徐蕊，李祥，王慧，閆勇，楊勝楠，龔鵬飛，王浩，*

（1.天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，天津300457；2.天津市北辰區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，天津300402；3.鹽城師范學(xué)院海洋與生物工程學(xué)院，江蘇鹽城224051；4.康師傅飲品控股有限公司研發(fā)中心，上海201103）

酸棗是我國華北地區(qū)傳統(tǒng)的野生藥用植物和特產(chǎn)果樹資源，在中南各省亦有分布。其含有豐富的礦物質(zhì)、植物甾醇、維生素、氨基酸、多糖、脂肪酸、多酚、黃酮等成分而被公認(rèn)為認(rèn)為有利于人體健康，如降血脂、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗癌等特性[1-3]。張澤生等[4]研究了從酸棗皮中熱浸提出的多酚類物質(zhì)抗氧化性能，其抗氧化性能與抗壞血酸相當(dāng)。酸棗汁，融合現(xiàn)代加工工藝，萃取酸棗等果實(shí)之精華，甘潤身心，且可以促進(jìn)食物消化，開胃健身，預(yù)防失眠多夢(mèng)、神經(jīng)衰弱，是現(xiàn)代人必備飲品[5]。

本試驗(yàn)以野生酸棗濃縮汁飼喂高脂高膽固醇倉鼠，測定其血清中CAT、SOD、GSH-Px活性以及MDA含量，血清中TC、TG和HDL-C含量，較為系統(tǒng)地研究酸棗濃縮汁對(duì)高脂高膽固醇倉鼠體內(nèi)抗氧化的影響和膽固醇代謝影響，為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

酸棗濃縮汁：天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院食品添加劑與配料實(shí)驗(yàn)室，成分見表1；豬油：天津天源油脂有限公司；膽固醇：湖北遠(yuǎn)成藥業(yè)有限公司；超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）活性測定試劑盒、谷胱甘肽過氧化酶（Glutathione Peroxidase，GSH-Px）活性測定試劑盒、過氧化氫酶（Catalase，CAT）活性測定試劑盒、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）生成量測定試劑盒、總膽固醇（Total cholesterol，TC）含量測定試劑盒、甘油三酯（Triglyceride，TG）含量測定試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇（High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）含量測定試劑盒：中生北控生物科技股份有限公司。

表1 酸棗濃縮汁中成分分析Table 1 Compositions of wild jujube concentrate

1.2 儀器與設(shè)備

ZN-04A萬能粉碎機(jī)：河北黃驊市儀器廠；SP-2102UV紫外分光光度計(jì)：上海光譜儀器有限公司；MR23i冷凍離心機(jī)：法國Jouan公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組及飼喂

動(dòng)物：倉鼠，SPF 級(jí)，3 周齡～4 周齡，雄性，體重 95g～105 g：北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。適應(yīng)1周后將倉鼠隨機(jī)分為5組，每組9只，分為正常組、高脂組、酸棗濃縮汁低、中、高劑量組（分別為5%、15%、25%）。

動(dòng)物飼料：飼料配方如表2，在基礎(chǔ)飼料上進(jìn)行加工，以添加25%酸棗濃縮汁飼料的甜度和酸度為標(biāo)準(zhǔn)，將5組動(dòng)物飼料配成同甜度、同酸度的特制飼料，以保證相同口感。

表2 倉鼠飼料配料表Table 2 Compositions of control diet and experimental diet g/kg

動(dòng)物飼養(yǎng)條件：在屏障系統(tǒng)動(dòng)物房飼養(yǎng)，溫度（22±2）℃，控制照明時(shí)間為14/10 h晝夜循環(huán)，相對(duì)濕度為40%～60%。動(dòng)物飼養(yǎng)6周，實(shí)驗(yàn)期間自由攝食攝水，每天更換新糧。

實(shí)驗(yàn)6周后，禁食14 h，不禁水，CO2麻醉后取血、處死并解剖。血液4℃下3 000 r/min離心15 min分離血清，-80℃保存?zhèn)溆?；收集臟器，在預(yù)冷的生理鹽水中清洗，濾紙拭干后稱重，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 血清中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量的測定

血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性、過氧化氫酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）的含量分別參照其劑盒的操作說明要求進(jìn)行測定。

