兆 奇，趙欣昕

(沈陽化工研究院有限公司，遼寧 沈陽 110021)

農(nóng)藥是實行登記管理的，在向各個國家的政府提供登記資料時，對于原藥還需要提供原藥全組分分析報告。目前大多數(shù)國家需要提供的是五批次原藥的全組分分析報告。雖然各個國家對登記資料的要求不盡相同，但是目前美國、日本、歐盟眾多國家都需要提供全組分分析的GLP報告。我國自2017年2月《農(nóng)藥管理規(guī)范》的實施，以及《農(nóng)藥登記試驗單位管理規(guī)范》的實施，也明確了我國原藥登記中需要提供全組分分析報告也要符合GLP要求。本文將就全組分分析的要求、GLP全分析項目的關(guān)鍵點以及GLP項目中的角色關(guān)系進行介紹。

1 全組分分析的要求

1.1 設(shè)備要求 對于全組分分析來說，因為登記要求中，需要提供紫外、紅外、核磁、氣質(zhì)、液質(zhì)的定性譜圖，所以對應(yīng)的這些儀器也是必不可少的。對于定量而言，通常采用的手段為液相色譜法、氣相色譜法、化學(xué)分析法等，所以最基本的要求試驗機構(gòu)應(yīng)該擁有液相色譜儀、氣相色譜儀等分析儀器；對于有些原藥，可能還會用到離子色譜儀。以上這些是最基本的儀器要求，由于全組分分析中需要對相關(guān)雜質(zhì)和0.1%以上的雜質(zhì)進行定性定量分析，所以儀器本身的精密度、檢出限也要滿足以上的試驗要求。

除此之外，GLP要求用于試驗的儀器應(yīng)按照SOP的要求定期進行檢查、清洗、保養(yǎng)和校準，校準應(yīng)盡量溯源到國家或國際測量標準。由于全分析試驗中涉及到的儀器一般均配備工作站計算機系統(tǒng)，所以在啟用前，應(yīng)該對整套的儀器設(shè)備進行驗證，包括各個組件、模快、工作站系統(tǒng)。

1.2 人員要求 在進行原藥的定性定量分析時，除了需要以上設(shè)備外，最主要的還是需要有能力的項目負責(zé)人(SD)。項目負責(zé)人的要求分為兩個方面：首先是技術(shù)能力要求，如：扎實的有機化學(xué)基礎(chǔ)、豐富的化學(xué)分析經(jīng)驗、對原藥雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)要有精準的判斷等；應(yīng)熟悉國際上對相關(guān)雜質(zhì)的登記要求、熟悉各個國家對全分析報告的要求、以及各國的法律規(guī)范。其次GLP中還要求SD要對試驗全過程和最終報告負責(zé)。包括批準試驗計劃；確保試驗全過程的完整性和真實性；確保試驗按照試驗計劃和SOP實施；確保完整記載試驗產(chǎn)生的全部原始數(shù)據(jù)；與QA人員、委托方、試驗人員保持暢通的溝通；在最終報告中簽署遵循GLP程度的聲明等。

1.3 質(zhì)量體系要求 要完成一個全分析項目，還需要一套質(zhì)量體系作為其支撐。這個質(zhì)量體系要有程序控制，才能保證結(jié)果的可靠性；試驗階段程序化運作才能保證試驗結(jié)果可溯源，可重復(fù)。質(zhì)量體系有很多種，目前國際上大多數(shù)國家，如美國、日本、歐洲國家等OECD成員國通常對農(nóng)藥登記認可的質(zhì)量體系為GLP體系。這些國家也相繼出臺了整套的GLP法律法規(guī)規(guī)范，我國自2017年《農(nóng)藥管理條例》實施以來，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部也相繼出臺了《農(nóng)藥登記試驗管理辦法》、《農(nóng)藥登記試驗質(zhì)量管理規(guī)范》、《農(nóng)藥登記試驗單位評審規(guī)則》等新規(guī)，這也表明我國的農(nóng)藥登記正式進入了GLP法規(guī)時代。

2 GLP全組分分析項目的關(guān)鍵點

2.1 全組分分析的試驗流程 全組分分析的試驗流程簡單來說主要有三步。

2.1.1 要有一份經(jīng)項目負責(zé)人批準的試驗計劃書 在計劃書中主要的技術(shù)內(nèi)容就是除了要確定原藥中有效成分的分析方法以外，還必須確定>0.1%的雜質(zhì)以及登記要求的相關(guān)雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)，并且獲得這些雜質(zhì)參照物。計劃書中還要闡述這些雜質(zhì)檢測的分析方法。

