劉智萍,茍 凱,周月明,2*,陳猷鵬,2,郭勁松,2,程 錦

(1.重慶大學(xué)城市建設(shè)與環(huán)境工程學(xué)院，重慶 400045; 2.中國科學(xué)院重慶綠色智能技術(shù)研究院，重慶 400714)

我國是柑橘的重要原產(chǎn)地之一，據(jù)統(tǒng)計，2009年我國柑橘種植面積203.1萬hm2，產(chǎn)量已達(dá)2 520萬t，面積和產(chǎn)量均位居世界第一[1-2]。柑橘除直接食用外，大部分用于果汁加工，隨著柑橘原汁產(chǎn)量的增加，柑橘加工的副產(chǎn)品柑橘皮渣的量隨之增加，據(jù)統(tǒng)計我國柑橘每年約有100萬t用于果汁加工，產(chǎn)生50萬t柑橘皮渣，柑橘渣含水量高，容易變質(zhì)腐爛，長期保存和長途運輸比較困難，大量的柑橘皮渣嚴(yán)重影響人們的生產(chǎn)、生活及健康[3-4]。麩皮為小麥最外層的表皮，是面粉生產(chǎn)的主要副產(chǎn)物。其對氨基苯甲酸含量是植物中最高的，有恢復(fù)皮毛顏色的作用，常用作動物飼料[5]。

單細(xì)胞蛋白(singlecell protein，SCP)是通過培養(yǎng)大量細(xì)菌、酵母、其他真菌或者藻類，從中提取出的蛋白質(zhì)或生物菌體，作為一種人和動物的蛋白來源添加到人類食品和動物飼料中[6]。單細(xì)胞蛋白所含的營養(yǎng)物質(zhì)豐富，粗蛋白含量一般在30%～45%，此外還含有未知生長因子[7]。

國內(nèi)外對微生物發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料已進(jìn)行了初步研究[8]。Vaccarino等[9]研究綠色木霉(Trichodermaviride)和白地霉(Geotrichumcandidum)發(fā)酵柑橘皮生產(chǎn)單細(xì)胞飼料的最佳條件，在溫度28 ℃、pH 5.5、發(fā)酵時間60 h條件下，發(fā)酵產(chǎn)物中粗蛋白含量提升到20%。Nwabueze等[10]發(fā)現(xiàn)柑橘皮渣可以促進(jìn)釀酒酵母的生長，在pH 5.5、溫度36 ℃、時間12 h條件下，得到粗蛋白含量為57%的單細(xì)胞蛋白產(chǎn)品，粗蛋白含量大大提高。周煉等[11]發(fā)現(xiàn)當(dāng)產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis)、黑曲霉(Aspergillusniger)、康寧木霉(Trichodermakonigii)混合比例為3∶1∶2時，粗蛋白含量是純培養(yǎng)的3～4倍。殷鐘意等[12]研究表明單一菌種發(fā)酵不如混合菌種發(fā)酵的效果，當(dāng)發(fā)酵菌種為A.niger、米曲霉(Aspergillusoryzae)和扣囊復(fù)膜孢酵母(Saccharomycopsisfibuligera)時，粗蛋白含量可從10.00%提高到34.40%。李赤翎等[13]發(fā)現(xiàn)通過添加酵母可以將粗蛋白含量從8.17%提高到28.06%，粗蛋白提升明顯。王帥[3]發(fā)現(xiàn)柑橘皮渣發(fā)酵飼料可以促進(jìn)仔豬腸絨毛的生長發(fā)育，以及營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，從而提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。通過以上學(xué)者的研究，可以看出多菌種混合發(fā)酵柑橘皮渣具有明顯優(yōu)勢，可以顯著提高產(chǎn)品粗蛋白的含量[14]。

據(jù)報道，真菌對光的反應(yīng)不一，光照既可刺激真菌發(fā)育，也可抑制真菌發(fā)育[15-16]，并受其他環(huán)境因子或營養(yǎng)因子的影響[17-18]，光照顯著影響氨基酸和糖類的質(zhì)量和含量。在P.blakesleeanus中，光照降低鳥氨酸脫羧酶活性[19]。在B.emersonii中，光激活多糖合成和降低葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性[21]。在T.viride中，谷氨酸脫羧酶被光誘導(dǎo)，該酶催化L-谷氨酸α-脫羧變?yōu)棣?氨基酪酸[19，21]。在T.harzianum中，經(jīng)光照后在分生孢子發(fā)生階段磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶被下調(diào)[22]。Envoy不僅對光強(qiáng)烈地響應(yīng)，而且顯著影響纖維素酶基因的表達(dá)[23]。總之，真菌所需光強(qiáng)一般為10～1 500 lx，最佳光強(qiáng)因真菌種類而異[24-26]。國內(nèi)尚少見學(xué)者研究光強(qiáng)對微生物發(fā)酵柑橘皮渣生產(chǎn)蛋白質(zhì)飼料的影響。

