鄒建文，饒紅欣，彭信海，羅先權，陳 靈

（湖南省森林植物園，湖南 長沙 410116）

藥用植物桔梗組培快繁技術研究

鄒建文，饒紅欣，彭信海，羅先權，陳 靈

（湖南省森林植物園，湖南 長沙 410116）

為有效保護藥用植物桔梗的種質資源，以桔梗種子消毒后萌發(fā)的無菌苗為外植體，進行組培快繁技術研究。結果表明：接種誘導培養(yǎng)基以 MS＋BA1.0 mg·L-1＋IBA0.2 mg·L-1最佳，誘導率為 83.8%；繼代培養(yǎng)基以WPM＋ZT1.0 mg·L-1＋NAA0.1 mg·L-1最佳，增殖系數為 8.82；生根培養(yǎng)基以 WPM＋IBA0.5 mg·L-1為最佳，生根率達 100%，平均生根條數 5.21；試管苗煉苗后移栽到水苔 : 黃心土＝1 : 2 的基質上，移栽成活率可達 98.21%。

桔梗；組培；快繁；藥用植物

桔梗（Platycodon grandiflorum），桔?？平酃僦参铮瑒e名也叫包袱花、鈴當花，系多年生草本，株高 30～100 cm，全株具白色乳汁，根長圓錐形，肥大肉質，外皮黃褐或灰褐色，生于山坡草地、林緣等環(huán)境中，略耐半陰［1-5］。桔梗是一種藥、食、賞多用的植物，以根入藥。其味苦、辛，性平，具有宣肺、利咽、祛痰、排膿等功能，現(xiàn)代藥理學研究表明，桔梗還具有抗炎、解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、降血糖、降血脂、降膽固醇、抑制胃酸分泌及抗胃潰瘍等作用［6-9］。近些年來，桔梗藥材的需求量不斷擴大，然而桔梗主要來源于野生資源，由于對野生資源的掠奪式采挖，再加上只采不育，使野生資源面臨枯竭，已經遠遠不能滿足需要。開展桔梗組培快繁技術研究，對桔梗種質資源的保存和野生資源的保護及滿足中藥材的需求等有著重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料為北京南無科貿有限責任公司生產的桔梗種子。

1.2 試驗方法

1.2.1 消毒與接種 選取成熟飽滿的種子備用。經自來水反復清洗種子 30 min 后，用 0.2% HgCl2消毒 15 min，再分別用 1% 氯化鈣和無菌水浸洗3 次，每次 5 min。經消毒的種子，在超凈工作臺上，用消毒濾紙吸干表面水分后，接種于以 MS 為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度 BA、IBA 激素的誘導培養(yǎng)基上，50 天時統(tǒng)計種子萌發(fā)及芽誘導情況。

1.2.2 繼代培養(yǎng)基的篩選 以 MS、WPM 為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的 BA、ZT、IBA、NAA 激素進行繼代培養(yǎng)基的篩選。試驗 8 個處理，每個處理 50 株，3 次重復，25 天時記錄芽的增殖情況，分析數據得出增殖系數，對試驗結果進行單因素試驗方差分析，新復極差檢驗。

1.2.3 生根培養(yǎng)基的篩選 以 MS、WPM 為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的 IBA 激素進行生根培養(yǎng)基的篩選。試驗 6 個處理，每個處理 80 株，3 次重復，25 天時記錄生根情況，對試驗結果進行單因素試驗方差分析，新復極差檢驗。

1.2.4 移栽 生根后的試管苗煉苗 2—4 天，待其適應自然環(huán)境后，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽至塑料大棚, 移栽后注意通風保濕，遮蔭及預防病蟲害。以黃心土、水苔、糠殼灰、泥炭按比例混合為不同組合進行移栽基質的篩選。試驗 5 個處理，每個處理 100 株，3 次重復，45 天時記錄移栽成活情況，對試驗結果進行單因素試驗方差分析，新復極差檢驗。

