劉亮亮，隋 峰

（1.山西職工醫(yī)學(xué)院，山西太原030600； 2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京100700）

大黃為廖科植物掌葉大黃、唐古特大黃和藥用大黃的干燥根及根莖，前兩種習(xí)稱“北大黃”，后一種習(xí)稱“南大黃”［1］。大黃性寒，味苦，善于瀉熱攻下，行瘀化積，臨床上主要用于實(shí)熱便秘、積滯腹痛、濕熱黃疸、熱毒瘡瘍以及瘀血［2］。前期我們以大黃炮制品粉末和75%乙醇提取物為研究對(duì)象進(jìn)行了藥理藥效學(xué)的研究，為進(jìn)一步深入研究，按照理化性質(zhì)的不同，采用不同的分離方法，將大黃各炮制品（包括生大黃、熟大黃、大黃炭）分別分成4個(gè)組分，其中，組分1主要包括鞣質(zhì)單體類成分，組分2主要包括結(jié)合鞣質(zhì)和少量苷類，組分3主要包括苷類成分（蒽醌苷及其他苷類），組分4主要成分為游離蒽醌。在此基礎(chǔ)上，以解熱為觀察指標(biāo)，探討3種大黃炮制品各組分的藥理學(xué)作用，并對(duì)各組分之間的藥效學(xué)進(jìn)行了比對(duì)分析研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥品與試劑 生大黃、熟大黃及大黃炭均由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院炮制實(shí)驗(yàn)室提供，經(jīng)鑒定為掌葉大黃。鮮酵母：河北馬利食品有限公司［許可證號(hào)：冀衛(wèi)食證字（2008）第002號(hào)］。

1.1.2 儀器與動(dòng)物 電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；MC-8歐姆龍電腦數(shù)字式體溫計(jì)。健康SD大鼠112只，體重150～170 g，雌雄各半，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供［實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK-（京）2005-004］，飼喂于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院基礎(chǔ)理論研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 酵母菌混懸液制備 取鮮酵母40 g置缽中，逐漸加入生理鹽水磨為均勻的懸漿，濃度為20%。酵母菌混懸液需臨用前配制。

1.2.2 藥品的制備 分別取生大黃、熟大黃、大黃炭飲片各2 kg，以75%乙醇提取，提取物以大孔樹脂D101分離，分別以水及不同濃度乙醇洗脫，收集各組分洗脫液，低溫減壓回收溶劑，得到大黃生、熟、炭飲片各4個(gè)組分供試品。

1.2.3 分組與給藥 全部動(dòng)物均在同等環(huán)境和條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后隨機(jī)分成14組，即空白組、模型組、生大黃組分1組、生大黃組分2組、生大黃組分3組、生大黃組分4組、熟大黃組分1組、熟大黃組分2組、熟大黃組分3組、熟大黃組分4組、大黃炭組分1組、大黃炭組分2組、大黃炭組分3組、大黃炭組分4組。

實(shí)驗(yàn)在室溫（22±2）℃，濕度40%左右的環(huán)境中進(jìn)行。雌雄大鼠均分籠飼養(yǎng)，喂飼全價(jià)顆粒飼料，自由飲水。正式實(shí)驗(yàn)前2 d在固定時(shí)間每天測(cè)量大鼠肛溫1次，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日再空腹測(cè)肛溫1次，選取平均體溫在（36.5～37.5）℃的大鼠用于實(shí)驗(yàn)。。禁食不禁水12 h。隨機(jī)分組后每只大鼠背部皮下注射20%酵母菌懸液15 mL/kg。造模1 h后，空白組和模型組大鼠灌胃蒸餾水2 mL/100 g，其他各組灌胃相應(yīng)的藥物（2 mL/100 g）。在給藥后的第1、2、4、6 h測(cè)體溫1次，計(jì)算各時(shí)刻每只大鼠相對(duì)于其正常體溫的體溫變化值［3］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 生大黃各組分對(duì)酵母菌致熱大鼠體溫的影響

結(jié)果見表1、圖1。模型組給藥1 h后，大鼠體溫有一定的升高，但與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給藥2 h后，體溫明顯升高，且與空白組比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01），表明發(fā)熱模型造模成功。與模型組比較，生大黃組分1在給藥后 1 h 作用顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；生大黃組分2和組分4在給藥后1、2、4、6 h與模型組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較作用顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）；生大黃組分 3 在給藥后 1、2、4 h 作用顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。

圖1 生大黃各組分對(duì)大鼠體溫的影響

2.2 熟大黃各組分對(duì)酵母菌致熱大鼠體溫的影響

表1 生大黃各組分對(duì)發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

表1 生大黃各組分對(duì)發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與模型組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01

組別 造模前體溫（℃） 給藥后不同時(shí)刻大鼠的體溫變化值（℃）1 h 2 h 4 h 6 h空白組 37.20±0.18 0.09±0.18 0.23±0.29 0.04±0.41 0.01±0.27模型組 37.15±0.26 0.31±0.27 0.83±0.342） 2.18±0.452） 2.18±0.352）生大黃組分 1 37.09±0.36 -0.40±0.474） 0.50±0.24 2.00±0.32 2.26±0.38生大黃組分 2 37.40±0.23 -1.08±0.704） -0.58±0.394） 0.91±0.574） 1.58±0.474）生大黃組分 3 37.50±0.13 -0.61±0.364） 0.01±0.314） 1.64±0.323） 1.86±0.37生大黃組分 4 37.49±0.29 -0.46±0.514） 0.08±0.464） 1.74±0.643） 1.75±0.593）n 劑量（g/kg）8 7 8 7 8 7 8 7 8 7 8 7

