黃齊惠

摘 要： 筆者對(duì)2015年版《中國(guó)藥典》無(wú)菌檢查法與2010年版《中國(guó)藥典》無(wú)菌檢查法進(jìn)行了比較。從分析中可知2015年版《中國(guó)藥典》將無(wú)菌檢查法完善成為更加科學(xué)并與國(guó)際接軌的檢查方法。

關(guān)鍵詞： 中國(guó)藥典；2015版；無(wú)菌分析法

0 引言

無(wú)菌檢查法是針對(duì)無(wú)菌或滅菌藥品、敷料及器械等的無(wú)菌可靠性而建立的檢查法， 即藥品、敷料和器械等的無(wú)菌可靠性可通過(guò)無(wú)菌檢查來(lái)確認(rèn)， 而無(wú)菌檢查的可信度與抽樣量、檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基質(zhì)量、材料、操作環(huán)境和無(wú)菌技術(shù)等有關(guān)。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展， 各國(guó)藥典的無(wú)菌檢查法在每一新版中都有不同程度的改進(jìn)和提高。無(wú)菌檢查法自20 世紀(jì)60 年代載入《中國(guó)藥典》， 在以后的1977年版、1985年版、1990年版、1995年版、2000年版、2005年版、2010版、2015版藥典中，對(duì)培養(yǎng)基種類(lèi)及質(zhì)量要求、樣品的分類(lèi)及檢驗(yàn)量、檢驗(yàn)方法等均進(jìn)行了不斷改進(jìn)。

1 之前幾版藥典改動(dòng)分析

1985年版將1977年版中的好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基合二為一，有利于細(xì)菌的檢出，也減少了工作量。培養(yǎng)基質(zhì)量檢查用菌種增加了藤黃微球菌， 其是自然環(huán)境中常見(jiàn)的非致病菌， 它對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求較嚴(yán)格，生長(zhǎng)較慢，較金黃色葡萄球菌等代表菌株有更多優(yōu)點(diǎn)；1985年版還刪除了1977年版中處理抗生素供試品的離子交換樹(shù)脂法，保留了青霉素酶法。1990年版將薄膜過(guò)濾法的沖洗量修訂為每次100 mL。1995年版在對(duì)制備好的培養(yǎng)基的要求中加入了好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基“在無(wú)菌檢查接種前，培養(yǎng)基指示劑氧化層的顏色不得超過(guò)培養(yǎng)基深度約1/5。否則，需經(jīng)水浴煮沸加熱，只限加熱1次”；1995年版在對(duì)供試品進(jìn)行無(wú)菌檢查時(shí)要求“取1支好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基作陰性對(duì)照”，盡管這樣的陰性對(duì)照無(wú)法考察操作過(guò)程的污染，但較前幾版藥典仍是一個(gè)可喜的突破。2000年版規(guī)定“凡無(wú)菌檢查中，均應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋劑同法操作，作陰性對(duì)照”，這樣的陰性對(duì)照從根本上避免了因培養(yǎng)基、溶劑和相關(guān)器具滅菌不徹底和操作人員操作失誤造成的誤判現(xiàn)象。2005年版較前幾版藥典在無(wú)菌檢查的方法上有了質(zhì)的飛躍，規(guī)定了當(dāng)進(jìn)行藥品的無(wú)菌檢查時(shí)應(yīng)進(jìn)行方法驗(yàn)證，通過(guò)方法驗(yàn)證（即抑細(xì)菌和抑真菌試驗(yàn)），確定供試品的檢驗(yàn)條件和方法，保證了無(wú)菌檢查方法的科學(xué)性和檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性；進(jìn)一步細(xì)化了樣品的處理，增加了油膏和軟膏類(lèi)供試品、氣（噴）霧劑類(lèi)供試品、裝有藥物的注射器供試品、具有導(dǎo)管的醫(yī)療器械供試品的無(wú)菌檢查方法；對(duì)無(wú)菌檢查中使用的所有陽(yáng)性對(duì)照菌的傳代次數(shù)均要求控制在5代以?xún)?nèi)。

2010年版《中國(guó)藥典》及之前版本收錄的無(wú)菌檢查法與國(guó)際通用的標(biāo)準(zhǔn)在檢查理念、培養(yǎng)體系、方法要求等諸多方面有顯著差異。在國(guó)家藥品安全規(guī)劃與標(biāo)準(zhǔn)提高的目標(biāo)下，2015 年版《中國(guó)藥典》借鑒國(guó)外藥典先進(jìn)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，以新的控制理念為指導(dǎo)，結(jié)合我國(guó)國(guó)情對(duì)無(wú)菌檢查法的檢測(cè)范圍及環(huán)境要求、培養(yǎng)體系、方法適用性、檢查方法、偏差調(diào)查與過(guò)程控制等方面都做了較大修訂，進(jìn)一步完善了無(wú)菌檢查法，修訂后的無(wú)菌檢查法正逐步與國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)一致。筆者對(duì)比了2010年版《中國(guó)藥典》，解讀2015年版《中國(guó)藥典》無(wú)菌檢查法增修訂概況，以推動(dòng)新版藥典的貫徹實(shí)施。

2 檢測(cè)范圍和環(huán)境要求的變化

2.1 檢測(cè)范圍

2010 年版《中國(guó)藥典》無(wú)菌檢查法的相關(guān)內(nèi)容統(tǒng)一為新的標(biāo)準(zhǔn)方法，解決了長(zhǎng)期以來(lái)各部之間相同方法要求不一致的問(wèn)題，其檢查范圍增大，要求更明確、嚴(yán)格。除了規(guī)定藥典要求無(wú)菌的藥品、原料、輔料、生物制品及其他品種外，還將無(wú)菌醫(yī)療器具明確納入檢查范圍。無(wú)菌醫(yī)療器具與無(wú)菌藥品的使用密切相關(guān)，影響著無(wú)菌藥品的安全使用。醫(yī)療器具在提高救治質(zhì)量的同時(shí)，也可能成為環(huán)境病原菌的傳播工具，造成醫(yī)院感染的發(fā)生，新的要求必將嚴(yán)格無(wú)菌醫(yī)療器具的監(jiān)管，降低安全風(fēng)險(xiǎn)。

