邱 濰，陳 新，章 慧

(武漢輕工大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，湖北武漢 430023)

咸蝦花(Vernoniapatula)是菊科斑鳩菊屬的植物。該屬植物約1 000種，主產(chǎn)熱帶地區(qū)。我國(guó)有30余種，分布在西南至東南部和臺(tái)灣[1]。該屬植物我國(guó)民間作為草藥入藥，全草藥用，發(fā)表散寒，清熱止瀉;可治急性腸胃炎、風(fēng)熱感冒、頭痛、瘧疾等癥[2]；美洲該屬植物被用作驅(qū)蟲、抗瘧植物藥,療效顯著。國(guó)內(nèi)外學(xué)者曾對(duì)該屬植物的化學(xué)成分有較多研究，發(fā)現(xiàn)主要成分為倍半萜類、三萜、黃酮、甾體、揮發(fā)油等，這些成分展現(xiàn)了多方面的藥理活性，如抗腫瘤、抗真菌、抗瘧等[3]。為了發(fā)現(xiàn)抗腫瘤活性物質(zhì)，筆者對(duì)咸蝦花乙醇提取物活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，旨在為合理開發(fā)利用這類藥用植物提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料咸蝦花全草采集于中國(guó)福建，由福建省亞熱帶植物研究所陳華良博士鑒定為Vernoniapatula，藥材標(biāo)本保存于武漢輕工大學(xué)天然產(chǎn)物資源開發(fā)與利用研究室。

1.2儀器與試劑Bruker AV 400型核磁共振波譜儀(瑞士布魯克公司)；十萬分之一分析天平(日本島津，AUWl20D)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州丹瑞實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司，HH-D4)；柱層析硅膠(100～200目，青島海洋化工廠)；MCI GEL CHP 20P (日本三菱化學(xué)公司)；D101大孔吸附樹脂(天津興南允能高分子技術(shù)有限公司)；ODS中壓色譜柱填料(日本YMC公司)；Sephadex LH-20 (Pharmacia 公司)；化學(xué)試劑均為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.3研究方法咸蝦花全草5 kg，粉碎，以95%乙醇加熱回流提取3次，將提取液合并濃縮，得浸膏500 g。將浸膏混懸于水經(jīng)D101大孔樹脂色譜分離，水-乙醇梯度洗脫(100∶0～5∶95)。通過TLC檢測(cè)，并合并得到5個(gè)部分(A～E)。第二部分B，經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯-甲醇-水梯度洗脫)得到4個(gè)部分Fr I～I(xiàn)V，F(xiàn)r I經(jīng)過MCI樹脂(甲醇-水梯度洗脫)，硅膠柱層析(氯仿-甲醇梯度洗脫)、反相柱層析(甲醇-水梯度洗脫)以及凝膠柱層析(甲醇洗脫)進(jìn)行分離純化，得化合物2(16.5 mg)、化合物5(17.3 mg)和化合物6(8.6 mg)。第二部分Fr II，經(jīng)MCI樹脂(甲醇-水梯度洗脫)，硅膠柱層析(氯仿-甲醇梯度洗脫)、MPLC以及凝膠柱層析(甲醇洗脫)進(jìn)行分離純化，得化合物3(9.8 mg)和化合物7(12.8 mg)。第三部分Fr III，經(jīng)硅膠柱層析以及MPLC進(jìn)行分離純化，得化合物1(20.9 mg)、化合物4(11.2 mg)。

2 結(jié)果與分析

試驗(yàn)分離得到的各化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示，其波譜數(shù)據(jù)描述如下。

2.1化合物1白色粉末，1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ：7.56 (1H，d，J=16.0 Hz，H-7)，7.05 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.96 (1H，dd，J=8.0，2.0Hz，H-6)，6.79 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.25 (1H，d,J=16.0 Hz，H-8)；13C-NMR (CD3OD，100 MHz) δ： 173.2 (C-9)，151.5 (C-7)，149.1 (C-3)，148.8 (C-4)，127.9 (C-1)，124.7 (C-6)，118.4 (C-5)，115.7 (C-8)，117.2 (C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的化合物Caffeic acid基本一致。

2.2化合物2淺黃色粉末，1H-NMR(DMSO-d6，400MHz) δ：7.52 (1H，d，J=14.8 Hz，H-7)，7.06 (1H，s，H-2)，6.98 (1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.78 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5)， 6.29 (1H，d， J=14.8 Hz，H-8)，3.69 (3H，s，OCH3);13C-NMR (DMSO-d6，100 MHz) δ：168.1 (C-9)，149.6(C-3)，146.8 (C-4)，146.3 (C-7)，126.5 (C-1)，122.6 (C-6)，116.8 (C-8)，115.8 (C-5)，114.7 (C-2)，52.2 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的化合物Caffeic acid methyl ester 基本一致。

