翟寶庫，譚海東，張冠群，白會新，王連英，關(guān)向暉，孫 昕，王靚靚

(1.大慶市動物疫病預(yù)防與控制中心，黑龍江大慶 163311；2.大慶市畜牧技術(shù)推廣站，黑龍江大慶 163311；3.大慶市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，黑龍江大慶 163311)

豬圓環(huán)病毒2型綜合免疫及母源抗體評估研究

翟寶庫1，譚海東1，張冠群1，白會新2，王連英1，關(guān)向暉1，孫 昕1，王靚靚3

(1.大慶市動物疫病預(yù)防與控制中心，黑龍江大慶 163311；2.大慶市畜牧技術(shù)推廣站，黑龍江大慶 163311；3.大慶市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，黑龍江大慶 163311)

豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)參與引起的疾病癥候群較為復(fù)雜，疫苗免疫效果受多種因素的影響。目前，疫苗的實際免疫效果及其對其他疫苗免疫效果的影響尚不十分清楚。針對這一問題，根據(jù)PCV-2病原和WH疫苗株特點，項目組設(shè)計了1組母豬、4組仔豬的免疫試驗，并持續(xù)監(jiān)測了免疫抗體及仔豬母源抗體變化情況，同時評估PCV-2免疫對其他疫苗(豬瘟、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征和豬O型口蹄疫)免疫效果的影響。結(jié)果顯示，仔豬一次性免疫，不能達到理想的免疫效果，間隔2周～3周加強免疫，效果較好，保護抗體可持續(xù)到105日齡以上。母豬配種前和產(chǎn)仔前兩次免疫，至仔豬斷奶后，母豬抗體較高，所產(chǎn)仔豬，28日齡母源抗體較高。PCV-2疫苗免疫不影響上述3種疫苗的免疫效果。

豬圓環(huán)病毒2型；母源抗體；免疫；評估

豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)是圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬成員，是迄今發(fā)現(xiàn)的最小動物病毒，也是繼豬繁殖與呼吸綜合征病毒之后又一影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的重要病毒。PCV-2不但是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)的主要病原，還常與其他病原混合或繼發(fā)感染，加重病情，造成豬群發(fā)病率和死亡率升高[1-2]。臨床上，PMWS是PCV-2常見的表現(xiàn)形式[3]，早期PMWS最初發(fā)生在4周～8周，感染豬群的平均死亡率為20%～40%[4]；晚期PMWS最初發(fā)生在8周～12周，一般與沙門菌共同感染，豬群死亡率高達80%[5]。我國學者通過調(diào)查證實，國內(nèi)豬群PCV-2感染較為嚴重，近年來由PCV-2感染引起的相關(guān)疾病呈上升趨勢。李海超等[6]對2005年至2012年發(fā)表論文的統(tǒng)計報道，2005年P(guān)CV-2感染率為52.8%(19/36)，至2012年感染率已上升到71.4%(162/227)。2014年1月至2015年12月項目組對大慶市及周邊地區(qū)非免疫豬群進行了血清學調(diào)查，結(jié)果顯示豬PCV-2感染率為54.70%(355/649)[7]。

本世紀初，PCV-2疫苗商品化后，開始應(yīng)用疫苗控制PCV-2，但由于PCV-2是免疫抑制性病原，共同感染原較多，自身單純的特異性疫苗免疫往往達不到理想的效果，而同時對共同感染原做適當?shù)闹鲃用庖哂袝r確能取得理想的效果。為保障養(yǎng)豬業(yè)可持續(xù)發(fā)展，我們根據(jù)PCV-2病原和WH疫苗株特點，并結(jié)合以往免疫和檢測經(jīng)驗，設(shè)計了1組母豬、4組仔豬的PCV-2疫苗免疫比對試驗，持續(xù)監(jiān)測了免疫抗體及仔豬母源抗體變化，同時評估了PCV-2疫苗對其他疫苗免疫效果的影響，以期為豬群建立包括PCV-2在內(nèi)的綜合免疫措施提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用豬 大慶市某豬場3頭母豬及所產(chǎn)32頭仔豬，另一窩9頭仔豬，共計3頭母豬，41頭仔豬。