1.2.5 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 培養(yǎng)基瓊脂含量 0.7%，蔗糖 3.0%，PH 值 5.8。試管苗培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度24～28 ℃，光照強度 2 000～3 000 Lx，每天光照時數 14 h。試管苗移栽后培養(yǎng)條件：大棚內溫度控制在 15～30 ℃，空氣相對濕度控制在 80%～95%，基質保持濕潤不積水，每周噴一次除菌劑，注意通風和適時遮蔭。

2 結果與分析

2.1 無菌培養(yǎng)系的建立

接種到培養(yǎng)基上的種子在 15 天左右開始萌動。之后有大小不同的愈傷組織出現(xiàn)，在其上面有許多綠色的顆粒狀小芽點，這些小芽點分化為叢生芽（見圖 1）。

圖1 芽的誘導Fig.1 Bud induction

表1 桔梗種子初接種培養(yǎng)基的篩選Tab.1 Medium selection for initial inoculation induction of Platycodon grandiflorum seeds

從表 1 可見，種子萌發(fā)率在 30.5%～83.8%之間，1～4 號培養(yǎng)基均能成功誘導叢生芽，除4號培養(yǎng)基外，1～3 號培養(yǎng)基叢生芽生長旺盛，其中3號培養(yǎng)基 MS＋BA1.0 mg·L-1＋IBA0.2 mg·L-1種子萌發(fā)率最高為 83.8%，并且長勢最好，是最佳誘導培養(yǎng)基。

2.2 繼代培養(yǎng)基的篩選

當新芽長至 1.5 cm 左右時，切取新芽轉移到不同繼代培養(yǎng)基上，對繼代培養(yǎng)基進行篩選，結果見表 2、表 3。

對所有參試繼代培養(yǎng)基單因素方差分析的結果表明，不同培養(yǎng)基配方對繼代增殖系數有極顯著影響。其中 8、12 號培養(yǎng)基的增殖系數極顯著低于其它參試培養(yǎng)基，生長勢一般或差，首先予以淘汰；5、7、9、11 號培養(yǎng)基增殖系數較高，在 3.54～5.62 之間，生長勢較好，但葉色偏黃，連續(xù)繼代時長勢明顯變弱，不適合作為繼代培養(yǎng)基。參試培養(yǎng)基中，6、10 號培養(yǎng)基增殖系數極顯著高于其他培養(yǎng)基，其中 6 號培養(yǎng)基 WPM＋ZT1.0 mg·L-1＋NAA0.1 mg·L-1，增殖系數高達 8.82，生長整齊，葉色綠，試管苗生長旺盛（見圖 2），是最佳繼代培養(yǎng)基。

圖2 繼代培養(yǎng)Fig.2 Subculture

表2 桔梗繼代培養(yǎng)基篩選方差分析Tab.2 Variance analysis of the medium selection for subculture of Platycodon grandiflorum

表3 桔梗繼代培養(yǎng)基的篩選Tab.3 Medium selection for subculture of Platycodon grandiflorum

2.3 生根培養(yǎng)基的篩選

當芽培養(yǎng)增殖到一定數量時，將株高 3 cm 左右的桔梗叢生芽切成單株后進行生根培養(yǎng)，結果見表 4、表 5。

對所有參試生根培養(yǎng)基進行單因素方差分析，結果表明：不同培養(yǎng)基配方對生根率有顯著影響，而對生根數有極顯著影響。從表 5 可看出，所有參試培養(yǎng)基均誘導出了根，其中 14、15號培養(yǎng)基誘導率分別為 100% 和 97.75%，極顯著高于其它參試培養(yǎng)基；并且 14、15 號培養(yǎng)基中試管苗根系發(fā)達，生根數分別為 5.21 和 4.55，其中 14 號培養(yǎng)基生根數極顯著高于其它參試培養(yǎng)基（見圖3），并且生根時間短僅 10 天，生長勢旺盛。根據以上情況，確定 14 號 WPM+IBA0.5 mgL-1為最佳生根培養(yǎng)基。

