肅 蘭州 730700）

柴胡（Bupleurum L.）為傘形科多年生草本植物，以干燥根入藥［1］，為我國大宗、常用的重要中藥材，素有藥中良藥之稱［2］。2010版《中華人民共和國國藥典一部》收錄的柴胡正品為柴胡（Bupleurum chinense DC.） 和 狹 葉 柴 胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.），前者習稱北柴胡，后者稱南柴胡［3］。柴胡始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品［4］，具有和解表里，疏肝解郁，升提中氣之功能，臨床應(yīng)用以北柴胡為主。經(jīng)藥理與臨床證實，具有保肝、解熱、抗菌、抗病毒、消炎、鎮(zhèn)咳、預(yù)防消化道潰瘍等作用，主治感冒發(fā)熱、寒熱往來、胸肋脹痛、月經(jīng)不調(diào)等病癥。近年來，隨著柴胡的藥用價值受到越來越多的重視，柴胡的市場需求正逐年遞增，有限的野生資源已無法滿足國內(nèi)外市場的龐大需求。為了緩解這種供需矛盾，人工栽培柴胡已成為當今商品柴胡的主流來源，除滿足國內(nèi)市場外，部分商品還出口日本、韓國等地。我國最早的柴胡人工種植基地為河南嵩縣，目前的三大柴胡栽培基地為黑龍江的明水縣、甘肅的隴西縣和山西的萬榮縣［5］。

目前，國內(nèi)外學者對柴胡的指標性成分、藥理作用、栽培技術(shù)、生長發(fā)育等方面進行了大量的研究，其研究結(jié)果對柴胡資源的有效利用具有重要的理論價值。之前報道過柴胡器官建成與干物質(zhì)積累的規(guī)律及栽培柴胡的總皂苷含量［6-7］。然而，針對甘肅中部地區(qū)柴胡在人工栽培技術(shù)，特別是對藥材有效成分積累影響較大的采收期缺乏研究。我們以渭源縣柴胡為材料，研究了不同時期采收對柴胡根系、產(chǎn)量、品質(zhì)的影響，旨在為其最佳采收期的確立提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與儀器

試驗材料為兩年生半干旱地區(qū)柴胡，柴胡種子購自甘肅省渭源縣渭水源中藥材市場。試驗于2012—2013年在渭源縣清源鎮(zhèn)張家灣村進行，2012年5月穴播，行距15cm、株距8cm，面積為30 m2。

試驗儀器為島津LC20-AT液相色譜儀、waters2695-2998液相色譜儀、超聲清洗器（250W，40 kHz）。試驗藥劑為柴胡皂苷（110777-200507）、柴胡皂苷d（110778-200506），均由中國藥品生物制品檢定所提供，柴胡皂苷c由天津馬克生物技術(shù)有限公司提供。甲醇、乙腈（色譜純），屈臣氏蒸餾水。

1.2 試驗方法

從2013年5月開始，每月25日從小區(qū)東、西、南、北、中5個方位分別隨機抽取15株健康生長的柴胡樣本，測定根長、根粗、根干重、植株鮮生物量和干生物量、產(chǎn)量、柴胡皂苷含量、柴胡皂苷單位面積產(chǎn)量等指標。

柴胡皂苷單位面積產(chǎn)量=經(jīng)濟產(chǎn)量（kg/hm2）×柴胡皂苷含量（%）

折干率=干生物量/鮮生物量×100

1.3 柴胡皂苷測定方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱為Kromasil-C18柱（250×4.6mm，5 μm），流動相為乙腈（A）-水（B），依《中國藥典2010年版》規(guī)定進行梯度洗脫，流動相比例見表1。檢測波長為210 nm。在上述色譜條件下，柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d與其他峰能達到較好的分離［9］。對照品及樣品HPLC圖譜見圖1和圖2。

1.3.2 對照品溶液的制備 精密稱定柴胡皂苷c、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的對照品分別為7.16 mg、5.18 mg、7.61 mg，置于10mL同一量瓶中，用色譜甲醇定容，制得混合對照品溶液，于4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 梯度洗脫

1.3.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末（過4號篩）約0.5 g，置于具塞錐形瓶中，加入含5%濃氨試液的甲醇溶液25mL，密塞，30℃水溫超聲處理（功率200 W，頻率40 kHz）30min，過濾；用甲醇20mL分2次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，并回收溶劑至干。殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過0.45 μm的濾膜，即得。

1.3.4 線性范圍 分別精密吸取以上對照品溶液0.1、2、5、10、20 μL注入高效液相色譜儀，按以上色譜條件進行分析。分別以對照品的量C（μg）為縱坐標、峰面積Y為橫坐標繪制標準曲線并進行回歸計算，得到柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d的標準曲線回歸方程及線性范圍如下。各化合物在相應(yīng)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 混合對照品HPLC圖譜

圖2 柴胡樣品HPLC圖譜

柴胡皂苷 a：Y=0.000 005C+0.033 0，r=0.999 8，線性范圍為0.071 6～14.32 μg。

柴胡皂苷 c：Y=0.000003C+0.0088，r=0.9997，線性范圍為0.051 8～10.36 μg。

柴胡皂苷 d：Y=0.000 005C-0.062 7，r=0.999 5，線性范圍為 0.076 1～15.22 μg。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Excel進行圖表處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 根部生長動態(tài)

從表2可以看出，根長5—10月每月依次增量為27.09%、25.95%、27.51%、13.36%、0.23%。根粗5—10月每月依次增量為14.29%、23.21%、8.70%、21.33%、1.10%?？梢?，柴胡根長在7—8月增長最快，而根粗6—7月增長最快。總體來說，柴胡根部5—9月穩(wěn)定增長，到10月之后幾乎沒有變化。