1.1.2 試驗用疫苗 豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(WH株)，中牧實業(yè)股份有限公司產(chǎn)品；豬瘟活疫苗(脾淋源)，哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；豬O型口蹄疫滅活疫苗，金宇保靈生物藥品有限公司產(chǎn)品；高致病性豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(HuN4-F112株)，哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司產(chǎn)品。

1.1.3 檢測試劑 豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒，武漢科前動物生物制品有限責任公司產(chǎn)品；豬瘟病毒抗體檢測試劑盒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒，IDEXX公司產(chǎn)品；口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 母豬PCV-2免疫及抗體檢測 3頭空懷期母豬，分別編號為A、B、C，配種前、分娩前2周～3周，各肌肉注射PCV-2疫苗4 mL。配種前、產(chǎn)仔后、斷奶后耳緣靜脈或前腔靜脈采血分離血清用于檢測抗體水平以確定免疫效果。

1.2.2 仔豬PCV-2母源抗體檢測 3頭母豬共產(chǎn)32頭仔豬，按自然窩分為A、B、C共3組，與母豬對應(yīng)編號，A組10頭、B組11頭、C組11頭，另一窩仔豬9頭(母豬沒有免疫)作對照，定為D組。從每窩仔豬中隨機選3頭作為不免疫對照并做好標記，從產(chǎn)后第0天開始，每隔7 d采一次血樣分離血清，檢測母源抗體水平，確定仔豬母源抗體變化規(guī)律，為仔豬免疫程序設(shè)計提供參考。

1.2.3 仔豬PCV-2疫苗免疫及抗體檢測 試驗仔豬按自然窩分4組(同1.2.2)，除1.2.2標記的仔豬外，其他仔豬，A組14日齡首次免疫，35日齡二次免疫；B組21日齡首次免疫，35日齡二次免疫；C組只在21日齡免疫一次；D組作為PCV-2疫苗不免疫的對照組。具體見表1。每次免疫劑量是頸部肌肉注射PCV-2疫苗2 mL。各組免疫仔豬在出生后21、35、49、63、84和105日齡全部采血分離血清檢測抗體水平。

1.2.4 PCV-2疫苗免疫對其他疫苗免疫效果的影響 試驗仔豬分4組(同1.2.3)，具體免疫方法見表1。

表1 仔豬不同疫苗免疫時間表

PCV-2疫苗免疫同1.2.3。豬瘟疫苗每次肌肉注射4頭份；高致病性繁殖與呼吸綜合征疫苗每次肌肉注射1 mL；O型口蹄疫疫苗28日齡首免1 mL，56日齡加強免疫2 mL；各組在出生后49、63和84日齡隨機采血分離血清檢測抗體水平。

1.2.5 抗體檢測 參照試劑盒說明采用ELISA方法檢測檢測血清抗體水平。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，用Duncan氏法對各組間平均值進行多重比較。試驗結(jié)果采用“平均值±標準差”表示，以P<0.05作為差異顯著性判斷標準。分析各組不同時期抗體水平的變化規(guī)律，為制定科學合理的防控措施提供參考。

2 結(jié)果

2.1 母豬PCV-2免疫試驗結(jié)果

母豬共采集血清樣品9份，免疫前3份，產(chǎn)仔后3份，斷奶后3份(表2)。

由表2可知，母豬配種前有一定水平的PCV-2抗體，此時采用4 mL疫苗(2倍量)免疫，再在產(chǎn)仔前2周～3周同等劑量加強免疫一次，母豬在整個哺乳期間抗體可保持在較高水平。

表2 母豬PCV-2抗體水平ELISA檢測結(jié)果

注：OD值>0.42判為陽性，OD值≤0.42判為陰性。

Note：The value of OD >0.42 is positive,value of OD≤0.42 is negative.

