楊麗霞，任麗麗，王 堃

（山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西太原030024）

藍(lán)萼香茶菜是唇形科香茶菜屬多年生草本植物［1］，又名香茶菜、山蘇子、回花菜等，多生于林下、山谷、草叢之中，主要分布于我國的東北、華北，在國外（如朝鮮、日本等地）也有發(fā)現(xiàn)該植物的存在［2］。藍(lán)萼香茶菜的葉或全草入藥，具有健胃、清熱活血、解毒、抗炎和抗癌等活性，用于治療各種炎癥初起、感冒發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛等疾?。?］。研究發(fā)現(xiàn)藍(lán)萼香茶菜中主要含有二萜類、三萜類、黃酮及其他化學(xué)成分，藍(lán)萼香茶菜的全草對(duì)心血管疾病具有一定的治療作用［4］。其中藍(lán)萼甲素是從藍(lán)萼香茶菜中提取分離出來的一種二萜類化合物［5］，研究表明其對(duì)癌癥有一定的治療作用［6-7］。本實(shí)驗(yàn)以冬凌草甲素為對(duì)照品，采用紫外分光光度計(jì)，測定不同提取方法提取所得的藍(lán)萼香茶菜中總二萜的含量［8-11］，進(jìn)而比較遼寧與山西所產(chǎn)藍(lán)萼香茶菜藥材的質(zhì)量［12］。

1 材料和儀器

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 藍(lán)萼香茶菜藥用植物來源見表1，由解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)鄭漢臣教授和山西中醫(yī)藥大學(xué)樊杰副教授鑒定為藍(lán)萼香茶菜植物，并按照《中國藥典》2015版（一部）規(guī)定進(jìn)行干燥、粉碎，過30目篩等預(yù)處理［13］。冬凌草甲素購自中國科學(xué)院沈陽林土所。

表1 藍(lán)萼香茶菜植物

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品 SHZ-D（III）循環(huán)水式真空泵：鞏義市子華儀器有限責(zé)任公司；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市杰瑞爾電器有限公司；FA2004型電子天平：上海天平儀器廠；KQ5200V超聲清洗儀：江蘇省昆山市淀山湖鎮(zhèn)；GZX-9146MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海博訊實(shí)業(yè)有限公司；UV-6100S紫外分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；活性炭粉末、95%乙醇、分析純甲醇、分析純丙酮、分析純乙醚：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藍(lán)萼香茶菜總二萜提取 取各批次藍(lán)萼香茶菜的地上部分干燥、粉碎，過30目篩，備用。

1.2.1.1 乙醇加熱回流法 取遼寧新賓產(chǎn)藍(lán)萼香茶菜粉末59.383 g置于圓底燒瓶中，加8倍95%乙醇沒過藥材［4］，80 ℃左右加熱回流提取 8 h，過濾得濾渣重復(fù)上述操作2次，分別加熱回流6 h、6 h，過濾、合并濾液，減壓濃縮制得稠浸膏1。用甲醇溶解稠浸膏1并進(jìn)行過濾，濾液加3.245 g活性炭脫色1 h后過濾得濾液［4］，再對(duì)甲醇進(jìn)行回收，使之濃縮，形成稠浸膏2。

1.2.1.2 乙醚加熱回流法 乙醚加熱回流提取流程見圖1。

圖1 乙醚加熱回流提取流程圖

1.2.1.3 丙酮加熱回流法 丙酮加熱回流提取流程見圖2。

圖2 丙酮加熱回流提取流程圖

將所得浸膏2、4、6放入電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥，研細(xì)成粉末狀，備用。

1.2.2 遼寧新賓所產(chǎn)藍(lán)萼香茶菜中總二萜含量的測定

1.2.2.1 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取冬凌草甲素標(biāo)準(zhǔn)品2.683 6 mg，置10 mL容量瓶中，加95%乙醇溶解并定容至刻度［8］，即得對(duì)照品溶液。

1.2.2.2 供試品溶液的配制及測定方法 分別精密稱取不同提取方法所制得的新賓藍(lán)萼香茶菜提取物置5 mL容量瓶中，加95%乙醇溶液定容至刻度，再分別精密量取1 mL于100 mL容量瓶中，加95%乙醇溶液定容至刻度，即得不同提取方法制得的藍(lán)萼香茶菜提取物供試液。以95%乙醇為空白溶劑，于238 nm波長下測定各組吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算提取物中總二萜含量。

