崔艷紅,韓慶功,崔藝佳,賀永惠,王九峰,劉興友,劉長(zhǎng)忠

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,北京 100193；2.河南科技學(xué)院 動(dòng)物科技學(xué)院,河南新鄉(xiāng) 453003; 3.畜禽智能化清潔生產(chǎn)河南省工程實(shí)驗(yàn)室,河南新鄉(xiāng) 453003)

仔豬腹瀉是目前困擾養(yǎng)豬業(yè)的一大難題，多種因素均可引起。如蛋白質(zhì)飼料品質(zhì)差、消化吸收率低、有毒有害物質(zhì)含量高等營(yíng)養(yǎng)性因素，大腸桿菌、沙門(mén)氏菌感染等細(xì)菌性因素，斷奶、轉(zhuǎn)群等應(yīng)激性因素[1-2]。因此，如何改善營(yíng)養(yǎng)素特性，保持仔豬腸道微生態(tài)平衡，阻止病原菌入侵，增加腸道有益菌，同時(shí)減輕應(yīng)激因素造成的危害已經(jīng)成為預(yù)防仔豬腹瀉的研究熱點(diǎn)。

在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，使用抗生素促進(jìn)生長(zhǎng)、改善飼料利用率和降低發(fā)病率已經(jīng)有50多年的歷史，但隨著耐藥菌株甚至“超級(jí)細(xì)菌”[3]的出現(xiàn)及耐藥性的擴(kuò)散，抗生素的使用已經(jīng)嚴(yán)重影響中國(guó)動(dòng)物源性食品的安全。2015年9月，中國(guó)“禁抗令”正式出臺(tái)，農(nóng)業(yè)部“第2292號(hào)”公告指出，停止在食品動(dòng)物中使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星和諾氟沙星4種原料藥的各種鹽、酯及其各種制劑。因此，開(kāi)發(fā)安全、無(wú)殘留的新型飼用抗生素替代品已成為發(fā)展趨勢(shì)，目前常見(jiàn)的抗生素替代品有益生菌、益生元、酶制劑、酸化劑和植物提取物等，在生產(chǎn)實(shí)踐中通常聯(lián)合應(yīng)用[4-6]。益生菌復(fù)合發(fā)酵料選用植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌等微生物發(fā)酵斷奶仔豬飼料，發(fā)酵飼料的pH降低，有機(jī)酸和小肽質(zhì)量濃度升高，同時(shí)飼料中含有較高的活菌數(shù)，因此，益生菌發(fā)酵飼料理論上具備益生菌、酶制劑和酸化劑的功能。本試驗(yàn)擬通過(guò)在飼料中添加益生菌復(fù)合發(fā)酵料，探討該產(chǎn)品對(duì)斷奶仔豬消化環(huán)境、血清生化指標(biāo)和代謝激素水平的影響，為在養(yǎng)豬生產(chǎn)中合理使用益生菌發(fā)酵飼料解決斷奶仔豬腹瀉問(wèn)題提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 試驗(yàn)日糧 益生菌復(fù)合發(fā)酵料為畜禽智能化清潔生產(chǎn)河南省工程實(shí)驗(yàn)室研制，委托新鄉(xiāng)市酵守康飼料有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)日糧的組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 選擇胎次相近，分娩期相近的長(zhǎng)×大二元母豬12 頭，隨機(jī)分成2 個(gè)處理組(對(duì)照組和試驗(yàn)組)，各處理組試驗(yàn)仔豬以窩為單位，每個(gè)處理組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 頭仔豬，28 日齡斷奶仔豬共120 頭。仔豬從21 日齡開(kāi)始添加斷奶仔豬飼料，28 日齡轉(zhuǎn)群至保育舍。對(duì)照組和試驗(yàn)組同舍飼養(yǎng)，各重復(fù)組室內(nèi)均勻分布，條件盡可能一致，自由采食，自動(dòng)飲水，試驗(yàn)期共47 d。對(duì)照組飼喂含抗生素的基礎(chǔ)日糧(金霉素75 mg/kg 和喹乙醇50 mg/kg)，試驗(yàn)組飼喂90%無(wú)抗基礎(chǔ)日糧+10%益生菌復(fù)合發(fā)酵料。

1.1.3 試驗(yàn)地點(diǎn) 河南省鶴壁市河南誼發(fā)牧業(yè)有限公司種豬場(chǎng)。

表1 斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Basic dietary formula and nutrient level of weaning piglets (air-dried basis)