2.2 仔豬PCV-2母源抗體水平檢測結(jié)果

A、B、C、D 4組，每組每次采集特定標記仔豬血樣(表3)。由表3可知，試驗A、B、C 3組，繁育母豬配種前和產(chǎn)仔前2周～3周連續(xù)2次4 mL疫苗(2倍量)免疫，所產(chǎn)仔豬哺乳前母源抗體皆為陰性，吃初乳后7至14日齡母源抗體達到峰值，之后隨著時間的推移開始下降，至28日齡母源抗體仍全部為陽性，且水平仍然較高，對照D組仔豬哺乳前后均未檢出母源抗體，說明仔豬體內(nèi)的母源抗體是通過母乳獲得的，母源抗體水平隨仔豬的成長逐步下降，并不因為母豬抗體水平的穩(wěn)定而持續(xù)穩(wěn)定。同樣由表3可知，試驗A、B、C 3組比較，同一時間(49、63、84日齡)母源抗體水平差異不顯著(P>0.05)，但試驗各組與對照D組同一時間比較，差異均顯著(P<0.05)，說明母豬免疫對仔豬哺乳期間具有明顯的抗體傳遞保護作用。

表3 仔豬PCV-2母源抗體水平ELISA檢測結(jié)果

注：OD值>0.42判為陽性；OD值≤0.42判為陰性；同列數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note：The value of OD >0.42 is positive,value of OD≤0.42 is negative; In the same column，values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05)．

2.3 仔豬PCV-2免疫抗體水平檢測結(jié)果

試驗分A、B、C、D 4組，每組每次隨機采樣(特定標記仔豬除外)，檢測結(jié)果見表4。

表4 四組仔豬PCV-2抗體水平ELISA檢測結(jié)果

注：OD值>0.42判為陽性，OD值≤0.42判為陰性。同列數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note：The value of OD >0.42 is positive,value of OD≤0.42 is negative；In the same column，values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05).

由表4可知，試驗仔豬PCV-2疫苗一次免疫C組，效果不理想，抗體水平不高，沒有超過母源抗體，抗體水平持續(xù)降至63日齡，84日齡雖然小幅度升高，但與對照D組84日齡自然感染產(chǎn)生的抗體水平相吻合，因此，不能說明抗體水平升高是疫苗作用結(jié)果，可能與野毒感染有關(guān)。兩次免疫的A、B兩組，加強免疫后抗體水平升高較快， 二免后14日(49日齡)達到峰值，明顯高于母源抗體，之后緩慢下降，至84日齡仍明顯高于臨界值。未免疫的對照D組，63日齡前抗體檢測陰性，84日齡呈陽性，說明豬群此時已經(jīng)受到野毒感染。同樣由表4可知，一次免疫C組與兩次免疫A、B組比較，在兩次免疫組二免后，同一時間(49、63、84日齡)差異顯著(P<0.05)，試驗各組與對照D組同一時間比較，差異顯著(P<0.05)。說明疫苗免疫對仔豬具有明顯的抗體保護作用，且兩次免疫優(yōu)于一次免疫。

2.4 PCV-2疫苗免疫對其他疫苗免疫效果的影響

2.4.1 對豬瘟疫苗免疫效果的影響 試驗包括A、D兩組，每次每組隨機采樣(表5)。由表5可知，豬瘟疫苗免疫后抗體水平上升較快，63日齡(二免后14天)抗體平均阻斷率達70%以上，至84日齡(二免后35 d)抗體阻斷率與63日齡基本持平。兩組間同一時間抗體水平比較，差異不顯著(P>0.05)，指示此種方法免疫，PCV-2疫苗免疫對豬瘟疫苗免疫效果無明顯影響。

2.4.2 對仔豬高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗免疫效果影響 試驗包括B、D 2組，每次每組隨機采樣(表6)。

表5 仔豬豬瘟抗體阻斷率檢測結(jié)果

注：阻斷率大于等于40%判為抗體陽性。

Note：The blocking rate ≥40% means antibody positive.

表6 仔豬高致病性繁殖與呼吸綜合征抗體S/P檢測結(jié)果

注： S/P值大于等于0.40判為抗體陽性。

Note：The value of S/P ≥0.4 means antibody positive.

