劉坤，孟玲芝，王圣博，張弛，劉榮光，關(guān)欣，尹峙天，任崢峰

（吉林省安信食品技術(shù)服務(wù)有限責(zé)任公司，吉林長春130118）

20世紀(jì)30年代，荷蘭學(xué)者M(jìn)ertens和Vanveen在研究爪哇居民椰子發(fā)酵食物中毒時(shí)，發(fā)現(xiàn)其是由一種革蘭氏陰性桿菌引起的，而且他們從病原菌中分離出了兩種毒素：米酵菌酸（Bongkrekic acid,BA）和毒黃素（Toxoflavin），并命名了這種菌為椰毒假單胞菌。在此后的60年里，國外學(xué)者主要致力于兩種毒素的提取，并進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析和致毒作用的研究。酵米面食物中毒很久以來被認(rèn)為與霉菌有關(guān)。直到1978年才證明酵米面中毒是由一種無芽孢有動(dòng)力產(chǎn)生毒黃素的革蘭氏陰性桿菌所引起，此菌培養(yǎng)液有毒性因而確認(rèn)是毒素中毒，后命名此菌為酵米面黃桿菌。1984年，胡文娟等證明此菌產(chǎn)生的一種毒素為米酵菌酸。

1 米酵菌酸在食品檢測中的研究新進(jìn)展

現(xiàn)階段研究，在食品中米酵菌酸的檢測方法常用的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、固相萃?。咝б合嗌V法、高效液相色譜-二極管陣列檢測器結(jié)合固相萃取法、超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等。

隨著現(xiàn)代檢測技術(shù)的不斷提高，米酵菌酸在食品檢測中的方法也在不斷進(jìn)步發(fā)展，蘇肯明等建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定銀耳中的米酵菌酸的新方法，本方法采用甲醇：0.02 M乙酸銨緩沖溶液（85∶15，v/v）作為流動(dòng)相來進(jìn)行反相液相色譜分離，而且用了電噴霧負(fù)離子源進(jìn)行離子化，利用多反應(yīng)監(jiān)測掃描（MRM）對米酵菌酸的母離子及子離子進(jìn)行了監(jiān)測，并用三重四極桿質(zhì)譜進(jìn)行測定。方法的相關(guān)系數(shù)：0.9996，回收率：91.0%～95.3%，檢出限：5μg/kg。本方法簡單、快捷、靈敏，可用于銀耳中米酵菌酸的日常測定。

蘇永恒等建立固相萃?。咝б合嗌V方法測定食品中米酵菌酸含量。方法樣品經(jīng)氨水－甲醇超聲提取，上清液經(jīng)固相萃取柱凈化后，進(jìn)高效液相色譜儀采用C18色譜柱分離，檢測波長267nm，外標(biāo)法定量。結(jié)果米酵菌酸在0.3～40.0μg/ml質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，為0.999 4，加標(biāo)回收率在94.6%～104.4%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均＜3.0%，檢出限為0.005 mg/kg。結(jié)論：該方法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、樣品前處理簡單等優(yōu)點(diǎn)，可滿足食品中米酵菌酸含量的檢測要求。

李紅艷等建立了混合型弱陰離子固相萃取富集凈化，高效液相色譜-二極管陣列檢測器快速測定食品中米酵菌酸殘留的方法。采用C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-甲醇-1%乙酸溶液（10∶62∶28，V/V）為流動(dòng)相，以 269 nm 為分析波長，米酵菌酸在0.1～40 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r值大于0.999。本實(shí)驗(yàn)考察樣品的提取條件及不同固相萃取小柱凈化效果，結(jié)果表明：選擇體積分?jǐn)?shù)80%乙腈溶液為提取溶劑，超聲提取30 min，WAX小柱富集、凈化，效果最佳。方法檢出限為0.03 mg/kg。通過不同樣品加標(biāo)驗(yàn)證，平均回收率為83.3%～95.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于5%（n=6）。與《銀耳中米酵菌酸的測定》（GB/T 5009.189-2003）方法相比，該方法精確靈敏、回收率高、前處理簡單快速，適用于各種食品中米酵菌酸殘留的快速測定。實(shí)現(xiàn)了簡化前處理的操作，提高了樣品的提取效率，提高了方法的回收率及靈敏度和檢測結(jié)果的定性、定量、準(zhǔn)確性、無需薄層色譜進(jìn)行確證等目的。該方法的建立，是現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)的極大改進(jìn)，對政府部門開展相關(guān)產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測和檢測部門開展相應(yīng)的常規(guī)分析檢測具有重要的技術(shù)支持與指導(dǎo)意義。

周鵬建立了快速測定銀耳中米酵菌酸的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。樣品采用甲醇提取，混合強(qiáng)陰離子交換固 相 萃 取 柱 （PAX） 凈 化 ，UPLCBEHC18（2.1×100mm，1.7μm）色譜柱分析，以 10 mmol/L乙酸銨-乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫，串聯(lián)四級桿質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測負(fù)離子模式檢測，基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，米酵菌酸在 1.6 μg/L～80 μg/L線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)（r）0.9999，檢出限0.5μg/kg，加標(biāo)回收率 82%～102%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤8.5%。通過了對分析方法的優(yōu)化，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，建立了快速、準(zhǔn)確、靈敏的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定銀耳中米酵菌酸的方法，同時(shí)本方法可作為分析的確證方法，為保障食品安全發(fā)揮了積極作用。

2 展望

近幾年對于米酵菌酸在食品檢測方面的研究很多。通過各種方法的對比研究，不同方法都有各自的優(yōu)點(diǎn)和局限性。所以今后應(yīng)該研究開發(fā)更適合的儀器和檢測方法，通過改進(jìn)樣品前處理方法建立更快速、簡單、實(shí)用的測定方法和限量標(biāo)準(zhǔn)，更好地為食品安全服務(wù)。