圖1 咸蝦花7個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of 7 chemical compounds from Vernonia patula

2.3化合物3白色粉末，1H-NMR (DMSO-d6，400MHz) δ：9.41 (brs，OH)，9.39 (brs，OH)，7.48 (1H，d，J=15.9 Hz，H-7)，7.46 (1H，d，J=15.9 Hz，H-7″)， 7.10 (1H，d，J=2.1 Hz，H-2′)，7.09 (1H，d，J=2.1 Hz，H-2″)，7.06 (1H，dd，J=8.0，2.0Hz，H-6′)、6.95 (1H，dd，J=8.0，2.0Hz，H-6″)，6.82 (2H，d，J=8.2 Hz，H-5′，H-5″)，6.31 (1H，d，J=15.9Hz，H-8′)，6.19 (1H，d，J=15.9Hz，H-8″)， 5.34 (1H，m，H-3)，5.03 (1H，dd，J=7.0，3.1 Hz，H-4)，4.21 (1H，m，H-5)，3.67 (3H，s，OCH3)，2.30 (2H，m，H-2a，H-6a)，2.02 (2H，m，H-2b，H-6b)；13C-NMR (DMSO-d6，100 MHz) δ：173.7 (C-7)，167.8 (C-9″)，165.6 (C-9′)，148.8 (C-4″)，148.7 (C-4′)，145.9 (C-7″)，145.9(C-7′)，145.8(C-3″)，145.8(C-3′)，125.8 (C-1″)，125.6 (C-1′)，121.8 (C-6″)，121.6 (C-6′)，115.9 (C-5″)，115.2 (C-5′)，115.2 (C-2″)，114.9 (C-2′)，114.3 (C-8″)，113.7 (C-8′)，73.4 (C-1)，73.8 (C-3)，73.5 (C-4)，65.8 (C-5)，53.1 (-OCH3)，37.8 (C-6)，36.7 (C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的化合物3,4-di-O-caffeoyl quinic acid methyl ester基本一致。

2.4化合物4白色粉末，1H-NMR (DMSO-d6，400MHz) δ：7.44 (1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，7.06 (1H，d，J=2.0 Hz， H-2′)，6.98 (1H，dd ，J=8.0，2.0 Hz，H-6′)，6.77 (2H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.21 (1H，d，J=16.0 Hz，H-8′)， 5.14 (1H，d，J=5.0 Hz ，H-3)，3.93 (1H，s，H-5)，3.53 (1H，d，J=6.4，H-4)， 2.04 (2H，m，H-2a，H-6a)，1.71 (2H，m，H-2b，H-6b)；13C-NMR (DMSO-d6，100 MHz) δ：177.8 (C-7)，168.7 (C-9′)，148.5 (C-4′)，147.2 (C-7′)，147.7 (C-3′)，127.0 (C-1′)，123.5 (C-6′)，118.0 (C-5′)，117.0 (C-2′)，116.6 (C-8′)，76.3 (C-1)，73.7 (C-3)，70.2 (C-4)，69.8 (C-5)，39.8 (C-6)，39.6 (C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的化合物3-O-caffeoyl quinic acid基本一致。

2.5化合物5白色粉末，1H-NMR (DMSO-d6，400MHz)δ：9.68 (1H，brs， OH)，9.38 (1H，brs，OH)，7.48 (1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，7.15 (1H，brs，H-2′)，6.98 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.89 (1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6′)，6.23 (1H，d，J=16.0 Hz，H-8′)，4.90 (1H，d，J=5.0 Hz，H-3)，3.98 (1H，d，J=2.6 Hz，H-5)，3.71(3H，s，H-OCH3)，3.67 (1H，d，J=6.4，H-4)，2.18 (2H，m，H-2，H-6)，1.85 (2H，m，H-2，H-6)；13C-NMR (DMSO-d6，100 MHz) δ：175.6 (C-7)，167.0 (C-9′)，150.3 (C-4′)，147.6 (C-7′)，147.0 (C-3′)，127.3 (C-1′)，123.2 (C-6′)，117.6 (C-5′)，116.3 (C-2′)，115.7 (C-8′)，74.9 (C-1)，72.9 (C-3)，69.8 (C-4)，68.7 (C-5)，39.1 (C-6)，36.9 (C-2)，51.7 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的化合物3-O-caffeoyl quinic acid methyl ester基本一致。