以柑橘廢渣為主料，麩皮為輔料，通過固體發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白飼料，首先，對發(fā)酵混菌的最佳比例進(jìn)行優(yōu)化，在此基礎(chǔ)上通過單因子變量法逐步優(yōu)化固態(tài)發(fā)酵工藝，得到高品質(zhì)蛋白質(zhì)飼料。在最佳發(fā)酵條件下，考察光照強(qiáng)度對發(fā)酵飼料的影響，探索提高飼料品質(zhì)的新方法，對提高廢棄物資源化利用效率，解決我國蛋白飼料短缺問題，以及提高蛋白質(zhì)飼料品質(zhì)都具有重要意義。

1 材料與方法

1.1原料與菌種柑橘皮渣：榨汁剩余的皮渣，采自重慶長壽柑橘加工園區(qū)，作為發(fā)酵的主要原料。麩皮：重慶長壽農(nóng)業(yè)園區(qū)面粉廠加工后剩余的麩皮，作為發(fā)酵的輔助原料。菌種：康寧木霉(T.konigii)、米曲霉(A.oryzae)、熱帶假絲酵母(C.tropicalis)以及球擬圓酵母(T.globose)。T.konigii主要功能是降解粗纖維，A.oryzae主要功能是降解果膠，菌株功能由實驗室其他人員經(jīng)過試驗得出。

1.2培養(yǎng)基果膠固體培養(yǎng)基[25]，馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基[26]，纖維素固體培養(yǎng)基[26]，酵母膏蛋白胨固體培養(yǎng)基[27]。

1.3研究方法

1.3.1成分測定方法。粗脂肪、粗蛋白、粗纖維、灰分的測定采用國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5915-2008的方法[28]。果膠含量采用咔唑比色法[29]。有機(jī)碳(TOC)、總氮(TN)、總磷(TP)、氫(H)、硫(S)、鉀(K)采用元素分析儀測定。

1.3.2發(fā)酵方法。

(1)菌種復(fù)蘇。挑取菌體，用劃線法接種在對應(yīng)固體培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中，在30 ℃下培養(yǎng)48 h，至平板上出現(xiàn)明顯菌絲。

(2)種子液制備。挑取固體培養(yǎng)基上生長良好的菌落接種到對應(yīng)液體培養(yǎng)基中，放置于溫度30 ℃、轉(zhuǎn)速160 r/min的搖床中培養(yǎng)24 h。

(3)固態(tài)發(fā)酵。把種子液按比例接種到發(fā)酵基質(zhì)中，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基含水率，攪拌均勻后置于培養(yǎng)箱中按照所需溫度及時間發(fā)酵，產(chǎn)物于55 ℃烘干，備用。

1.4發(fā)酵條件優(yōu)化

1.4.1初始發(fā)酵條件。柑橘皮渣發(fā)酵蛋白質(zhì)飼料的初始條件：自然pH條件下，溫度30 ℃，菌液接種量0.5mL/g，柑橘皮渣質(zhì)量比例16%，麩皮質(zhì)量比例4% ，含水率質(zhì)量80%，時間3 d。發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵產(chǎn)物在55 ℃下烘干至恒重，然后對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行成分分析。

1.4.2發(fā)酵條件優(yōu)化。采用單因子變量法逐步優(yōu)化發(fā)酵試驗條件。發(fā)酵時間：48、60、72、84、96 h；發(fā)酵溫度：27、30、33、36、39、42 ℃；培養(yǎng)基含水率：50%、60%、70%、80%、90%；菌液接種量：0.1、0.2 、0.3 、0.4、0.5 、0.6 mL/g；光照強(qiáng)度：1 000、2 500、10 000 lx。

2 結(jié)果與分析

2.1柑橘皮渣主要成分分析對柑橘皮渣主要成分的含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明：除含水率為4.84%外，其他成分以干物質(zhì)質(zhì)量計，其中粗蛋白含量僅為11.86%，含量較低；粗纖維、果膠、粗脂肪分別為27.40%、9.47%、3.81%；TP、H、S、K、TOC、TN的含量分別為0.18%、6.74%、0.40%、0.45%、39.59%、0.80%。

