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(1.浙江大學(xué)，浙江 杭州 310058；2.浙江省動物疫病預(yù)防控制中心； 3.杭州市蕭山區(qū)畜牧獸醫(yī)局)

試驗研究

細(xì)胞源H5亞型禽流感病毒滅活疫苗免疫效果試驗

吳贇竑1,2，吳雪軍2，陳星宇3，張紅麗2

(1.浙江大學(xué)，浙江 杭州 310058；2.浙江省動物疫病預(yù)防控制中心； 3.杭州市蕭山區(qū)畜牧獸醫(yī)局)

為探索細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法生產(chǎn)H5亞型禽流感滅活疫苗的應(yīng)用效果，試驗選用10日齡四明香雞100羽，隨機(jī)分為A組與B組，每組50羽，分別采用由細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法工藝生產(chǎn)和傳統(tǒng)雞胚繁殖工藝生產(chǎn)的H5亞型禽流感疫苗免疫雞群，并于首免前、首免后28 d、60 d、90 d抽取血樣對雞群開展禽流感免疫抗體水平監(jiān)測。結(jié)果表明，使用兩種疫苗均能誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的HI抗體水平，達(dá)到防控禽流感的目的。

H5N1；禽流感；疫苗；免疫效果

禽流感是由正粘病毒科流感病毒屬的A型流感病毒引起的以禽類為主的一種高度接觸性傳染病。H5N1亞型禽流感病毒及其變異株是高致病性禽流感的典型代表。近年來爆發(fā)的H5亞型禽流感疫情不僅給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失，同時也嚴(yán)重威脅到公共衛(wèi)生安全。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將高致病性禽流感列為必須報告的傳染病，我國將其列為一類動物疫病。針對國內(nèi)H5亞型禽流感病毒，我國主要采取疫苗免疫聯(lián)合撲殺感染家禽的綜合防制措施，并已取得理想效果[1]。

目前，雞胚培養(yǎng)是國內(nèi)疫苗生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)動物用流感病毒疫苗的主要工藝手段。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)是一種比較新型的流感疫苗培養(yǎng)技術(shù)[2]。為了解細(xì)胞培養(yǎng)工藝生產(chǎn)禽流感疫苗的免疫效果，筆者選取細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法工藝和傳統(tǒng)雞胚繁殖法工藝生產(chǎn)的H5亞型禽流感疫苗分別免疫雞群，通過定期檢測雞群免疫抗體效價，比較其抗體水平及合格率，以利為防疫疫苗的選擇提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗動物 試驗在寧波余姚某規(guī)模雞場進(jìn)行，隨機(jī)選擇10日齡四明香雞100羽，均分為A、B兩組，每組50羽。采用網(wǎng)上平養(yǎng)，專人負(fù)責(zé)。

1.2供試疫苗 重組禽流感病毒(H5N1亞型)二價滅活疫苗(Re-6株+Re-7株)，A組試驗雞采用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)工藝生產(chǎn)的A疫苗，B組試驗雞采用傳統(tǒng)雞胚繁殖工藝生產(chǎn)的B疫苗。

1.3試驗試劑 禽流感H5(Re-6株)HI抗原(批號2015036)，禽流感H5(Re-7株)HI抗原(批號2015017)，由哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。雞紅細(xì)胞采自本中心飼養(yǎng)的3羽SPF公雞血液，經(jīng)離心洗滌后制備1%雞紅細(xì)胞懸液。

1.4免疫程序 參考疫苗說明，雞群14日齡首免，每羽0.3 mL；30日二免，每羽0.5 mL；110日齡三免，每羽0.5 mL；頸部皮下注射。于免疫前(14日齡)、首免后28 d(42日齡)、60 d(74日齡)、90 d(104日齡)抽取血樣，分離血清，-36℃保存?zhèn)錂z。

1.5抗體檢測 根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2003)中血凝和血凝抑制方法檢測，計算平均抗體效價及抗體離散度。

1.6判定標(biāo)準(zhǔn) 以4log2為標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計雞群抗體合格率。抗體效價≥4log2判定為合格，抗體效價<4log2判定為不合格。