2.1.2 接下來就是按照試驗計劃書進行正式試驗 試驗過程首先是針對有效成分和雜質(zhì)進行定性分析，比照參照物，通過紫外、紅外、核磁、質(zhì)譜等方法來證明有效成分和雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)；其次就是對這些確認的組分進行定量分析。在定量分析之前，還要將選定的分析方法進行驗證，通過特異性、精密度、回收率、線性范圍來驗證此方法可靠；對于雜質(zhì)，分析方法驗證通常還要求進行檢出限(LOD)和定量限(LOQ)試驗。最后才能采用驗證過的方法，對這些組分進行定量分析。

2.1.3 以上試驗結(jié)束后，就是根據(jù)原始數(shù)據(jù)撰寫最終報告 該報告要總結(jié)所有的試驗數(shù)據(jù)、描述試驗過程、給出試驗結(jié)論。形成報告初稿后，要經(jīng)過質(zhì)量保證部門的審核、委托方的審核，最后經(jīng)項目負責(zé)人批準。

2.2 GLP的要點 所謂GLP項目，無非就是需要滿足GLP準則的基本要求。而GLP項目的基本要點如下：

2.2.1 資源 是指需要有固定的組織機構(gòu)、足夠的人員、滿足試驗條件的設(shè)施和設(shè)備；

2.2.2 規(guī)則 是指要有書面的規(guī)程來指導(dǎo)試驗全流程，健全的文件來支撐項目，合理的試驗計劃書指導(dǎo)試驗；

2.2.3 表征 是指被試物和整個試驗體系，全組分分析涉及的就是物理-化學(xué)體系；

2.2.4 記錄 是指所有的原始數(shù)據(jù)、形成的最終報告和所有數(shù)據(jù)和樣品檔案；

2.2.5 質(zhì)量保證 QA要貫穿于整個項目，從試驗計劃審查、試驗階段審查到最終報告和原始記錄審查。

2.3 GLP全分析項目的關(guān)鍵點 綜合以上全組分分析和GLP的要點，可以匯總出GLP全分析項目的關(guān)鍵點如下：

2.3.1 儀器設(shè)備及計算機化系統(tǒng)的驗證 對于GLP項目中用到的儀器設(shè)備，目前使用的大多數(shù)都具有計算機化系統(tǒng)，而對于這類儀器設(shè)備最主要的就是驗證活動。除了需要對儀器本身進行4Q確認之外，還要對其使用的計算機化系統(tǒng)以及相關(guān)的設(shè)施進行驗證。而驗證活動必須從設(shè)定驗證計劃開始，按照驗證計劃實施驗證活動之后，形成驗證報告來評估整個系統(tǒng)的可靠性。

2.3.2 全組分分析項目的試驗計劃 一份成功的試驗計劃書，要有科學(xué)性、通過QA和委托方審核、便于試驗人員使用、符合GLP準則要求、信息完整、具有唯一性、受控分發(fā)。而全組分分析的試驗計劃成敗在于預(yù)實驗。預(yù)實驗可以分為兩步：一是基本預(yù)實驗，是指項目負責(zé)人對主成分和雜質(zhì)進行剖析，初步確定雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)。結(jié)合生產(chǎn)工藝路線，確定雜質(zhì)來源，對雜質(zhì)結(jié)構(gòu)進行進一步判斷。二是深入預(yù)實驗，這時需要獲得雜質(zhì)參照物，與被試物進行比對，判斷其是否為同一物質(zhì)。待預(yù)實驗完成之后，就可以進行試驗設(shè)計，確定可靠的分析方法，當(dāng)然這包括主成分和雜質(zhì)的分析方法都需要確定下來。這些都完成之后就可以起草試驗計劃書了。

2.3.3 原始數(shù)據(jù) 原始數(shù)據(jù)是所有結(jié)論的依據(jù)，其包括試驗現(xiàn)象、溶液配制過程、原始稱樣量、試驗過程記錄、譜圖、選用的色譜方法、儀器的序列表、Excel計算、工作站中的電子數(shù)據(jù)、儀器使用記錄、儀器維護記錄等在試驗過程中產(chǎn)生的所有數(shù)據(jù)。在GLP中要求試驗需要按照試驗計劃和SOP進行；產(chǎn)生的數(shù)據(jù)均要直接、迅速、準確、字跡清楚地記錄下來。這些記錄均需要有簽名并標注日期。變更任何原始數(shù)據(jù)，不得涂改掩蓋先前的記錄。應(yīng)說明數(shù)據(jù)變更的理由，并有變更人員的簽字和日期。另外，在全組分分析中的數(shù)據(jù)處理通常會使用到Excel表格，如果提前將這些Excel模板進行驗證，就可以大大提高工作效率，并且保證數(shù)據(jù)可靠。