2.6化合物6白色粉末，1H-NMR (DMSO-d6，400MHz) δ：7.54 (1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，7.10 (1H，brs， H-2′)，6.96 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.82 (1H，d，J=8.0 Hz，H-6′)，6.26 (1H，d，J=16.0 Hz，H-8′)，5.26 (1H，d，J=2.6 Hz ，H-5)，3.89 (1H，d，J=6.4，H-4)，3.69 (1H，d，J=5.0 Hz，H-3)，3.58(3H，s，H-OCH3)， 2.09 (2H，m，H-2a，H-6a)，1.77 (2H，m，H-2b，H-6b)；13C-NMR (DMSO-d6，100 MHz) δ：176.2 (C-7)，168.6 (C-9′)，148.2 (C-4′)，147.9 (C-7′)，146.9 (C-3′)，127.2 (C-1′)，123.6 (C-6′)，117.8 (C-5′)，116.2 (C-2′)，116.7 (C-8′)，74.7 (C-1)，71.6 (C-3)，72.6 (C-5)，69.6 (C-4)，51.9 (-OCH3)，39.9 (C-2)，36.8 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的化合物5-O-caffeoyl quinic acid methyl ester基本一致。

2.7化合物7白色粉末，1H-NMR (DMSO-d6，400MHz) δ：12.58 (brs，COOH)，9.62 (brs，OH)，9.51 (brs，OH)，7.51 (1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，7.46 (1H，d，J=16.0Hz，H-7″)，7.15 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.13 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2″)，7.02 (1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6′)、7.00 (1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6″)，6.89 (2H，d，J=8.0 Hz，H-5′，H-5″)，6.76 (2H，d，J=8.0 Hz，H-5″)，6.24 (1H，d，J=16.0 Hz，H-8′)，6.13 (1H，d，J=16.0 Hz，H-8″)，5.22 (2H，m，H-3)，5.11 (1H，dd，J=8.0，3.5 Hz，H-4)，2.08 (2H，m，H-2a，H-6a)，1.89 (2H，m，H-2b，H-6b)；13C-NMR (DMSO-d6，100 MHz) δ：175.6 (C-7)，165.9 (C-9″)，165.5 (C-9′)，148.3 (C-4″)，148.1 (C-4′)，144.8 (C-7″)，144.6 (C-7′)，145.6 (C-3″)，145.2 (C-3′)，125.7 (C-1″)，125.5 (C-1′)，121.3 (C-6″)，121.4 (C-6′)，115.9 (C-5″)，115.7 (C-5′)，114.9 (C-2″)，114.5 (C-2′)，114.8 (C-8″)，114.3 (C-8′)，72.5 (C-1)，70.9 (C-4)，70.3 (C-5)，67.2 (C-3)，35.3 (C-2)，34.7 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的化合物4,5-di-O-caffeoyl quinic acid基本一致。

3 結(jié)論

該研究通過系統(tǒng)分離純化，從咸蝦花全草乙醇提取物中分離鑒定了7個(gè)苯丙素類化合物，結(jié)構(gòu)鑒定分別為Caffeic acid、 Caffeic acid methyl ester、 3,4-di-O-caffeoyl quinic acid methyl ester、3-O-caffeoyl quinic acid、3-O-caffeoyl quinic acid methyl ester、5-O-caffeoyl quinic acid methyl ester、4,5-di-O-caffeoyl quinic acid。經(jīng)檢索，7個(gè)化合物均為首次從該植物中分離得到，該類化合物具有顯著的抗腫瘤、抗氧化、抗炎等活性。

[1] 中國(guó)科學(xué)院《中國(guó)植物志》編輯委員會(huì).中國(guó)植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1985.

[2] 劉清華，楊峻山，索茂榮.斑鳩菊屬的倍半萜內(nèi)酯類及甾體皂苷類化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2007，32(1)：10-17.

[3] 孫力，巴玉蘭，于魯海，等.斑鳩菊屬植物藥理活性研究進(jìn)展[J].新疆中醫(yī)藥，2009，27(6)：82-85.

[4] 彭德乾，高娟，郭秀梅，等 蒙古蒲公英根化學(xué)成分研究[J].中成藥， 2014,36(7)：1462-1466.

[5] 屠鵬飛，吳衛(wèi)中，鄭俊華，等．太白米的酚酸類成分研究[J]．藥學(xué)學(xué)報(bào)，1999，34(1)：39-42．

[6] MORISHITA H，IWAHASHI H，OSAKA N，et al. Chromatographic separation and identification of naturally occurring chlorogenic acids by1H nuclear magnetic resonance spectroscopy and mass spectrometry[J].J Chromatogr，1984， 315：253-260.

[7] 尹凱，高慧媛，李行諾，等．皺皮木瓜的化學(xué)成分[J]．沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，23(12)：760-763．

[8] 秦民堅(jiān)，王衡奇．黃皮樹樹皮的化學(xué)成分研究[J]．林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2003，23(4)：42-46．

[9] 滕榮偉，周志宏，王德祖，等.白花刺參中的咖啡酰基奎寧酸成分[J]．波譜學(xué)雜志，2002，19(2)：167-174.