表4 桔梗生根培養(yǎng)基篩選方差分析Tab.4 Variance analysis of the medium selection for root induction of Platycodon grandiflorum

表5 桔梗生根培養(yǎng)基的篩選Tab.5 Medium selection for root induction of Platycodon grandiflorum

2.4 移栽

生根試管苗煉苗 2—4 天后移栽至不同基質，結果見表 6、表 7。

對所有參試移栽基質進行單因素方差分析的結果表明，不同移栽基質對試管苗移栽成活率有極顯著影響。1 號、2 號移栽基質中桔梗試管苗移栽成活率極顯著高于其他參試基質，其中使用 1 號水苔 : 黃土（1 : 2）基質的移栽成活率達98.21% 為最佳移栽基質（見圖 4）。

圖3 生根培養(yǎng)Fig.3 Root induction

圖4 移栽Fig.4 Transplant

表6 桔梗試管苗移栽基質篩選方差分析Tab.6 Variance analysis of the transplanting medium selection of Platycodon grandiflorum

表7 桔梗試管苗移栽基質的篩選Tab.7 Transplanting medium selection of Platycodon grandiflorum

3 結論與討論

（1）桔梗是大宗中藥材，市場需要量大，為此，有很多學者進行了桔梗組織培養(yǎng)和快速繁殖研究［10-19］，其研究所采用的均為以 MS 為基本培養(yǎng)基的配方組合。本文除了以 MS 為基本培養(yǎng)基，還探討了以 WPM 為基本培養(yǎng)基的配方組合試驗，研究出了一整套全新的成熟的桔梗組培快繁的技術方法，既可進行大規(guī)模的工廠化育苗，也可為桔梗的生理研究提供依據和參考。

（2）培養(yǎng)基的篩選是一個綜合評定篩選的過程。最佳繼代培養(yǎng)基不但要求有較高的增殖率，而且還要結合試管苗葉色、形態(tài)、生長勢等情況［18,19］進行評判篩選；最佳生根培養(yǎng)基不但要求生根率高，而且還要綜合考慮根系質量，生根時間，以及試管苗的葉色、形態(tài)、生長勢等進行評判篩選。本文通過綜合評定篩選認為，桔梗繼代增殖以 WPM＋ZT1.0 mg·L-1+ NAA0.1 mg·L-1，生根培養(yǎng)以 WPM＋IBA0.5 mg·L-1為最佳。

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Study on tissue culture and rapid propagation of medicinal plant Platycodon grandiflorum

ZOU Jianwen，RAO Hongxin，PENG Xinhai，LUO Xianquan，CHEN Ling
（Hunan Forest Botanic Garden，Changsha 410116，China）

Using germinated sterile plantlets as explants，tissue culture of medicinal plant Platycodon grandiflorum were carried out.The result showed that MS＋BA1.0 mg·L-1＋IBA0.2 mg·L-1was optimum for shoot induction with shoot induction rate 83.8%，and WPM＋ZT1.0 mg·L-1＋NAA0.1 mg·L-1with proliferation coefficient 8.82 was optimum for subculture.When shoot were cultured on WPM＋IBA0.5 mg·L-1，root induction rate could get at 100% and average number of roots were 5.21.Transferred to pot mixture containing sphagna/yellow subsoil（1 : 2）after hardening，and the survival rate of plantlets could reached to 98.21%.

Platycodon grandiflorum；tissue culture；rapid propagation；medicinal plant

S 567.23；Q 945.5

A

1003-5710（2017）05-0070 -04

10.3969 / j.issn. 1003-5710.2017.05.015

2017-07-16

湖南省林業(yè)科技計劃項目（XLK201720）；湖南省林下經濟專項項目（LXJ2016206）；湖南省優(yōu)良林木快繁工程技術研究中心項目（NK201410）

鄒建文（1968-），男，湖南省隆回縣人，副研究員，研究方向：林下經濟及藥用植物研究

饒紅欣，研究員；E-mail：zwyrhx@163.com

（文字編校：龔玉子）