注：4%預(yù)混料為每千克日糧提供維生素A 2 500 IU/kg，維生素D 230 IU/kg，維生素E 18 IU/kg，維生素K 0.8 mg/kg，生物素0.08 mg/kg，膽堿0.55 g/kg，葉酸0.5 mg/kg，尼克酸35 mg/kg，泛酸14 mg/kg，維生素B11.5 mg/kg，維生素B23.5 mg/kg，維生素B68 mg/kg，維生素B1218 μg/kg，鈉0.38 g/kg，氯0.45 g/kg，鎂50 mg/kg，鉀0.28 g/kg，銅6.5 mg/kg，碘0.16 mg/kg，鐵100 mg/kg，錳4 mg/kg，硒0.3 mg/kg，鋅100 mg/kg。

Note： 4% premix is per kilogram of complete diet vitamin A 2 500 IU/kg, vitamin D 230 IU/kg, vitamin E 18 IU/kg,Vitamin K biotin 0.08 mg/kg, choline 0.55 g/kg, folic acid 0.5 mg/kg, nicotinic acid 35 mg/kg, pantothenic acid 14 mg/kg, vitamin B11.5 mg/kg, vitamin B23.5 mg/kg, vitamin B68 mg/kg, vitamin B1218 μg/kg, Na 0.38 g/kg, Cl 0.45 g/kg, Mg 50 mg/kg, K 0.28 g/kg, Cu 6.5 mg/kg, I 0.16 mg/kg, Fe 100 mg/kg, Mn 4 mg/kg, Se 0.3 mg/kg, Zn 100 mg/kg.

1.2 方 法

1.2.1 樣品采集 血樣：每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇2 頭，用10 mL注射器采集前腔靜脈血，4 ℃靜置過(guò)夜，待析出血清，4 500 r/min ( 4 ℃ )離心20 min，分離血清，-20 ℃保存。胃、腸道：采血后的仔豬腋動(dòng)脈放血屠宰，打開(kāi)腹腔，將胃及空腸中段兩端結(jié)扎，剪斷后將胃、空腸中段放置冰盒中，待測(cè)定pH。

1.2.2 胃腸道pH檢測(cè)指標(biāo) 用pH計(jì)直接檢測(cè)胃、空腸中部?jī)?nèi)容物的pH。

pH降低=[(對(duì)照組的平均值 -試驗(yàn)組的平均值) /對(duì)照組的平均值]×100%

1.2.3 血清生化指標(biāo)檢測(cè) 將冷凍保存的血清樣品室溫下解凍，用美國(guó)雅培Abbott C 8000型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血清葡萄糖(GLU)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的水平，檢測(cè)用試劑及試劑盒均購(gòu)于美國(guó)雅培公司。

1.2.4 代謝激素水平檢測(cè) 使用試劑盒檢測(cè)血清中促甲狀腺激素(TSH)、甲狀腺激素(T4)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)、胰島素(INS)、生長(zhǎng)激素(GH)的水平。除檢測(cè)生長(zhǎng)激素(GH)的試劑盒購(gòu)于南京建成公司外，其他試劑盒均購(gòu)于美國(guó)雅培公司。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理與分析 測(cè)定結(jié)果采用SAS 8.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生菌復(fù)合發(fā)酵料對(duì)斷奶仔豬胃腸道pH的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，44和75 日齡時(shí)，試驗(yàn)組仔豬胃液的pH分別降低9.31%和12.26%(P>0.05)；空腸中段腸液pH分別降低9.11%和4.37%(P>0.05)。結(jié)果顯示，飼喂添加益生菌復(fù)合發(fā)酵料的日糧對(duì)胃液和腸液pH均沒(méi)有顯著影響(P>0.05)，但有降低斷奶仔豬胃液和腸液pH的趨勢(shì)。

表2 斷奶仔豬的胃腸道pH Table 2 Gastrointestinal pH of weaning piglets

注：同行數(shù)據(jù)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

Note： In the same row，values with different lowercase letters mean significant difference(P<0.05)． The same below．