1.3.3 血清中TC、TG和HDL-C含量的測定

血清中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量參照試劑盒說明書進(jìn)行測定。

1.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

測定結(jié)果以樣本的“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS16.0軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的差異顯著性分析，圖像生成采用Graphpad Prism 5軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠體重及進(jìn)食量的影響

酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠體重變化影響見表3、表4。

實(shí)驗(yàn)前，將倉鼠分成5組，各組倉鼠體重之間無明顯的差異（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)期間，各組倉鼠生長狀況良好，毛柔順有光澤，活動(dòng)正常，未出現(xiàn)不適及自然死亡。倉鼠體重逐漸增加，但各組間體重都無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），通過調(diào)整鼠糧的酸甜后，倉鼠的進(jìn)食計(jì)量數(shù)值維持在每天10 g左右，無特別嗜好。表3和表4顯示，各組倉鼠的進(jìn)食量和體重增加無顯著差異（P＞0.05）。

表3 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠體重變化影響Table 3 Effect of wild jujube concentrate on body weight of hamsters

表4 倉鼠進(jìn)食量變化Table 4 Effect of wild jujube concentrate on food intake of hamsters

2.2 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝臟的影響

倉鼠飼養(yǎng)6周后，處死動(dòng)物，稱量每組倉鼠肝臟重量，計(jì)算每組倉鼠肝臟的平均值。高脂組與正常組相比較，其肝臟重量顯著增加，具有極顯著差異（P＜0.01），如圖1所示。

圖1 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝臟質(zhì)量的影響Fig.1 Effects of wild jujube concentrate on liver weight of hamsters

2.3 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝、血清SOD活性的影響

SOD是生物體內(nèi)的一種重要抗氧化酶，通過催化超氧陰離子（O2-·）歧化為H2O2和O2，從而達(dá)到清除自由基作用。酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝、血清SOD活性的影響見圖2、圖3。

圖2 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝臟SOD活性的影響Fig.2 Effects of wild jujube concentrate on liver SOD activity of hamsters

從圖2可以看出，肝臟中SOD活性隨酸棗濃縮汁劑量的增加而增加。與正常組相比高脂組SOD活性顯著降低（P＜0.05）。與高脂組比較，中、高劑量組SOD活性顯著提高（P＜0.05）。圖3顯示，高脂組血清中SOD活性較正常組極顯著降低（P＜0.01）。與高脂組比較，低劑量組血清SOD活性顯著升高（P＜0.05），中、高劑量組都有極顯著升高（P＜0.01）。

圖3 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠血清SOD活性的影響Fig.3 Effects of wild jujube concentrate on serum SOD activity of hamsters

2.4 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝、血清GSH-Px活性的影響

GSH-Px是生物體內(nèi)廣泛存在的谷胱甘肽過氧化物酶，其主要功能是清除生物體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化物。酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝、血清GSH-Px活性的影響見圖4、圖 5。

圖4 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝GSH-Px酶活性的影響Fig.4 Effects of wild jujube concentrate on liver GSH-Px activity of hamsters

圖5 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠血清GSH-Px活性的影響Fig.5 Effects of wild jujube concentrate on serum GSH-Px activity of hamsters

從圖4可以看出，高脂組倉鼠肝臟中GSH-Px活性與正常組比較極顯著降低（P＜0.01），低、中劑量組與高脂組比較GSH-PX活性無顯著性差異（P＞0.05），高劑量組與高脂組比較GSH-Px酶活性顯著升高（P＜0.05）。如圖5，與正常組比較，高脂組血清中GSH-Px活性顯著降低（P＜0.05），給予酸棗濃縮汁低、中、高劑量組GSH-Px活性未見明顯升高異（P＞0.05）。

2.5 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝、血清CAT活性的影響

CAT是生物體內(nèi)廣泛存在的一種抗氧化酶，其主要功能是清催化過氧化氫分解成氧和水的酶。酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝、血清CAT活性的影響見圖6、圖7。

圖6 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝CAT活性的影響Fig.6 Effects of wild jujube concentrate on liver CAT activity of hamsters