2.2最佳菌種篩選與組合

2.2.1單菌發(fā)酵結(jié)果。設(shè)置空白組和試驗組，空白組用無菌水代替菌液按照0.5 mL/g接種到發(fā)酵基質(zhì)中，試驗組分別接種0.5 mL/g 的T.globosa、A.oryzae、T.konigii、C.tropicalis菌液到發(fā)酵基質(zhì)中，在初始發(fā)酵條件下，在絕干基礎(chǔ)上測定粗蛋白含量，結(jié)果表明空白組粗蛋白含量為14.63%，4株菌發(fā)酵后粗蛋白含量都有所上升，但是T.globosa發(fā)酵后粗蛋白含量僅提高了2.19百分點，其他3株菌發(fā)酵后粗蛋白含量都提高了4.67百分點以上，其中A.oryzae、T.konigii菌液處理的粗蛋白含量分別為19.90%、19.30%；C.tropicalis發(fā)酵后粗蛋白含量最高，達(dá)到了25.50%。

2.2.2多菌種發(fā)酵結(jié)果。保持上述試驗條件不變的情況下，接種液總量不變，不同菌種按等比例接種(例如：組A中T.globosa與T.konigii按照0.25 mL/g分別接種到發(fā)酵基質(zhì)中)，發(fā)酵結(jié)果如表1所示。

表1 多菌種發(fā)酵后粗蛋白含量

注：粗蛋白含量在絕干基礎(chǔ)上測得

Note:Crude protein content was determinated based on absolute dry

由表1可以看出，6種組合發(fā)酵產(chǎn)品粗蛋白含量較單菌發(fā)酵都有明顯提高，其中E組發(fā)酵效果最好，粗蛋白含量提高了14.67百分點，說明T.konigii、C.tropicalis和A.oryzae具有較好的兼容性，3株菌間的協(xié)同作用使粗蛋白的轉(zhuǎn)化率大大提升，且多菌株組合具有更好的生物穩(wěn)定性[30]。因此，后續(xù)試驗選取T.konigii、C.tropicalis、A.oryzae3株菌的組合作為發(fā)酵混菌。

2.2.3發(fā)酵混菌比例優(yōu)化。選用T.konigii、C.tropicalis、A.oryzae3株菌分別按照1∶1∶1、2∶2∶1、1∶2∶2、2∶1∶2比例混合，菌液接種總量為0.5 mg/L，其他條件不變，結(jié)果如表2所示。

由表2可以看出，第2組發(fā)酵產(chǎn)生的粗蛋白含量最高為32.89%，通過對比可以發(fā)現(xiàn)T.konigii和A.oryzae比例較高的時候，發(fā)酵產(chǎn)物粗蛋白含量較低，這主要是因為A.oryzae主要作用是分解果膠[31]，T.konigii主要作用是分解纖維素[32]，這2株菌生產(chǎn)蛋白的能力較差，當(dāng)混菌中這2株菌的含量較高時，粗蛋白的生產(chǎn)能力較差，而果膠和纖維素的分解能力較強(qiáng)；當(dāng)C.tropicalis比例較高時，發(fā)酵產(chǎn)物粗蛋白含量較高，這主要是因為C.tropicalis主要作用是生產(chǎn)蛋白質(zhì)。另外，第3組發(fā)酵后粗蛋白含量比第2組低2.75百分點，推測可能是因為原料中果膠含量為9.47%，而纖維素含量較高為27.40%(表2)。當(dāng)T.konigii含量較高時，混菌能將更多的纖維素大分子分解成小分子，為生產(chǎn)蛋白質(zhì)提供更多容易被利用的小分子物質(zhì)，所以第2組優(yōu)于第3組，主要是因為原料中粗纖維含量高于果膠含量。

表2 發(fā)酵混菌比例優(yōu)化

注：粗蛋白含量在絕干基礎(chǔ)上測得

Note:Crude protein content was determinated based on absolute dry

2.3最佳發(fā)酵條件的篩選采用單因子變量法逐步優(yōu)化發(fā)酵條件。

2.3.1時間對發(fā)酵飼料品質(zhì)的影響。當(dāng)發(fā)酵條件為30 ℃、自然pH、含水率80%、菌液接種量0.5 mL/g、T.konigii∶C.tropicalis∶A.oryza= 2∶2∶1時，結(jié)果如圖1所示。在48～84 h階段，粗蛋白、粗脂肪含量增長顯著，同時粗纖維含量急劇下降，在此階段微生物充分利用基質(zhì)中的營養(yǎng)物質(zhì)，快速合成蛋白質(zhì)。84 h以后，粗蛋白、粗脂肪含量趨于穩(wěn)定，主要因為營養(yǎng)物質(zhì)含量與微生物濃度達(dá)到平衡，微生物生長進(jìn)入穩(wěn)定期。因此，后續(xù)試驗選取84 h為最佳發(fā)酵時間。