2.2 益生菌復(fù)合發(fā)酵料對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，44和75 日齡時(shí)，試驗(yàn)組仔豬GLU濃度分別提高7.63%和3.93%，差異均不顯著(P>0.05)； TG濃度分別提高25.71%和27.54%，差異均不顯著(P>0.05)； BUN濃度分別降低7.15%和5.85%，差異均不顯著(P>0.05)；各日齡組的ALB、TC、Cr質(zhì)量濃度差異均不顯著(P>0.05)。對(duì)TP、GLB質(zhì)量濃度的影響，44和75 日齡組血清總TP質(zhì)量濃度分別提高16.20%(P<0.05)和15.91%(P>0.05)； GLB質(zhì)量濃度分別提高87.40%(P<0.05)和51.26% (P<0.05)；白/球比顯著降低(P<0.05)；由結(jié)果可以看出，添加益生菌復(fù)合發(fā)酵飼料可以增強(qiáng)斷奶仔豬的蛋白合成能力，提高氮的沉積和機(jī)體免疫力，促進(jìn)斷奶仔豬的生長(zhǎng)。

與對(duì)照組相比，44和75 日齡時(shí)，試驗(yàn)組仔豬ALT活性分別增高15.76%和31.84%，差異均不顯著(P>0.05)、AST活性分別降低 29.64%和24.36%，差異均不顯著(P>0.05)，但對(duì)照組的AST/ALT高于試驗(yàn)組，并在75 日齡時(shí)差異顯著 (P<0.05)。在28和44 日齡時(shí)，試驗(yàn)組仔豬ALP的活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，75日齡時(shí)，試驗(yàn)組仔豬ALP的活性也低于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)。44和75 日齡時(shí)，試驗(yàn)組仔豬LDH的活性低于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)。表明益生菌復(fù)合發(fā)酵飼料對(duì)豬肝臟和心臟功能沒(méi)有負(fù)面影響，并可以增強(qiáng)骨細(xì)胞活性，促進(jìn)鈣、磷在骨中的沉積，利于動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育。

2.3 益生菌復(fù)合發(fā)酵料對(duì)斷奶仔豬代謝激素指標(biāo)的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，44和75 日齡時(shí)，試驗(yàn)組仔豬血清中T3質(zhì)量濃度分別提高7.63%和11% (P>0.05)； TSH水平分別提高15.20%和14.57% (P>0.05)； INS提高 5.33%和22.00% (P>0.05)；但T4的水平呈下降趨勢(shì)(P>0.05)。44和75 日齡時(shí)，試驗(yàn)組仔豬血清中GH質(zhì)量濃度分別提高13.31%和 10.27% (P>0.05)；從結(jié)果可以看出，雖然各指標(biāo)差異均不顯著，但添加益生菌復(fù)合發(fā)酵料的試驗(yàn)組各項(xiàng)指標(biāo)(T4除外)均有升高的趨勢(shì)，說(shuō)明添加益生菌復(fù)合發(fā)酵料有利于斷奶仔豬的生長(zhǎng)和生產(chǎn)性能提高。

3 討 論

3.1 益生菌復(fù)合發(fā)酵料對(duì)斷奶仔豬胃腸道pH的影響

表3 斷奶仔豬的血清生化指標(biāo) Table 3 Serum biochemical of weaning piglets

表4 斷奶仔豬的血清代謝激素指標(biāo) Table 4 Serum metabolic hormones indices of weaning piglets

目前一般認(rèn)為仔豬出生時(shí)即具有分泌鹽酸的能力，但泌酸能力不足，從20 日齡開(kāi)始才有少量游離鹽酸出現(xiàn)，造成胃內(nèi)pH高于成年豬的水平(pH 2.0～3.5)。仔豬斷奶后，采食固體飼料，同時(shí)又失去乳糖來(lái)源，胃內(nèi)泌酸能力較弱，因此胃內(nèi)pH會(huì)顯著升高。楊琳等[7]的研究結(jié)果表明，分別在17、21、28和35 日齡斷奶的仔豬，斷奶后胃液pH恢復(fù)到3.5所需的時(shí)間分別為3、2、1和1 周，這表明斷奶日齡越早，胃液pH恢復(fù)到3.5所需的時(shí)間越長(zhǎng)。日糧是影響仔豬消化道酸度的主要外源性因素，仔豬攝食的飼料酸結(jié)合力越高，飼料結(jié)合的游離酸越多，胃酸降低的幅度就越大，從而對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能影響就越大。益生菌發(fā)酵使飼料有機(jī)酸含量提高，可以降低飼料pH和飼料的酸結(jié)合力，從而使胃液pH趨于穩(wěn)定。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，胃液pH的變化與仔豬消化道酸度發(fā)育調(diào)控規(guī)律一致，并且在無(wú)抗基礎(chǔ)日糧中添加10%的益生菌復(fù)合發(fā)酵料具有降低斷奶仔豬胃腸道pH的趨勢(shì)。