2.3.4 分析方法 通常進行全組分分析時采用的多是非通用方法，所以就要求對該方法進行驗證。對于主成分通常需要進行特異性或?qū)傩?、線性范圍、精密度和回收率的方法驗證；對于雜質(zhì)還需要給出定量限和檢出限的驗證過程。

2.3.5 最終報告 從試驗計劃開始描述要做的，試驗過程就是通過原始數(shù)據(jù)反映如何按照試驗計劃進行的，而最終報告則是將已經(jīng)做過的試驗全部報告出來。最終報告的格式要符合登記國家的要求，涵蓋試驗計劃書中要求的所有內(nèi)容，被試物信息、委托方信息、實驗室的基本信息，報告所有試驗過程，給出試驗結(jié)果，資料的保存期限和保存地點。還有不可缺少的就是項目負責(zé)人對整個項目的GLP符合性聲明以及QA聲明。

2.3.6 歸檔 這里需要歸檔的資料包括：被試物(參照物)記錄、委托方信息記錄、原始記錄、所有譜圖、儀器使用記錄、試驗計劃書及其分發(fā)記錄、計算過程、產(chǎn)生的電子數(shù)據(jù)等以及試驗計劃書中明確需要歸檔的資料。檔案不僅僅是指紙質(zhì)資料，還包括樣品檔案和電子檔案。所有這些的保存期限、放置地點都需要在最終報告中明示。

3 GLP項目中的角色關(guān)系

委托方：GLP項目是由委托方發(fā)起的，所以在GLP準則中也明確了委托方的責(zé)任，要求委托方也要遵守準則的要求。目前我們國內(nèi)的好多委托方還沒有建立起GLP概念，在委托項目時不了解自己的義務(wù)，在跟試驗單位合作時就缺乏GLP意識，不知道應(yīng)該關(guān)注哪些環(huán)節(jié)，應(yīng)該提供什么樣的被試物，自己在試驗計劃審核時傾注的注意力不夠，批準的很隨意，在項目進行時沒有跟試驗單位進行有效的溝通，只在拿到報告時才開始提各種各樣的要求。這樣可能會導(dǎo)致整個項目的不順利。所以，作為委托方是有義務(wù)了解GLP準則的，試驗單位也要在與委托方的溝通合作中不斷灌輸GLP觀念給委托方，這樣大家的合作才會愉快而長久。

對于試驗單位而言，委托方是外部關(guān)系，而內(nèi)部中，在GLP項目中擔(dān)當(dāng)主要角色的有三個：機構(gòu)負責(zé)人(TFM)、項目負責(zé)人(SD)和質(zhì)量保證人員(QA)。這三方的關(guān)系應(yīng)該是個堅固的“鐵三角”。機構(gòu)負責(zé)人的作用應(yīng)該是提供資源，包括軟件和硬件；任命SD；以及支持QA。項目負責(zé)人是整個GLP項目的責(zé)任人，應(yīng)該具有全組分分析中的科學(xué)家身份，也具有項目的管理者身份。他應(yīng)該是整個項目的靈魂人物，要關(guān)注和掌控整個項目。同時要與委托方、試驗人員和QA進行廣泛的溝通。QA的作用則主要是進行項目審查，從試驗計劃、試驗的關(guān)鍵階段到最終報告和原始記錄的審查。除此之外，QA還要按照計劃對整個機構(gòu)進行設(shè)施核查。質(zhì)量保證部就是外部審查部門設(shè)立在機構(gòu)內(nèi)部的審查部門，時刻關(guān)注整個機構(gòu)，每個GLP項目的動向。因此，QA應(yīng)該是非常熟悉GLP準則的，同時在大多數(shù)機構(gòu)，QA還會承擔(dān)起GLP準則的培訓(xùn)工作。

綜上所述，GLP良好運行的標志如下：GLP體系文件健全完整；設(shè)備精良，驗證充分；人員配制合理，培訓(xùn)到位；各崗位職責(zé)明確；團隊溝通順暢有效。具備了以上幾個關(guān)鍵點，就會制造出一個又一個完美的GLP全組分分析項目。