由表6可知，豬高致病性繁殖與呼吸綜合征疫苗免疫后抗體水平上升較慢，高峰期在63日齡(二免后35 d)，但總體平均S/P值不高，之后開始下降。兩組間同一時間抗體水平比較，差異不顯著(P>0.05)，指示此種方法免疫，PCV-2疫苗免疫對豬高致病性繁殖與呼吸綜合征疫苗效果無明顯影響。

2.4.3 對仔豬O型口蹄疫疫苗免疫效果影響 試驗包括C、D 2組，每次每組隨機采樣(表7)。由表7可知，豬O型口蹄疫疫苗免疫后抗體水平上升較快，49日齡(一免后21 d)抗體水平明顯高于免疫保護的臨界值，84日齡(二免后28 d)抗體水平達1∶200以上。2組間同一時間抗體水平比較，差異也不顯著(P>0.05)，指示此種方法免疫，PCV-2疫苗免疫對豬O型口蹄疫疫苗免疫效果無明顯影響。

表7 C組仔豬O型口蹄疫抗體效價檢測結(jié)果

注：血清抗體水平大于等于1：64:判為免疫合格。

Note：The serum antibody level=1：64 means qualified immunization.

3 討論

PCV-2是繼豬繁殖與呼吸綜合征病毒之后又一影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的重要病毒。由于發(fā)現(xiàn)較晚，疫苗研制和使用相對滯后，因此對疫苗的使用效果認識也相對不足，本試驗是以PCV-2 WH株滅活疫苗為靶疫苗，以仔豬為主，設(shè)計完成的免疫和對照試驗。仔豬各免疫組與空白對照組相比，免疫效果明顯，免疫保護抗體全部超過檢測的臨界值，且維持較長時間。與單次免疫組相比，加強免疫組的免疫效果明顯優(yōu)于單次免疫組的。單次免疫組63日齡時(免后42 d)平均抗體水平已接近檢測臨界值，84日齡已不能完全檢出免疫抗體，且抗體效價始終沒有超過母源抗體。而加強免疫的兩組，35日齡加強免疫后抗體水平很快超過了母源抗體的，105日齡時(加強免后60 d)仍明顯高于檢測臨界值。兩個加強免疫組的效果相比，兩組的免疫抗體變化規(guī)律無明顯差異，35日齡(此時加強免)時抗體水平低于母源抗體的，而加強免疫后抗體水平上升很快，至49日齡(加強免后14 d)達到高峰，且明顯高于母源抗體水平，之后緩慢下降。

關(guān)于母源抗體，在母豬PCV-2免疫抗體較高的情況下，新生仔豬在哺乳前基本無母源抗體，表明針對PCV-2的母源抗體不是通過胎盤傳遞的，而是仔豬后天獲得，這與母豬上皮絨毛膜類型胎盤特點符合。在母體抗體水平較高的情況下，新生仔豬哺乳后7至14日齡母源抗體水平達到高峰，之后開始下降，至28日齡母源抗體仍保持在較高的水平，表明仔豬體內(nèi)的母源抗體是通過哺食初乳獲得的，且獲得較快，很快達到峰值。但由于受仔豬采食增多和哺乳相對減少，以及抗體半衰期等共同影響，仔豬母源抗體水平并不是始終持續(xù)增高，14日齡后隨著日齡的增加在逐漸降低，因此，有較高母源抗體的仔豬，初次免疫可根據(jù)母源抗體水平?jīng)Q定。

由于新生仔豬的保護抗體是通過母體后天獲得，做好母豬免疫，并保障仔豬及時足量的吃到初乳，可使仔豬獲得足夠的母源抗體，降低豬PCV-2病毒參與引起的仔豬疾病癥候群。試驗針對3頭有基礎(chǔ)免疫抗體的經(jīng)產(chǎn)母豬做了PCV-2疫苗免疫探索和免疫檢測，結(jié)果表明，母豬在有基礎(chǔ)免疫抗體的情況下，配種前和產(chǎn)仔前2周～3周連續(xù)2次肌肉注射4 mL(2倍量)PCV-2滅活疫苗，母豬無明顯可見的臨床不良反應(yīng)，且母豬產(chǎn)仔后免疫抗體至斷奶后仍然較高。這不但保護了母豬自身安全，同時也能為仔豬在整個哺乳期獲得母源抗體提供了保證。