圖1 發(fā)酵時間對飼料成分的影響Fig.1 Impact of fermentation time on feed ingredients

2.3.2環(huán)境溫度對發(fā)酵飼料品質(zhì)的影響。從圖2可以看出，當(dāng)溫度在30～42 ℃時，粗纖維含量都低于15.41%，該溫度范圍適合粗纖維的降解。而粗蛋白、粗脂肪含量在33 ℃最高，推測原因是33 ℃酶的活性較高，促進(jìn)了粗蛋白和粗脂肪的生產(chǎn)。因此，后續(xù)試驗選取33 ℃作為最佳發(fā)酵環(huán)境溫度。

圖2 溫度對飼料成分的影響Fig.2 Impact of fermentation temperature on feed ingredients

2.3.3培養(yǎng)基初始含水率對發(fā)酵飼料品質(zhì)的影響。由圖3可見，當(dāng)含水率為70%時，發(fā)酵產(chǎn)品粗蛋白、粗脂肪含量最高，粗纖維含量最低，主要是因為含水率為70%時，原料的松散度較好，適宜的孔隙有利于物質(zhì)和氧氣傳遞，當(dāng)培養(yǎng)基含水率低于70%時，原料膨脹度降低，影響物質(zhì)的傳遞，且水分含量不足以支持微生物生長。同時,過高的含水量導(dǎo)致培養(yǎng)基呈漿狀混合物，孔隙度降低，氧氣傳遞速率降低，微生物的代謝受到抑制，所以該研究采用70%為最佳含水率。

圖3 含水率對飼料成分的影響Fig.3 Impact of moisture content on feed ingredients

2.3.4菌液投加量對發(fā)酵飼料品質(zhì)的影響。從圖4可以看出，菌液接種量在0.1～0.4 mL/g，隨著菌液投加量增加，粗蛋白、粗脂肪含量隨之增大，粗纖維含量隨之降低，微生物與基質(zhì)逐步達(dá)到平衡；接種量超過0.4 mL/g后，粗蛋白和粗脂肪含量下降，同時粗纖維含量增大，其原因可能是微生物濃度過大，原料中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度有限，不能滿足所有微生物的生長需求，微生物生長和降解粗纖維能力受限，所以選擇0.4 mL/g作為最佳接種量。

圖4 菌液投加量對飼料成分的影響Fig.4 Impact of microbial added concentration on feed ingredients

研究得到的最佳發(fā)酵條件為：菌株投加比例T.konigii∶C.tropicalis∶A.oryzae=2∶2∶1，發(fā)酵時間84 h，溫度33 ℃，含水率70%，菌液接種量0.4 mL/g，在此條件下，微生物生產(chǎn)蛋白質(zhì)和脂肪以及降解粗纖維的能力最強(qiáng)，發(fā)酵后飼料中粗蛋白含量達(dá)到35.03%，粗脂肪含量達(dá)到4.92%，同時粗纖維含量低至12.08%。

2.4光照對發(fā)酵飼料品質(zhì)的影響在不同光照強(qiáng)度下，研究粗蛋白、粗纖維、粗脂肪含量的變化特征，其他發(fā)酵條件均采用最佳條件。

圖5 光照強(qiáng)度對于發(fā)酵結(jié)果的影響Fig.5 Impact of crude protein and crude fiber by light intensity