從圖6可以看出，與正常組比較高脂組肝臟中CAT活性顯著降低（P＜0.05）。中、高劑量組與高脂組比較CAT活性顯著升高（P＜0.05）。從圖7可以看出，與正常組比較高脂組血清中CAT活性顯著降低（P＜0.05）。與高脂組比，較低、中量組CAT活性有升高的趨勢，但是沒有顯著升高（P＞0.05），高劑量組有顯著性升高（P＜0.05）。

2.6 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝、血清MDA含量的影響

MDA是機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)產(chǎn)物，MDA含量的高低間接反映機(jī)體內(nèi)自由基的生成與清除平衡狀態(tài)。酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝、血清MDA含量的影響見圖8、圖 9。

圖8 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠肝MDA含量的影響Fig.8 Effects of wild jujube concentrate on liver MAD content of hamsters

從圖8可以看出，倉鼠肝臟中MDA含量隨給藥劑量的增加而減少，與對(duì)正常組比較高脂組MDA含量顯著增加（P＜0.05）。而與高脂組比，中、高劑量組MDA含量極顯著性降低（P＜0.01）。圖9顯示，血清中MDA含量隨給藥劑量的增加而減少。與正常組比較，高脂組MDA含量顯著升高（P＜0.05）。低、中、高劑量組與高脂組比較都極顯著降低（P＜0.01）。

圖9 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠血MDA活性的影響Fig.9 Effects of wild jujube concentrate on serum MAD content of hamsters

2.7 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠血脂水平的影響

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血脂水平主要考察血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）3項(xiàng)指標(biāo)。飼喂倉鼠0周、3周、6周，血脂水平見表5。

表5 酸棗濃縮汁對(duì)倉鼠血脂指標(biāo)的影響Table 5 Effects of wild jujube concentrate on serum lipid indices of hamsters

酸棗濃縮汁飼喂3周后，與正常組相比，高脂組的TC和TG 的含量有顯著性差異（P＜0.01，P＜0.05）；與高脂組相比，高劑量組TC有顯著差異（P＜0.05），中高劑量組TG有顯著差異（P＜0.05）。飼喂6周后，與正常組相比，高脂組 TC、TG 差異極顯著（P＜0.01）；與高脂組相比，低劑量組的 TC、TG 差異顯著（P＜0.05），中高劑量組的TC、TG差異極顯著（P＜0.01），說明倉鼠食用高脂糧后血漿中總膽固醇和甘油三酯的含量顯著增加，食用酸棗濃縮汁糧后，血漿中總膽固醇和甘油三酯含量顯著下降，酸棗濃縮汁有降低總膽固醇和甘油三酯的作用。

倉鼠飼喂高脂高膽固醇糧3周和6周后，與正常組比其血清中高密度脂蛋白膽固醇含量極顯著升高（P＜0.01），飼喂不同劑量酸棗濃縮汁3周和6周后，25%酸棗濃縮汁組倉鼠血清中的高密度脂蛋白膽固醇含量顯著升高（P＜0.05）。但通過比較HDL-C與TC比值發(fā)現(xiàn)，低中高劑量組比值是上升趨勢。

3 結(jié)論

高血脂癥又被稱之為脂質(zhì)代謝紊亂，是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等心血管疾病和脂肪肝主要誘發(fā)因素之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，每年大約有1 700萬人死于這種慢性疾病，占全球總死亡人數(shù)的30%左右。換言之，平均每3個(gè)死者中，就有1個(gè)是由心血管疾病引起的[6]。因此，膳食干預(yù)，尤其是攝入食物中天然活性物質(zhì)可以提高體內(nèi)去除自由基能力，降低膽固醇水平，減少心血管疾病的發(fā)生[7]。

