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(杭州市虎跑路杭州動(dòng)物園，浙江杭州 310008)

浣熊感染蠟樣芽胞桿菌的病原鑒定及病因分析

陳玎玎，應(yīng)志豪，黃淑芳，王才益，楊忠興，龔利洋

(杭州市虎跑路杭州動(dòng)物園，浙江杭州 310008)

杭州某動(dòng)物園同籠飼養(yǎng)的兩只浣熊在10 d內(nèi)先后因不明原因死亡，后經(jīng)體內(nèi)分離得到的細(xì)菌，診斷鑒定為蠟樣芽胞桿菌感染，經(jīng)感染試驗(yàn)表明，該菌對(duì)小鼠有相同致病性，且癥狀與自然發(fā)病浣熊類(lèi)似?，F(xiàn)將有關(guān)研究分析報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1細(xì)菌鑒定 無(wú)菌采集死亡浣熊心肝肺脾組織接種于普通瓊脂培養(yǎng)基，腸內(nèi)容物接種于中國(guó)藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基及SS培養(yǎng)基。37℃培養(yǎng)24 h。取菌落涂片染色鏡檢鑒定菌株。

1.2藥敏試驗(yàn) 采用K-B紙片擴(kuò)散法將濃度為0.5麥?zhǔn)蠞舛?1.5×108cfu/mL)菌液涂布接種于普通瓊脂平皿，37℃培養(yǎng)16-24 h后測(cè)量抑菌圈直徑，判定常用藥物敏感性。判斷依據(jù)：WS/T 125-1999紙片法抗菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，并參照葡萄菌屬抑菌圈解釋標(biāo)準(zhǔn)。

1.3動(dòng)物試驗(yàn)

1.3.1菌液制備 食品安全檢測(cè)，蠟樣芽胞桿菌濃度不得超過(guò)105cfu/mL。采集生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期細(xì)菌，生理鹽水稀釋至1.0麥?zhǔn)蠞舛?3×108cfu/mL)菌液備用。

1.3.2分組感染 雄性ICR小鼠16只，隨機(jī)分為三組，空白對(duì)照組6只，其中3只口服0.2 mL生理鹽水，3只腹腔注射0.2 mL生理鹽水。腹腔感染組5只，分別腹腔注射0.2 mL備用菌液?？诜腥窘M5只，分別灌服0.2 mL備用菌液。每日觀察小鼠發(fā)病情況。120 h后處死小鼠并接種心肝肺，腸道段觸片染色檢查。

2 結(jié)果與分析

2.1臨床特征與剖檢病理變化 詳見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 浣熊1號(hào)肺

圖2 浣熊2號(hào)肺

由圖1可見(jiàn)，浣熊1號(hào)，于2016年6月中旬突然死亡。剖檢可見(jiàn)肺出血、肝臟硬化，其他實(shí)質(zhì)臟器均有出血。由圖2可見(jiàn)，浣熊2號(hào)，于2016年6月下旬出現(xiàn)昏迷，呼吸短促，疑似中暑，經(jīng)搶救無(wú)效死亡。剖檢可見(jiàn)肺部出血伴有氣腫，腸系膜出血，腎臟皮髓質(zhì)出血，肝臟腫大硬化。

2.2細(xì)菌學(xué)鑒定 詳見(jiàn)圖3、圖4、圖5。

圖3 浣熊1號(hào)細(xì)菌形態(tài)(400×)

圖4 浣熊2號(hào)細(xì)菌形態(tài)(400×)

圖5 死亡小鼠心肌及肺出血

采集菌落涂片染色鏡檢可見(jiàn)革蘭氏陽(yáng)性桿菌，成短鏈或長(zhǎng)鏈。分離純化后的菌落在普通瓊脂平皿上呈圓形或近似圓形、質(zhì)軟、稍有光澤的白色融蠟狀菌落，直徑5-7 mm。經(jīng)質(zhì)譜儀鑒定為蠟樣芽胞桿菌(Bacilluscereus)。

2.3藥敏試驗(yàn) 兩株細(xì)菌藥敏結(jié)果均為環(huán)丙沙星、慶大、頭孢拉定、丁胺卡那敏感，復(fù)方新諾明、頭孢呋辛、頭孢噻肟耐藥。

2.4動(dòng)物試驗(yàn) 口服組1只小鼠在48-72 h內(nèi)死亡(感染后65 h)，腹腔注射組3只小鼠在48-72 h內(nèi)死亡(感染后70 h，73 h，73 h)，1只小鼠在72-96 h內(nèi)死亡(感染后80 h)，空白組未見(jiàn)死亡。死亡小鼠均有不同程度心肌及肺出血，空腸出血，部分小鼠腸道出血不明顯。以上小鼠心肝肺接種物及腸道觸片均發(fā)現(xiàn)有蠟樣芽胞桿菌。