3.2 益生菌復(fù)合發(fā)酵料對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

GLU即通常所說(shuō)的血糖，指血液中的葡萄糖濃度，是食物經(jīng)消化系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為單糖進(jìn)入血液，運(yùn)送到全身細(xì)胞。作為能量的來(lái)源，血液中GLU濃度須保持在一定水平才能維持體內(nèi)各器官和組織的需要[8-9]。TP是反映肝臟合成蛋白質(zhì)能力的重要指標(biāo)，當(dāng)血清總蛋白質(zhì)量濃度升高時(shí)，可促使組織蛋白的沉積正方向進(jìn)行，從而促進(jìn)組織器官的生長(zhǎng)[10]。BUN是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)含氮物質(zhì)分解代謝后的終產(chǎn)物，其濃度反映機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)代謝和飼糧氨基酸平衡情況。當(dāng)飼料中蛋白質(zhì)氨基酸平衡，凈蛋白質(zhì)利用率提高時(shí)，血清尿素氮的質(zhì)量濃度會(huì)下降，血清尿素氮質(zhì)量濃度越低，氮的利用效率越高，因此血清尿素氮常作為衡量機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)沉積的主要指標(biāo)之一[9,11-12]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組血清GLU 和TP的濃度均高于對(duì)照組(P>0.05)，試驗(yàn)組BUN濃度低于對(duì)照組(P>0.05)，表明益生菌復(fù)合發(fā)酵飼料的添加，提高日糧養(yǎng)分的消化率，從而提高血糖水平，并且在一定程度上降低體內(nèi)蛋白質(zhì)的分解代謝，增加體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，有利于提高氮沉積，從而促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)。

Cr有外源性和內(nèi)源性?xún)深?lèi)。在外源性血清肌酐攝入量穩(wěn)定的情況，血清肌酐濃度主要取決于腎小球的過(guò)濾能力；內(nèi)源性肌酐是機(jī)體肌肉代謝的產(chǎn)物，肌肉中的肌酸通過(guò)不可逆的非酶脫水反應(yīng)形成肌酐，每日機(jī)體產(chǎn)生的肌酐幾乎全隨尿液排出，若血清中的肌酐濃度顯著升高就意味著腎臟功能受到損害[12-13]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)組的血清肌酐濃度低于對(duì)照組，說(shuō)明添加益生菌復(fù)合發(fā)酵飼料不會(huì)對(duì)斷奶仔豬腎臟造成損害，并具有一定的保護(hù)作用。

脂肪組織發(fā)育及脂肪沉積程度主要取決于血漿TG的水平。本試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)組TG、TC呈一定上升趨勢(shì)，但與對(duì)照組的相比差異不顯著(P>0.05)，這說(shuō)明益生菌復(fù)合發(fā)酵飼料在一定程度上能促進(jìn)甘油三酯的消化與吸收。ALB在肝臟中產(chǎn)生，當(dāng)肝功能受損時(shí)ALB減少；GLB由漿細(xì)胞分泌，反映機(jī)體的免疫狀況和抵抗力，當(dāng)機(jī)體內(nèi)存在病原感染時(shí)GLB增加。試驗(yàn)組GLB質(zhì)量濃度在44和75 日齡時(shí)均顯著升高(P<0.05)，白/球比顯著降低(P<0.05)，表明益生菌復(fù)合發(fā)酵飼料可以提高動(dòng)物機(jī)體的免疫力。