酸棗含有豐富的多酚類、黃酮類等具有抗氧化作用的物質(zhì)，有利于人體健康，如具有降血脂、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、延緩衰老等功效。因其營養(yǎng)健康價(jià)值，常作為原料被用于各類食品加工中，例如，蜂蜜，茶，果醬，果汁，油，面包，蛋糕等。Tanuja Singh[8]等檢測到酸棗根提取物的多酚和黃酮類物質(zhì)含量達(dá)到2 009 mg/100 g和120 mg/100 g，發(fā)現(xiàn)可作為新型抗氧化藥物的潛在來源。Boulanouar[9]通過比較阿爾及利亞的8中植物中抗氧化活性成分時(shí)發(fā)現(xiàn)酸棗的果實(shí)和根部是多酚類和黃酮類化合物的重要來源，達(dá)到3630mg/100g～8144mg/100 g。本實(shí)驗(yàn)所用酸棗濃縮汁經(jīng)過檢測多酚含量為8.58%，黃酮含量為1.54%，這些物質(zhì)是酸棗濃縮汁發(fā)揮功能性作用的主要物質(zhì)。Hua Wang[10]等研究了酸棗水提物體內(nèi)外抗氧化活性，結(jié)果表明酸棗水提物能有效的清除體外DPPH自由基、H2O2、羥基自由基和抑制脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的生成。此外，研究表明酸棗水提物還能有效抑制D-半乳糖致衰小鼠體內(nèi)D-半乳糖引起的氧化損傷，說明可以提高小鼠體內(nèi)抗氧化活性，這結(jié)果都跟本實(shí)驗(yàn)有著相似的結(jié)論。

本實(shí)驗(yàn)以倉鼠為動(dòng)物模型，用高脂高膽固醇造模，研究酸棗濃縮汁的內(nèi)體抗氧化作用。結(jié)果顯示，酸棗濃縮汁可以提高倉鼠肝、血清中SOD、GSH-Px、CAT的酶的活性，降低高脂組倉鼠肝、血清中MDA含量，可見酸棗濃縮汁在體內(nèi)具有明顯的抗氧化作用。研究結(jié)果還顯示，酸棗濃縮汁有降低血液中總膽固醇和甘油三酯含量的作用。根據(jù)成分表得知，酸棗濃縮汁中含有豐富多酚和黃酮，其抗氧化作用已經(jīng)被人所熟知。

近十年，患有“三高”人群逐年增加，動(dòng)脈粥樣硬化、靜脈血栓等高血脂疾病一直困擾著人們，本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果可為進(jìn)一步研究和探討酸棗濃縮汁降血脂機(jī)理奠定了基礎(chǔ)，并為開發(fā)和利用酸棗濃縮汁作為新型保健食品的工作提供重要的理論和數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

[1]BENAMMAR C.Antidiabetic and Antioxidant Activities of Zizyphus lotus L Aqueous Extracts in Wistar Rats[J].Journal of Nutrition&Food Sciences，2014(s8):1-6

[2]BAKHTAOUI F Z,LAKMICHI H,MEGRAUD F,et al.Gastro-protective,anti-Helicobacter pylori and,antioxidant properties of Moroccan Zizyphus lotus L[J].Journal of Applied Pharmaceutical Science,2014,4(10):81-87

[3]ABDOUL-AZIZE S,BENDAHMANE M,HICHAMI A,et al.Effects of Zizyphus lotus L.(Desf.)polyphenols on Jurkat cell signaling and proliferation[J].Int Immunopharmacol,2013,15(2):364-371

[4]張澤生,葉卉,姜擘,等.酸棗皮中多酚類物質(zhì)提取工藝及其抗氧化性研究[J].食品研究與開發(fā),2009(11):57-61

[5]ABDOUL-AZIZE S.Potential Benefits of Jujube(Zizyphus Lotus L.)Bioactive Compounds for Nutrition and Health[J].J Nutr Metab,2016,2016:1-13

[6]PANAHI Y,AHMADI Y,TEYMOURI M,et al.Curcumin as a potential candidate for treating hyperlipidemia:A review of cellular and metabolic mechanisms[J].J Cell Physiol,2016:1-12

[7]MIRZAEI H,Di BIASE S,LONGO V D.Dietary Interventions,Cardiovascular Aging,and Disease:Animal Models and Human Studies[J].Circ Res,2016,118(10):1612-1625

[8]GHALEM M,MERGHACHE S,BELARBI M.Study on the antioxidant activities of root extracts of Zizyphus lotus from the western region of Algeria[J].Pharmacognosy Journal,2014,6(4):32-42

[9]BOULANOUAR B,ABDELAZIZ G,AAZZA S,et al.Antioxidant activities of eight Algerian plant extracts and two essential oils[J].Industrial Crops&Products,2013,46(3):85-96

[10]WANG H,GAO X D,ZHOU G C,et al.In vitro and in vivo antioxidant activity of aqueous extract from Chobrospondias axillaris[J].Food Chemistry,2008,106(3):888-895