120 h后處死的小鼠中，口服組、腹腔注射組剩余小鼠心肝肺接種培養(yǎng)物未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)，腸道觸片發(fā)現(xiàn)有蠟樣芽胞桿菌。

3 小結(jié)與討論

蠟樣芽胞桿菌是一種革蘭氏陽(yáng)性兼性需氧桿菌，廣泛存在于土壤等環(huán)境中。以蠟樣芽胞桿菌為代表的微生態(tài)制劑(MEA)多被用于非消化性食品添加劑以緩解抗生素過(guò)量使用所導(dǎo)致的腸道微生態(tài)系統(tǒng)失調(diào)和降低畜禽產(chǎn)品抗生素藥物殘留等。蠟樣芽胞桿菌可引起有限性食物中毒，主要引起胃腸型感染，如嘔吐、腹瀉等，也可導(dǎo)致非腸胃型感染，合成壞死性毒素，如溶血素和磷脂酶。在機(jī)體免疫力低下或有消耗性疾病時(shí)，可作為條件致病菌導(dǎo)致菌血癥、敗血癥、腦膜炎、肺炎、肝膿腫等。

蠟樣芽胞桿菌主要通過(guò)污染糧食加工品等含淀粉較多食物而引起中毒。通常的食品加熱烹調(diào)(熱沖擊)無(wú)法殺滅該菌株，芽胞會(huì)殘存并發(fā)芽，從而導(dǎo)致生產(chǎn)的食物受到污染。另外，食品受蠟樣芽胞桿菌污染后性狀往往無(wú)明顯改變，無(wú)異常氣味，因此事先難以被發(fā)現(xiàn)。

據(jù)本次小鼠試驗(yàn)，口服組5例小鼠僅1例死亡，其余存活至120 h，腹腔注射組5例有4例死亡，一例存活至120 h，且存活小鼠體內(nèi)未分離到該菌株，僅腸道內(nèi)發(fā)現(xiàn)部分。該蠟樣芽胞桿菌菌株致死性在動(dòng)物間有所差異，小劑量感染健康動(dòng)物可自愈或不發(fā)病。

文獻(xiàn)顯示，從感染體身上分離出的蠟樣芽胞桿菌菌株往往對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，甚至第三代先鋒霉素組抗生素會(huì)產(chǎn)生抗藥性，對(duì)林可霉素、萬(wàn)古霉素、環(huán)丙沙星、紅霉素、慶大霉素和鏈霉素敏感。兩菌并未對(duì)頭孢拉定(先鋒霉素)抗藥。因此，可粗略認(rèn)為其抗藥性不強(qiáng)。

通過(guò)小鼠感染試驗(yàn)證實(shí)，從浣熊身上分離得到的菌株對(duì)健康小鼠具有致病致死作用，感染小鼠解剖癥狀與自然發(fā)病浣熊癥狀相似，且能從感染發(fā)病小鼠發(fā)病部位分離到相同菌株。因此，本研究認(rèn)為，所分離的病原菌是引起浣熊發(fā)生死亡的致病菌。浣熊壽命較短，該同籠飼養(yǎng)的兩浣熊在浣熊中已屬老年，因此極有可能是兩只浣熊因抵抗力較弱感染蠟樣芽胞桿菌后導(dǎo)致菌血癥或敗血癥后死亡。

預(yù)防該病，籠舍可用百毒殺及漂白粉進(jìn)行終末消毒。平時(shí)應(yīng)做好常規(guī)消毒工作。條件允許者，可在籠舍消毒后空舍一段時(shí)間，避免細(xì)菌重復(fù)感染。老年動(dòng)物由于免疫力、抵抗力下降，易因條件致病菌感染發(fā)病，因此平時(shí)應(yīng)特別注意老年動(dòng)物的日常飼養(yǎng)和觀察工作，做好預(yù)防保健。因蠟樣芽胞桿菌并不明顯改變食品性狀，因此在日常飼喂中，對(duì)含淀粉類(lèi)食物，如顆粒飼料等，要求保證飼料優(yōu)質(zhì)新鮮，嚴(yán)禁使用霉變飼料；夏天要注意及時(shí)清理食物殘?jiān)?/p>

2017-02-24

S858.93

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1005-7307(2017)06-0033-002