光照強(qiáng)度對發(fā)酵飼料的影響是在試驗過程中偶然發(fā)現(xiàn)的。由圖5可以得出，在光照強(qiáng)度為2 500 lx時，發(fā)酵后粗蛋白與粗脂肪含量達(dá)到最高,分別為36.42%、4.96%，與上文無光照試驗結(jié)果相比，粗蛋白和粗脂肪分別提高了1.39百分點和0.04百分點，說明微生物在2 500 lx的光強(qiáng)下生產(chǎn)蛋白和脂肪的能力增強(qiáng)。當(dāng)光照強(qiáng)度為1 000 lx時，粗蛋白與粗脂肪含量與無光照試驗一致，說明大于1 000 lx的光強(qiáng)才對微生物生產(chǎn)蛋白和脂肪能力有一定促進(jìn)作用，已有研究也有類似的報道，非光合微生物在光照刺激下活性增強(qiáng)，例如尹冬雪等[33]在2012年研究光照強(qiáng)度對豬糞、牛糞厭氧發(fā)酵的影響，發(fā)現(xiàn)光照條件比黑暗條件能產(chǎn)生更多的沼氣，光照對微生物生長代謝具有顯著影響。說明光照條件對非光合微生物的活性有一定的促進(jìn)作用。當(dāng)光照強(qiáng)度為10 000 lx時，粗蛋白與粗脂肪含量較無光照試驗分別降低了13.30百分點和1.43百分點，說明光強(qiáng)過大時，微生物生產(chǎn)蛋白質(zhì)和脂肪的能力都受到抑制。

由圖5還可以看出，光照條件下，發(fā)酵飼料中粗纖維含量都高于13.32%，且隨著光照強(qiáng)度增加，粗纖維含量越來越高，均高于無光照條件下發(fā)酵飼料中粗纖維的含量(12.08%)，說明光照條件不利于粗纖維的降解，推測原因可能是微生物在光照條件下產(chǎn)纖維素酶、半纖維素酶的能力受到抑制，導(dǎo)致纖維素降解率降低，含量上升。通過以上分析可以發(fā)現(xiàn)，光照條件對非光合微生物發(fā)酵飼料既有促進(jìn)作用又有抑制作用，作用機(jī)理需要進(jìn)一步研究才能得出。

3 結(jié)論

從熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)、康寧木霉(Trichodermakonigii)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、球擬圓酵母(Torulopsisglobosa)4株菌中，優(yōu)選出效果最佳的菌株并優(yōu)化菌株最佳混合比例，確定T.konigii∶C.tropicalis∶A.oryzae最優(yōu)比例為2∶2∶1，發(fā)酵時間84 h，溫度33 ℃，含水率70%，菌液接種量0.4 mL/g，發(fā)酵后粗蛋白含量達(dá)到35.03%，粗脂肪含量達(dá)到4.92%，同時粗纖維含量為12.08%。通過光照強(qiáng)度對發(fā)酵飼料的影響試驗可知，光強(qiáng)在1 000～2 500 lx時，可以促進(jìn)微生物生產(chǎn)蛋白質(zhì)和脂肪，當(dāng)光強(qiáng)為10 000 lx時，微生物生產(chǎn)蛋白質(zhì)和脂肪的能力受到抑制；另外，光照條件不利于粗纖維的降解，可能由于光照抑制了微生物產(chǎn)纖維素酶、木質(zhì)素酶或者半纖維素酶的活性，光強(qiáng)對3株菌發(fā)酵蛋白質(zhì)飼料的影響機(jī)理還需要進(jìn)一步的研究。

[1] 王穎.柑桔橘皮渣發(fā)酵飼料蛋白實驗研究[D].重慶:重慶工商大學(xué),2007.

[2] 李世忠,黃建國,李治玲,等.柑橘皮渣降解菌的篩選及特性[J].食品科學(xué),2014,35(23):188-192.

[3] 王帥.發(fā)酵柑橘渣對仔豬生長和腸道發(fā)育的影響[D].重慶:西南大學(xué),2014.

[4] 趙建,袁玲,黃建國,等.柑橘皮渣高溫堆肥生產(chǎn)有機(jī)肥[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報,2011,27(10):270-276.

[5] 王旭峰,何計國,陶純潔,等.小麥麩皮的功能成分及加工利用現(xiàn)狀[J].糧食與食品工業(yè),2006,13(1):19-22.

[6] DE GREGORIO A，MANDALARI G，ARENA N，et al.SCP and crude pectinase production by slurry-state fermentation of lemon pulps[J].Bioresource technology,2002,83(2):89-94.

[7] 趙蕾.柑橘皮渣單細(xì)胞蛋白飼料生產(chǎn)技術(shù)及對生長豬飼喂效果研究[D].雅安:四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

[8] MAMMA D,KOURTOGLOU E,CHRISTAKOPOULOS P.Fungal multienzyme production on industrial by-products of the citrus-processing industry[J].Bioresource technology,2008,99(7):2373-2383.

[9] VACCARINO C,LO CURTO R,TRIPODO M M,et al.SCP from orange peel by fermentation with fungim-Submerged and 'surface' fermentations[J].Biological wastes ,1989,29(4):279-287.