2 結(jié)果與分析

試驗結(jié)果詳見表1。從抗體效價看，兩組雛雞在14日齡免疫前均存在一定的母源抗體，Re-6平均效價大于4，Re-7平均效價大于3。隨著兩次疫苗免疫，雞群免疫抗體效價迅速升高，并在74日齡以后達(dá)到基本穩(wěn)定。對比A、B兩組抗體效價數(shù)據(jù)，A組抗體效價略高于B組(詳見圖1)。

從抗體效價合格率看，兩組雛雞在免疫前合格率均較低(Re-6 74%、Re-7 30%～38%)。42日齡后均接近或等于100%，證明兩種疫苗免疫原性較好，均能刺激雞體產(chǎn)生合格的HI抗體(詳見圖1)。

離散度體現(xiàn)的是群體內(nèi)個體間抗體效價的差異程度。從表1的離散度數(shù)據(jù)看，兩組雛雞在免疫前離散度較大，而免疫后的幾次檢測中A組數(shù)據(jù)離散度明顯小于B組。

表1 H5N1禽流感疫苗雞群免疫試驗結(jié)果表

圖1 H5N1禽流感疫苗抗體評價滴度消長規(guī)律圖

3 小結(jié)與討論

據(jù)試驗結(jié)果看，14日齡雞群母源抗體水平較低，離散度較高，存在一定的疫病感染風(fēng)險。14日齡首免的免疫程序能較好保護(hù)雞群，首免后3-4周進(jìn)行二免，可使雞體HI抗體滴度達(dá)到高峰。

從免疫效果看，A、B兩種疫苗均能誘導(dǎo)雞體產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，使雞群建立較好的免疫保護(hù)力。相較于B疫苗，使用A疫苗免疫雞群，HI抗體水平更高，抗體離散度更低，免疫效果更好。

目前，我國動物用流感病毒疫苗的生產(chǎn)大多采用傳統(tǒng)的雞胚繁殖病毒，這種傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝存在著生產(chǎn)周期長，勞動強(qiáng)度大，雞胚用量大、殘存雞胚蛋白影響疫苗質(zhì)量等弊端。此外，還可能存在一定的生物安全風(fēng)險。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)作為一種新的疫苗生產(chǎn)工藝，生產(chǎn)的禽流感疫苗與傳統(tǒng)方法相比具有生產(chǎn)周期短，病毒滴度高，疫苗質(zhì)量更容易控制等優(yōu)點[3]。本試驗采用的細(xì)胞源H5N1流感疫苗，其效果略優(yōu)于雞胚源H5N1疫苗，建議可在臨床中使用。但禽流感疫苗的免疫效果受養(yǎng)殖場地、飼養(yǎng)環(huán)境、疾病感染、飼料營養(yǎng)、飼養(yǎng)密度、應(yīng)激等多種因素影響[4-5]。因此，在養(yǎng)雞生產(chǎn)中，應(yīng)該根據(jù)各場具體情況選用適合本場的禽流感疫苗。

[1] 陳全姣，金梅林，陳煥春. 禽流感疫苗研究進(jìn)展[J]. 中國生物工程雜志，2004，24 (4)：34-38.

[2] 呂宏亮，付秀花，鄭明. 傳代細(xì)胞制備流感病毒疫苗工藝研究進(jìn)展[J]. 中國獸藥雜志，2009 ，43 (6)：43-48.

[3] 喬春曉，何召慶. 流感疫苗生產(chǎn)用MDCK細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 獸醫(yī)導(dǎo)刊，2015 (15)：47-48.

[4] 鄔恩榮，李莎，何大勇，等. 振寧黃雞在不同飼養(yǎng)條件下禽流感疫苗免疫效果的比較研究[J]. 浙江畜牧獸醫(yī)，2013，38 (1)：142-142.

[5] 譚鐵兵，王勇，何建強(qiáng)，等. 不同飼養(yǎng)條件下家禽H5亞型禽流感滅活油乳劑疫苗免疫效果的監(jiān)測[J]. 養(yǎng)禽與禽病防治，2007 (9)：8-9.

2017-09-12

S858.3

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1005-7307(2017)06-0001-002