2.2 環(huán)境要求

新版藥典無(wú)菌控制理念要求檢測(cè)環(huán)境應(yīng)與檢測(cè)需求相適應(yīng)，體現(xiàn)科學(xué)、合理的原則。目前，國(guó)際上對(duì)無(wú)菌檢測(cè)環(huán)境無(wú)明確要求，但原則上無(wú)菌檢查的試驗(yàn)環(huán)境應(yīng)不低于無(wú)菌藥品的生產(chǎn)關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境。相比2010年版《中國(guó)藥典》規(guī)定的無(wú)菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000 級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行的要求，2015年版《中國(guó)藥典》中規(guī)定“無(wú)菌檢查應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢查的要求”。無(wú)菌檢查條件和無(wú)菌檢查具體要求應(yīng)是什么呢？2015年版《中國(guó)藥典（ 四部） 》通則9203 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則中給出了具體指導(dǎo)意見(jiàn)，無(wú)菌檢查應(yīng)在B級(jí)背景下的A 級(jí)單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。新版藥典這一要求比之前的環(huán)境要求更嚴(yán)格，在無(wú)菌操作、預(yù)防措施、潔凈度確認(rèn)、隔離系統(tǒng)驗(yàn)證和環(huán)境監(jiān)控等方面要求一致。新版藥典在通則9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則和9205 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則對(duì)試驗(yàn)環(huán)境和環(huán)境監(jiān)控有更詳細(xì)、具體的指導(dǎo)，增強(qiáng)了方法的可操作性、實(shí)用性、可靠性和規(guī)范性。

3 方法適用性試驗(yàn)的變化

3.1 名稱(chēng)的修訂

2015 年版《中國(guó)藥典》無(wú)菌檢查法將方法驗(yàn)證試驗(yàn)修訂為方法適用性試驗(yàn)。驗(yàn)證與適用性均是為保證方法的合理、有效而對(duì)方法進(jìn)行的測(cè)評(píng)，然而其側(cè)重點(diǎn)不同。方法學(xué)驗(yàn)證是通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明方法的運(yùn)行符合分析應(yīng)用要求的過(guò)程，側(cè)重于方法本身的科學(xué)性。適用性把儀器確認(rèn)、電子系統(tǒng)、分析方法、操作、樣品等因素作為一個(gè)整體的系統(tǒng)來(lái)評(píng)價(jià)，控制分析條件諸因素的影響，使檢測(cè)活動(dòng)能達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。方法適用性試驗(yàn)包含方法驗(yàn)證試驗(yàn)，范圍更廣，層次更高，更為全面的質(zhì)量控制策略。分析方法驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移和確認(rèn)的概念不同，適用范圍不同。方法確認(rèn)的目的是證明藥典分析方法或法定分析方法適用于被測(cè)樣品，被測(cè)樣品的質(zhì)量可控，方法可行，同時(shí)還證明方法使用人員有能力成功地操作藥典分析方法或法定分析方法。新版藥典將原來(lái)的“驗(yàn)證、證明”的表述修訂為“確認(rèn)”，更準(zhǔn)確。

3.2 菌種及菌液制備

增加了pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液作為菌液制備中的稀釋劑和洗脫劑，pH7.0無(wú)菌氯化鈉- 蛋白胨緩沖液除了能提供適宜的滲透壓、良好的細(xì)胞修復(fù)環(huán)境外，還消除了微生物培養(yǎng)過(guò)程中積累的代謝產(chǎn)物引起的酸堿度變化而帶來(lái)的不利影響。方法適用性試驗(yàn)使用的菌種與培養(yǎng)基靈敏度使用的菌種略有不同，方法適用性試驗(yàn)以大腸埃希菌代替銅綠假單胞菌。銅綠假單胞菌為假單胞菌屬菌種，對(duì)很多抗生素都天然耐藥，藥物敏感度不高，不適合做方法適用性。但假單胞菌屬的細(xì)菌對(duì)培養(yǎng)體系的營(yíng)養(yǎng)要求高，所以適合做培養(yǎng)基適用性檢查。

3.3 薄膜過(guò)濾法

薄膜過(guò)濾法是歷版《中國(guó)藥典》收載的無(wú)菌檢查法的首選方法，其具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，尤其是全封閉式薄膜過(guò)濾器具有不易污染的優(yōu)勢(shì)而在薄膜過(guò)濾法中得到廣泛應(yīng)用，新版藥典刪除了“取出濾膜接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基中”，淘汰了開(kāi)放式薄膜過(guò)濾的操作方式。另外，在培養(yǎng)時(shí)間上要求不得超過(guò)5d，對(duì)方法適用性試驗(yàn)進(jìn)程提出了比較靈活的要求。

3.4 直接接種法

當(dāng)樣品的性狀不允許，且經(jīng)多種方法前處理后仍無(wú)法采用薄膜過(guò)濾法的供試品，可采用直接接種法，由于培養(yǎng)體系的不同，方法適用性試驗(yàn)所使用的培養(yǎng)基的接種管數(shù)也與2010 年版《中國(guó)藥典》規(guī)定的接種管數(shù)有差異。2010年版規(guī)定為硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基8管，改良馬丁培養(yǎng)基4 管；2015年版為硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基與胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基各6管。

參考文獻(xiàn)

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