豬PCV-2是免疫抑制性病原，由PCV-2參與引起的疾病癥候群較為復(fù)雜，共同感染原較多，因此，在疫病控制中，確定發(fā)病豬場的共同感染原，采取針對性措施對控制病情至關(guān)重要。本試驗對共同免疫的3種重大動物疫病(豬瘟、豬高致病性繁殖與呼吸綜合征和O型口蹄疫)抗體進行了跟蹤監(jiān)測，結(jié)果PCV-2疫苗免疫對上述3種疫病疫苗免疫無明顯影響。但據(jù)潘艷等[8]報道，PCV-2陽性豬場影響豬瘟疫苗抗體產(chǎn)生。因此，在已經(jīng)感染PCV-2病毒和受威脅豬場，建立包括PCV-2在內(nèi)的綜合防控措施對疫病防控，對穩(wěn)定疫情，對控制疫病擴散具有重要的現(xiàn)實意義。

[1] 熊江林，周華林，王長義，等.鄂西北地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型抗體水平監(jiān)測[J].中國畜牧獸醫(yī),2008,35(9)：96-97.

[2] 葛 猛，楊 陽，蔣重合，等.豬圓環(huán)病毒2抗體水平的監(jiān)測及意義[J].湖南畜牧獸醫(yī),2009,3：8-10.

[3] 劉建波，張 輝，劉長明.豬圓環(huán)病毒的流行趨勢與防控對策[J].動物醫(yī)學進展，2014,35(1):111-115.

[4] Chae C.Postweaning multisystemic wasting syndrome:a review of aetiology,diagnosis and pathology [J].Vet J,2004,168 (1):41-49.

[5] Ha Y,Jung K,Kim J,et al.Outbreak of salmonellosis in pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome [J].Vet Rec,2005,156 (18):583-584.

[6] 李海超，王 娟，李一經(jīng)，等.八省份豬圓環(huán)病毒2型與豬細環(huán)病毒混合感染的調(diào)查[J].中國獸醫(yī)科技,2013,43(12):1313-1319.

[7] 翟寶庫，譚海東，張冠群.大慶市及周邊地區(qū)非免疫豬群豬圓環(huán)病毒感染情況調(diào)查[J].動物醫(yī)學進展,2017,38(1):119-124.

[8] 潘 艷，李 軍，禤雄標，等.豬瘟疫苗在豬圓環(huán)病毒2型陽性豬場的免疫效果觀察[J].動物醫(yī)學進展,2010,31(11):23-26.

EvaluationofPCV-2ComprehensiveImmuneandMaternalAntibodiesinSwine

ZHAI Bao-ku1,TAN Hai-dong1,ZHANG Guan-qun1,BAI Hui-xin2,WANG Lian-ying1, GUAN Xiang-hui1,SUN Xin1,WANG Jing-jing3

(1.DaqingCenterofAnimalDiseasePreventionandControl,Daqing,Heilongjiang,163311,China; 2.DaqingStationofAnimalHusbandryTechnologyExtending,Daqing,Heilongjiang,163311,China; 3.DaqingInstituteofAnimalHealthSupervision,Daqing,Heilongjiang,163311,China)

The porcine circovirus type-2 (PCV-2) participates in the cause of disease syndromes which are very complicated,vaccine immunization effect is affected by various factors.Now,a vaccine that would produce actual results or influence other vaccine immune effects is not yet clear.In order to solve this problem,we designed the tests consisted of three sows and four treatment groups of piglets based on the characteristics of the vaccine strain WH.The monitoring of immune antibody and maternal antibody changes is helpful to the evaluation of PCV-2 vaccine and immune effects of other vaccines (classical swine fever,highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome and type-O foot-and-mouth disease).The results showed that the piglets with one immunization cannot achieve the ideal immune effect,while effects of interval of 2 to 3 weeks to strengthen immunity were well,and protective antibody sustainability is more than 105 days.Twice immunization to sows before mating and birthing may keep higher maternal antibody levels in piglets after weaning when the age of 28 days.These results indicated that PCV-2 vaccine could not influence the immune effects of other three types of vaccines.

Porcine circovirus type 2; maternal antibody; immune method; effection; evaluation

2017-03-03

2014年黑龍江省級領(lǐng)軍人才梯隊后備帶頭人資助項目；大慶市指導(dǎo)性科技計劃項目(zd-2016-031)

翟寶庫(1965-)，男，黑龍江大慶人，高級獸醫(yī)師，本科，主要從事動物疫病預(yù)防與控制工作。

S852.659.2

A

1007-5038(2017)12-0039-05