ALP是一種在堿性條件下具有較高活性的酶，廣泛分布于動(dòng)物機(jī)體各組織和血清中，在肝臟、腎臟中較多[14]。血清中的ALP除來(lái)自于肝臟外，還來(lái)自于骨髓和腸道，ALP活性高低反應(yīng)機(jī)體的生產(chǎn)性能、生長(zhǎng)速度和代謝強(qiáng)弱[15-17]，并且與機(jī)體的平均日增量呈正相關(guān)，因此，機(jī)體在生長(zhǎng)階段或發(fā)生疾病時(shí)血清中ALP均會(huì)明顯升高[18]。ALP是焦磷酸酶，它可促進(jìn)骨鹽沉積，其值升高反映成骨細(xì)胞活性增強(qiáng)，骨生成旺盛，鈣、磷在骨中的沉積增加[14,19-20]。血清中LDH是糖酵解途徑中重要的酶類(lèi)，催化丙酮酸生成乳酸，LDH可以反映肝細(xì)胞功能，乳酸增多可導(dǎo)致糖酵解酶的活性增加[21]。ALT、AST是存在于動(dòng)物肝細(xì)胞中催化氨基酸與酮酸間氨基轉(zhuǎn)移的一類(lèi)酶，在氨基酸的分解和合成中起重要作用[22],也是反映肝功能較為敏感的2個(gè)指標(biāo)，當(dāng)動(dòng)物受到應(yīng)激(斷奶)或急性病毒感染時(shí)，一方面機(jī)體需要的能量增加，另一方面動(dòng)物采食量減少，肝細(xì)胞線粒體會(huì)受到一定程度的損傷，其中的ALT和AST從細(xì)胞中逸出進(jìn)入機(jī)體血液循環(huán)系統(tǒng)，使得血液中這2種酶的活性增高，因此血清中這2種酶活性的增高提示肝臟受到一定的損傷[14-15,18-20]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組ALP、AST和LDH 3種酶的活性均低于對(duì)照組，表明添加益生菌復(fù)合發(fā)酵料對(duì)斷奶仔豬的肝臟具有一定的保護(hù)作用，并可以促進(jìn)鈣、磷在骨中的沉積，有利于動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育。

3.3 益生菌復(fù)合發(fā)酵料對(duì)斷奶仔豬代謝激素指標(biāo)的影響

TSH是糖蛋白激素，主要生理作用是促進(jìn)甲狀腺的生長(zhǎng)和甲狀腺激素的合成與分泌。甲狀腺激素主要有2種，即T4和T3，甲狀腺激素能促進(jìn)蛋白質(zhì)的生成，促進(jìn)小腸黏膜對(duì)糖的吸收和脂肪的分解，從而促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)與發(fā)育。甲狀腺激素的質(zhì)量濃度可以反映機(jī)體的代謝水平。INS是胰島 B 細(xì)胞分泌的一種蛋白質(zhì)激素，它是促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成代謝和維持血糖相對(duì)穩(wěn)定的重要激素，在動(dòng)物生長(zhǎng)過(guò)程中起著重要作用[16]。GH是促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)最重要的激素，可促進(jìn)蛋白質(zhì)合成與沉積，抑制蛋白質(zhì)降解。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在日糧中添加益生菌復(fù)合發(fā)酵料在一定程度上能提高血清GH水平 (P>0.05)，T3、TSH和INS與GH的變化規(guī)律一致，表明T3、TSH、INS與GH間在促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)方面存在某種協(xié)同作用。但T4的水平與GH變化規(guī)律相反，呈下降趨勢(shì)(P>0.05)，一般認(rèn)為T(mén)4通過(guò)轉(zhuǎn)化為T(mén)3發(fā)揮其生物效用，T4水平的下降是否與此相關(guān)還有待于進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

本研究通過(guò)比較90%無(wú)抗基礎(chǔ)日糧+10%益生菌復(fù)合發(fā)酵料和含抗生素基礎(chǔ)日糧(75 mg/kg 金霉素和50 mg/kg喹乙醇)飼喂仔豬的效果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組和對(duì)照組仔豬在胃腸液pH和代謝激素指標(biāo)方面均無(wú)顯著差異，2組的血清生化指標(biāo)中，除總蛋白、球蛋白、白/球比、谷草/谷丙比和堿性磷酸酶有顯著性差異外，其他血清生化指標(biāo)均無(wú)顯著差異，但一些有利于動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的代謝激素和血清生化指標(biāo)，試驗(yàn)組高于對(duì)照組，表明使用10%益生菌復(fù)合發(fā)酵飼料替代飼料中的抗生素，對(duì)動(dòng)物機(jī)體無(wú)不良影響，并在一定程度上優(yōu)于抗生素對(duì)動(dòng)物機(jī)體的作用，提示在斷奶仔豬生產(chǎn)中可以用益生菌復(fù)合發(fā)酵飼料替代抗生素，為提供安全綠色無(wú)殘留的畜產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)。

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