根干重5—10月每月依次增量為125.81%、108.57%、0，63.70%、-1.67%。從根長、根粗、根干重指標數(shù)據(jù)的變化可看出，柴胡根部生長從5—9月一直處于生長階段，6—7月期間生長比較快，9月下旬根干重達到最大。

表2 柴胡的根部生長變化

2.2 鮮、干生物量

從表3可以看出，鮮生物量5—10月每月依次增量為300.05%、57.72%、76.47%、127.21%、-18.87%。總體來說，鮮生物量在5—9月以不同增速一直保持上升趨勢，至10月出現(xiàn)明顯下降趨勢。5個月之間，植株總鮮生物量增加了39.28 g。在柴胡的生長過程中，鮮生物量5—9月持續(xù)增加，其中5—6月增加最明顯，至10月份明顯降低。5月25日測得的樣本干生物量為0.59 g，6月25日為2.28 g，增幅為286.44%?？傮w來說，干生物量在5—9月還是以不同增速一直保持上升趨勢，其中5—6月和7—8月增幅比較明顯。而8月25日為13.95 g，干重增加了9.52 g，增幅為214.90%。9月25日為18.82 g，仍然以較快的速度增加了4.87 g。而10月25日增幅-2.75%。總體來說，折干率8月下旬達到最大。從干生物量累積情況可以看出，柴胡生物量累積高峰期在9月下旬，之后生物量明顯降低。9月下旬其生物量累積達到最大。

表3 柴胡的植株鮮、干生物量變化情況

2.3 品質(zhì)

根據(jù)《中國藥典2010版》規(guī)定，柴胡按干燥品計算，含柴胡皂苷a（C42H68O13）和柴胡皂苷d（C42H68O13）的總量不得少于0.30%。從表4可知，隨著柴胡的生長，其皂苷含量（柴胡皂苷a+d）6—8月呈遞增趨勢，8月下旬達到最大，9月開始呈下降趨勢。自7月下旬到10月，柴胡皂苷含量基本穩(wěn)定在0.39%～0.42%。從柴胡皂苷含量的動態(tài)變化可以看出，8月下旬，其皂苷含量達到最大（0.416 7%）。單位面積皂苷產(chǎn)量（經(jīng)濟產(chǎn)量×皂苷含量）5—9月以不同的增幅穩(wěn)定增加，在5個月期間共增加6.658 8 kg/hm2，9月25日達到最大，為8.267 4 kg/hm2，10月25日開始呈現(xiàn)下降趨勢。

表4 柴胡的品質(zhì)變化

2.4 生物學產(chǎn)量與干根產(chǎn)量

從表5可知，生物學產(chǎn)量在7—9月大幅度增加，5個月期間共增加15 141.61 kg/hm2；而干根產(chǎn)量，即經(jīng)濟產(chǎn)量從5月25日的258.33 kg/hm2增至 10月25日的 2 008.33 kg/hm2，共增加 1 750 kg/hm2。10月份果實成熟之后，植株進入干枯期，生物產(chǎn)量有下降趨勢。9月下旬柴胡產(chǎn)量達到最高。

2.5 經(jīng)濟效益

從表5可以看出，種植柴胡的純收入從5—9月以不同的增幅上升，其中8—9月增幅最大，9月下旬達到到最大，之后10月進入柴胡干枯期，純收入出現(xiàn)下降趨勢。柴胡生長期為2 a，根據(jù)試驗可得，柴胡干根產(chǎn)量為2 008.33 kg/hm2、秸稈產(chǎn)量為13 624.94 kg/hm2。按市場收購價柴胡根均60元/kg、柴胡秸稈均以3元/kg計，2 a總產(chǎn)值為161 374.64元/hm2，扣除化肥、農(nóng)藥、農(nóng)家肥、種子、人工、澆水等各項生產(chǎn)成本費用10 360元/hm2，2 a純收入可達151 014.64元/hm2。

3 小結(jié)與討論

試驗結(jié)果表明，柴胡根長、根粗、根干重從5—9月一直在上升，根干重在9月下旬達到最大。柴胡生物量累積高峰期在6—9月，7—8月累積速度最快，10月份植株鮮生物量明顯降低，干生物量也呈下降趨勢，9月下旬生物量累積達到最大。10月份之后，進入干枯期，生物產(chǎn)量、經(jīng)濟產(chǎn)量、皂苷含量、單位面積皂苷產(chǎn)量均有下降趨勢。

柴胡皂苷含量、產(chǎn)量和經(jīng)濟效益是確定柴胡采收期的主要指標。柴胡產(chǎn)量9月最高，皂苷含量以8月最高，經(jīng)濟效益9月最大。柴胡根干重、生物量、產(chǎn)量、皂苷含量、單位面積皂苷產(chǎn)量從5—9月一直上升，在9月下旬達到最大，之后下降。干根產(chǎn)量為2 008.33 kg/hm2，而大部分柴胡的干生物量為1500～2 800 kg/hm2，從以上結(jié)果可得，9月下旬為柴胡最佳采收期。

本試驗的柴胡經(jīng)濟產(chǎn)量屬于偏低。熊飛等人的研究表明，采用精細育苗及高產(chǎn)栽培技術(shù)，可使柴胡產(chǎn)量增至2250～3 000 kg/hm2［9］。采收期是藥材生產(chǎn)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，直接影響藥材的品質(zhì)。藥材有效成分的積累具有一定的規(guī)律，按照有效成分積累規(guī)律進行采收可以保障藥材的質(zhì)量，反之則導(dǎo)致藥材質(zhì)量的下降［10-11］。

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