[10] NWABUEZE T U,OGUNTIMEIN G B.Sweet orange (Citrussenensis) residue as a substrate for single cell protein production[J].Biological wastes,1987,20(1):71-75.

[11] 周煉,王日葵,郭莉,等.甜橙皮渣發(fā)酵蛋白飼料的研制[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2005,31(5):51-54.

[12] 殷鐘意,王穎,鄭旭煦,等.柑桔皮渣發(fā)酵高蛋白飼料菌種篩選與工藝研究[J].飼料研究,2009(4):43-46.

[13] 李赤翎,李彥,俞建.柑橘皮渣發(fā)酵飼料研究[J].食品工業(yè)科技,2009(5):169-170.

[14] 單楊.我國柑橘工業(yè)現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J].農(nóng)業(yè)工程技術(shù),2014(4):13-17.

[15] MURAO S,SATOI S.Studies on Pepsin Inhibitor (S-PI) fromStreptomycesnaniwaensis[J].Bioscience,biotechnology,and biochemistry,1971,35(10):1477-1481.

[16] PARDO A G,FORCHIASSIN F.Effect of light and nutrition on fruiting ofAscobolusbiguttulatus[J].Current microbiology,1993,27(2):69-72.

[17] LAPOINTE D S,COHEN R J.Ornithine decarboxylase in Phycomyces:Invitro,andinvivo,properties[J].Archives of biochemistry & biophysics,1983,224(2):515-25.

[19] STRIGCOVJ,CHOVANEP,LIPTAJ T,et al.Glutamate decarboxylase activity inTrichodermavirideconidia and developing mycelia[J].Archives of microbiology,2001,175(1):32-40.

[20] GOLDSTEIN A,CANTINO E C.Light-stimulated polysaccharide and protein synthesis by synchronized,single generations ofBlastocladiellaemersonii[J].Journal of general microbiology,1962,28(4):689-99.

[21] GOLDMAN G H,GEREMIA R A,CAPLAN A B,et al.Molecular characterization and regulation of the phosphoglycerate kinase gene fromTrichodermaviride[J].Molecular microbiology,1992,6(9):1231-1242.

[22] PUYESKY M,PONCE-NOYOLA P,HORWITZ B A,et al.Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase expression inTrichodermaharzianumis repressed during conidiation and mycoparasitism[J].Microbiology,1997,143 (10):3157-3164.

[23] SCHMOLL M,FRANCHI L,KUBICEK C P.Envoy,a PAS/LOV domain protein ofHypocreajecorina(AnamorphTrichodermareesei),modulates cellulase gene transcription in response to light[J].Eukaryotic cell,2005,4(12):1998-2007.

[24] 鄭曉冬,張紅印,席玙芳.羅倫隱球酵母對草莓采后灰霉病害的生物防治[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報,2003,19(5):171-175.

[25] 藍(lán)麗精,周琴,蔡琪敏,等.一株高產(chǎn)果膠酶青霉菌株的篩選鑒定[J].浙江師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2011,34(4):452-456.

[26] 周宏.Cytophagahutchinsonii纖維素利用及運動相關(guān)基因的研究[D].濟(jì)南:山東大學(xué),2014.

[27] 馬恩陵,廉東波,李云玖,等.實時定量PCR檢測大腸埃希菌在LB培養(yǎng)基和血中對抗生素的藥物敏感性[J].中華臨床營養(yǎng)雜志,2006,14(4):212-216.

[28] 農(nóng)業(yè)部飼料工業(yè)中心.仔豬、生長肥育豬配合飼料：GB/T 5915—2008[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2009.

[29] 任雪梅,胡梅,周傳靜,等.咔唑比色法測定摻假蜂蜜中果膠的含量[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué),2011(3):100-102.

[30] 劉樹立.增加柑橘皮渣發(fā)酵飼料粗蛋白含量的菌種篩選研究[D].重慶：西南大學(xué),2008.

[31] 湯鳴強(qiáng),陳頡穎.海藻酸鈉固定化米曲霉產(chǎn)果膠酶及其性質(zhì)[J].食品研究與開發(fā),2010,31(9):167-170.

[32] 崔福綿,劉菡,韓輝.康寧木霉CP88329纖維素酶產(chǎn)生條件的研究[J].微生物學(xué)通報,1995,22(2):72-76.

[33] 尹冬雪,劉娟娟,季艷敏,等.光照強(qiáng)度對豬糞、牛糞厭氧發(fā)酵的影響研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報,2012,31(2):428-434.