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(皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 檢驗(yàn)科，安徽 蕪湖 241001)

·短篇報(bào)道·

1例罕見47,XXX/47,XX,+21嵌合體患兒的細(xì)胞分子遺傳學(xué)診斷

許芳，張敏，朱翔，付夏，王玉萍，武其文

(皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 檢驗(yàn)科，安徽 蕪湖 241001)

產(chǎn)前篩查;21三體綜合征;47,XXX綜合征;嵌合體

21三體綜合征即Down綜合征，常見的標(biāo)準(zhǔn)核型為47,XX(或XY),+21，約占全部病例95%，嵌合體型21三體綜合征約占本癥的2%～4%，大部分患者的臨床表現(xiàn)嚴(yán)重程度與正常細(xì)胞所占百分比有關(guān)，21-三體細(xì)胞株比例越高，智力落后及畸形的程度越重。47,XXX綜合征又稱多X綜合征，是一種常見的性染色體非整倍體綜合征。嵌合型47,XXX綜合征與嵌合型21三體綜合征類似，臨床大多數(shù)患者細(xì)胞核型中一部分是正常細(xì)胞，另一部分為47,XXX細(xì)胞核型。本文報(bào)道的嵌合型(47,XXX/47,XX,+21) 非常罕見，經(jīng)檢索國內(nèi)外數(shù)據(jù)庫未見報(bào)道，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 病例資料

患兒，女，4個月，系第1胎第1產(chǎn)，足月順產(chǎn)于當(dāng)?shù)乜h醫(yī)院婦產(chǎn)科，出生體質(zhì)量2840 g，羊水量適中，無污染?；純簾o產(chǎn)傷及宮內(nèi)窒息，反應(yīng)可，否認(rèn)發(fā)熱、咳嗽、嘔吐、抽搐?；純撼錾蟮?個月，因感冒咳嗽就診。醫(yī)生因其特殊面容建議完善相關(guān)檢查，遂來我院就診?；純焊赣H年齡22歲，母親 24歲，近親婚配，雙方都為藏族人民，表型正常，染色體核型分析均正常，職業(yè)為建筑工人。否認(rèn)遺傳性疾病家族史。母親自訴孕期未做產(chǎn)前篩查。查體：眼距略寬，內(nèi)齜贅皮，外眥上斜，鼻梁塌陷。輔助檢查：甲狀腺、性激素檢查未見明顯異常。

2 實(shí)驗(yàn)室輔助方法

2.1 細(xì)胞遺傳學(xué)檢查 分別采集患兒及其父母外周血2～3 mL，接種于外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基(廣州達(dá)暉生物有限公司)，培養(yǎng)68 h后，加入20 μg/mL秋水仙素(湖南湘雅生物技術(shù)有限公司)100 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h收獲，經(jīng)低滲、固定后制片，GTG顯帶進(jìn)行核型分析。計(jì)數(shù)40個分裂相，分析20個核型，依據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制ISCN 2009進(jìn)行染色體核型描述。

2.2 間期熒光原位雜交(FISH)技術(shù) 取肝素鈉抗凝患兒外周血3～5 mL,采用人外周血淋巴細(xì)胞分離液(天津?yàn)笊镏破酚邢薰?分離單個核細(xì)胞，制備淋巴細(xì)胞懸液。應(yīng)用染色體非整倍體多色熒光原位雜交檢測試劑盒AneuVysion(自然基因科技有限公司)，對患兒的間期淋巴細(xì)胞13,18,21,X和Y染色體的數(shù)目進(jìn)行檢測。該試劑盒含有5種探針(LSI13/21和CEP18/X/Y)，其中GLP21(紅色)為21q22區(qū)特異性探針，CXPS(綠色)探針為X染色體上著絲粒探針。患兒淋巴細(xì)胞樣本經(jīng)滴片制備、玻片預(yù)處理、變性雜交、玻片洗滌、復(fù)染等系列步驟，最后在熒光顯微鏡(Olympus BX51)下對熒光信號進(jìn)行計(jì)數(shù)，F(xiàn)ISH熒光信號分析用以色列ASI染色體光譜分析系統(tǒng)的Fishview軟件進(jìn)行處理。