表2 熟大黃各組分對(duì)發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

表2 熟大黃各組分對(duì)發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

注：與模型組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 造模前體溫（℃） 給藥后不同時(shí)刻大鼠的體溫變化值（℃）1 h 2 h 4 h 6 h模型組 37.15±0.26 0.31±0.27 0.83±0.34 2.18±0.45 2.18±0.35熟大黃組分 1 37.05±0.19 0.20±0.191） 0.96±0.261） 2.31±0.24 2.26±0.23熟大黃組分 2 37.30±0.65 -0.35±0.432） 0.25±0.502） 1.63±0.551） 2.05±0.48熟大黃組分 3 37.44±0.13 -0.56±0.292） 0.13±0.312） 1.73±0.411） 2.04±0.25熟大黃組分 4 37.46±0.33 -0.59±0.562） 0.08±0.542） 1.65±0.461） 1.75±0.581）n 劑量（g/kg）8 7 8 7 8 7 8 7 8 7

表3 大黃炭各組分對(duì)發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

表3 大黃炭各組分對(duì)發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

注：與模型組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 造模前體溫（℃） 給藥后不同時(shí)刻大鼠的體溫變化值（℃）1 h 2 h 4 h 6 h模型組 37.15±0.26 0.31±0.27 0.83±0.34 2.18±0.45 2.18±0.35大黃炭組分 1 37.10±0.26 -0.44±0.422） 0.20±0.412） 1.85±0.29 2.36±0.31大黃炭組分 2 37.50±0.40 -0.50±0.362） 0.28±0.422） 1.84±0.44 1.88±0.34大黃炭組分 3 37.46±0.22 -0.34±0.392） 0.66±0.37 2.09±0.20 2.13±0.30大黃炭組分 4 37.43±0.28 -0.43±0.622） 0.33±0.481） 2.11±0.49 2.10±0.51 n 劑量（g/kg）8 7 8 7 8 7 8 7 8 7

圖2 熟大黃各組分對(duì)大鼠體溫的影響

結(jié)果見表2、圖2。與模型組比較，除熟大黃組分1在所有測(cè)試點(diǎn)均未見明顯的解熱作用（P＞0.05）；熟大黃組分2和組分3在給藥后1、2、4 h作用顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）；熟大黃組分4在給藥后1、2、4、6 h作用均顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。

2.3 大黃炭各組分對(duì)發(fā)熱大鼠體溫的影響

結(jié)果見表3、圖3。與模型組比較，大黃炭組分1、2、4在給藥后1、2 h作用顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）；大黃炭組分 3 在給藥后 1 h 作用顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖3 大黃炭各組分對(duì)大鼠體溫的影響

總之，各給藥組中，除熟大黃組分1在所有測(cè)試點(diǎn)均未見明顯的解熱作用（P＞0.05）外，其他各組給藥后在不同的時(shí)間點(diǎn)均表現(xiàn)出一定的解熱作用；給藥1 h后，大鼠體溫開始明顯下降，且有些組分一直持續(xù)到給藥后6 h。因此，確定在后期通過(guò)檢測(cè)大黃不同炮制品各組分給藥1 h后模型鼠下丘腦中PGE2和cAMP含量來(lái)了解大黃的解熱作用機(jī)制。

3 討論

大鼠皮下注射酵母菌混懸液是發(fā)熱動(dòng)物模型制備的經(jīng)典方法［4］，其發(fā)熱機(jī)制主要是通過(guò)全菌體及菌體內(nèi)所含的莢膜多糖和蛋白質(zhì)激活內(nèi)源性致熱源（EP）細(xì)胞產(chǎn)生和釋放內(nèi)生性致熱源所致。本實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠注射酵母菌1 h后，大鼠體溫有一定的升高，但與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。注射酵母菌2 h后，體溫明顯升高，與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05 或 P＜0.01），表明發(fā)熱模型造模成功。大黃炮制品各組分中，除熟大黃組分1在所有測(cè)試點(diǎn)均未見明顯的解熱作用（P＞0.05）外，其他各組給藥后在不同的時(shí)間點(diǎn)均表現(xiàn)出一定的解熱作用。特別是給藥1 h后，大鼠體溫開始明顯下降，且有些組分一直持續(xù)到給藥后6 h。

綜合來(lái)看，中藥大黃的解熱作用基本上在各組分中均表現(xiàn)明顯，尤其是生大黃組分2、生大黃組分4、熟大黃組分4，在所測(cè)試的所有時(shí)間點(diǎn)均具有顯著的下調(diào)發(fā)熱大鼠機(jī)體溫度的作用。從所測(cè)試時(shí)間點(diǎn)的總體趨勢(shì)來(lái)看，給藥后1 h解熱作用最強(qiáng)，給藥后2、4、6 h各時(shí)間點(diǎn)依次遞減。后期研究發(fā)現(xiàn)大黃不同炮制品各組分解熱作用機(jī)制可能與抑制大鼠下丘腦中PGE2和cAMP含量的升高有關(guān)，具體生物學(xué)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。