1.2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密量取對(duì)照品溶液 0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.5 mL、0.7 mL、1.0 mL 于10 mL容量瓶中［10］，以95%乙醇稀釋至刻度，得系列濃度的對(duì)照品溶液。以95%乙醇為空白溶劑［11］，在238 nm波長下測定各系列濃度對(duì)照品溶液的吸光度A，以濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明該標(biāo)準(zhǔn)品在2.6～30 mg/L濃度范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系（見圖3），線性回歸方程為：A=0.023 6C-0.014（r=0.999 2）。

圖3 吸光度A與濃度c標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

1.2.3 不同產(chǎn)地藍(lán)萼香茶菜中總二萜含量的測定利用篩選出的最佳提取方法（乙醇加熱回流法）分別提取遼寧千山（20.438 g）、遼寧鳳凰山（20.135 g）、山西呂梁（11.082 g）產(chǎn)的藍(lán)萼香茶菜中的二萜類物質(zhì)，并應(yīng)用上述同樣方法分別測定其總二萜含量，比較各產(chǎn)地的藍(lán)萼香茶菜藥材質(zhì)量。

2 結(jié) 果

2.1 不同提取方法所得藍(lán)萼香茶菜藥材中二萜類成分的含量測定

以每克原藥材中所含總二萜的量表示藍(lán)萼香茶菜干燥品中的有效物質(zhì)含量，用乙醇加熱回流方法提取藍(lán)萼香茶菜總二萜含量最高，確定95%乙醇提取效率最高，為最佳提取方法。三種不同方法提取結(jié)果見表2。

2.2 不同產(chǎn)地藍(lán)萼香茶菜藥材中二萜類成分的含量測定結(jié)果

以乙醇加熱回流提取測定不同產(chǎn)地藍(lán)萼香茶菜藥材中二萜類成分的含量，可得山西呂梁＞遼寧鳳凰山＞遼寧千山＞遼寧新賓。結(jié)果見表3。

表2 不同提取方法制得遼寧新賓藍(lán)萼香茶菜干燥品中有效成分的含量

表3 不同產(chǎn)地藍(lán)萼香茶菜藥材中二萜類成分的含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇

由表2可知，3種溶劑回流提取藍(lán)萼香茶菜中總二萜含量由高至低依次是95%乙醇組＞丙酮組＞乙醚組；其次，考慮到各溶劑的提取時(shí)效性、毒性的大小以及成本的高低等，最終確定在藍(lán)萼香茶菜提取工藝中，選擇乙醇作為提取溶劑。

3.2 提取方法的選擇

對(duì)乙醇提取分別進(jìn)行室溫浸提24 h、回流提取 3 次（8 h、6 h、6 h）和超聲提取 1 h，以上各方法中以加熱回流法提取的效率最高，因此采用乙醇加熱回流提取。

3.3 對(duì)照品及波長的選擇

化學(xué)研究表明，在藍(lán)萼香茶菜莖葉部分中可以提取到最具有活性成分的二萜和三萜成分，其中二萜類最重要的成分是藍(lán)萼甲素，它的化學(xué)式相似于冬凌草甲素［8］，故在使用紫外－分光光度法測定其有效物質(zhì)含量時(shí)，可以冬凌草甲素為標(biāo)準(zhǔn)品，其最大吸收波長在238 nm處［14］。因此本實(shí)驗(yàn)選用冬凌草甲素作為對(duì)照品，選擇波長為238 nm。

3.4 不同產(chǎn)地藍(lán)萼香茶菜藥材質(zhì)量的分析

本實(shí)驗(yàn)得出，不同產(chǎn)地藍(lán)萼香茶菜藥材中二萜類成分的含量山西呂梁5月（4.535）＞遼寧鳳凰山 9月（2.144）＞遼寧千山 9月（2.010）＞遼寧新賓9月（1.710），存在顯著性差異，說明山西呂梁產(chǎn)的藍(lán)萼香茶菜藥材中二萜類成分的含量明顯高于遼寧，質(zhì)量較優(yōu)。但是因山西省樣本偏少，各產(chǎn)地采收季節(jié)不同等原因使得該結(jié)論存在一定的偏差、在下一步的工作中將增大山西省藍(lán)萼香茶菜藥材采收范圍，并對(duì)同一采收季不同產(chǎn)地的藥材質(zhì)量、同一產(chǎn)地不同采收季的藥材質(zhì)量進(jìn)行比較分析。

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