3 結(jié)果

3.1 染色體核型分析 結(jié)果顯示患兒染色體核型為47,XXX/47,XX,+21的嵌合體，計(jì)數(shù)40個，均為47條；分析20個核型，其中47,XX,+21者7個,47,XXX者13個(見圖1a～d)。

3.2 FISH檢測 鏡下可見細(xì)胞中有3個綠色熒光信號和3個紅色熒光信號分別代表3條X染色體和3條21號染色體，見圖2。

A.47,XX,+21未分析核型；b.47,XX,+21分析核型；c.47,XXX未分析核型；d.47,XXX分析核型。

圖1 染色體核型

綠色信號為X染色體,紅色信號為21號染色體。

圖2 FISH檢測圖

4 討論

熒光原位雜交是在分子水平上檢測外源染色質(zhì)的一種有效方法，目前在病源微生物診斷、產(chǎn)前診斷、重復(fù)序列與染色體分帶、端粒序列的定位、基因圖譜繪制中應(yīng)用廣泛[1]。多彩色熒光原位雜交在熒光原位雜交的基礎(chǔ)上克服了FISH的不足，能同時(shí)檢測多個基因,分辨復(fù)雜的染色體易位和微小缺失,區(qū)分間期細(xì)胞多倍體和超二倍體等,檢測結(jié)果與核型分析結(jié)果的一致性可達(dá)99.5%[2]。

本例患兒外周血染色體核型分析顯示其為47,XXX/47，XX,+21嵌合體，進(jìn)一步用 FISH技術(shù)對其進(jìn)行驗(yàn)證，檢測結(jié)果與染色體核型分析吻合。47，XXX/47，XX,+21嵌合體是一種非常罕見的染色體核型，目前國內(nèi)外未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。21三體綜合征最突出、最嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)是智力低于同齡人。根據(jù)染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的不同，21三體綜合征可分為單純型、易位型、嵌合型，其中除了易位型可以是由雙親遺傳而來，單純型和嵌合型一般都是新發(fā)的，與父母核型無關(guān)[3]。本例患者父、母親均正常，患兒與21三體綜合征有相似的面容，如眼距較寬，內(nèi)齜贅皮，外眥上斜，鼻梁塌陷，喜好吐舌等。因是嵌合體，智力問題和畸形程度與21-三體細(xì)胞株的比例有關(guān)。47,XXX綜合征絕大部分患者表型正常，無智力問題或智力低下不突出,但智商略低于正常人，表現(xiàn)為學(xué)習(xí)困難，算術(shù)、語言能力差[4]。此外，47,XXX綜合征主要導(dǎo)致不同程度的性征發(fā)育異常、流產(chǎn)、卵巢早衰、患精神病概率高于同齡人[5]，5%～16%的病例有泌尿生殖系統(tǒng)發(fā)育異常[6]。47，XXX產(chǎn)生的主要原因是母方染色體不分離，有文獻(xiàn)指出，與純47，XXX核型相比，含有47，XXX核型的嵌合體相關(guān)聯(lián)的疾病范圍更廣[7]。本病例47,XXX/47，XX,+21嵌合體患兒的后期臨床表現(xiàn)有待進(jìn)一步研究，其異常染色體可能由于21號及X染色體不分離所致。

另外，患兒母親在孕期未做產(chǎn)前血清學(xué)和超聲檢查。目前產(chǎn)前診斷已成為孕婦孕期的一項(xiàng)常規(guī)檢測，主要包括中孕期三聯(lián)(二聯(lián))血清學(xué)篩查、無創(chuàng)DNA、羊水穿刺。中孕期三聯(lián)(二聯(lián))血清學(xué)篩查對21三體綜合征的檢出率為60%～80%[8]，無創(chuàng)DNA對21三體綜合征診斷的靈敏度和特異度達(dá)99%,且可檢出部分嵌合體[9]。本例診斷提示做好孕期產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷工作非常重要。

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1002-0217(2017)05-0507-02

弋磯山醫(yī)院人才引進(jìn)項(xiàng)目(YR200904);弋磯山醫(yī)院三新項(xiàng)目(Z1608)

2017-01-21

許 芳(1991-)，女，2015級碩士研究生，(電話)18895362636，(電子信箱)18895362636@163.com；武其文，男，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，(電子信箱)yjslab@163.com，通信作者。

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10.3969/j.issn.1002-0217.2017.05.031