王留國，趙喜蓮，田 靖，劉學(xué)威

(天方藥業(yè)有限公司，河南 駐馬店 463000)

雙氯芬酸鈉含量的HPLC測(cè)定法

王留國，趙喜蓮，田 靖，劉學(xué)威

(天方藥業(yè)有限公司，河南 駐馬店 463000)

目的 建立HPLC法測(cè)定雙氯芬酸鈉原料的含量。方法 色譜柱：C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-4%冰醋酸溶液(70：30)；檢測(cè)波長276nm；柱溫：30℃。結(jié)果 雙氯芬酸鈉在20～300μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)，最小檢出量為0.19μg，平均回收率為98.66%，RSD為0.87%。結(jié)論 本方法簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、專屬性好、重復(fù)性好，可用于雙氯芬酸鈉原料的含量測(cè)定。

雙氯芬酸鈉；高效液相色譜法；含量測(cè)定

目前，雙氯芬酸鈉原料主要用于生產(chǎn)雙氯芬酸鈉腸溶片、雙氯芬酸鈉栓、雙氯芬酸鈉搽劑和滴眼液等，用于解熱鎮(zhèn)痛、非甾體抗炎藥[1]。在《中國藥典》2015年版二部中采用電位滴定的方法進(jìn)行含量檢測(cè)。本研究在參考《中國藥典》2015年版二部和相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上[2-4]，采用高效液相色譜法檢查雙氯芬酸鈉的含量。方法具有專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確可靠等特點(diǎn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫1260型高效液相色譜儀(安捷倫化學(xué)工作站、可變波長紫外檢測(cè)器)；Mettler Toledo MS204S 電子天平。

1.2 試劑

雙氯芬酸鈉對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院 批號(hào)100334-200302)，雙氯芬酸鈉樣品(寧波斯邁克藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為DOSR-1703031、DOSR-1705011、DOSR-1707016)、甲醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，色譜純)，冰醋酸(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純)，水為高純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為安捷倫C18(4.6mm×250mm，5μm)；以甲醇-4%冰醋酸溶液(70：30)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長：276nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃。雙氯芬酸鈉對(duì)照峰的理論板數(shù)為7965，主峰與雜質(zhì)分離良好，分離度為2.5，拖尾因子小于1.5。色譜圖見圖1。

圖1 雙氯芬酸鈉色譜圖

2.2 溶液的配制

對(duì)照溶液的配制

雙氯芬酸鈉對(duì)照溶液；精密稱取雙氯芬酸鈉對(duì)照品20mg，置50mL量瓶中，加70%甲醇溶解，稀釋至刻度；取10mL,置20mL量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度。

供試品溶液的配制

雙氯芬酸鈉供試品溶液；精密稱取雙氯芬酸鈉20mg，置50mL量瓶中，加70%甲醇溶解，稀釋至刻度；取10mL,置20mL量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度。

2.3 線性關(guān)系考察

取雙氯芬酸鈉對(duì)照品適量，精密稱定，加70%甲醇溶解并分別制成濃度為0.30、0.25、0.20、0.10、0.05和0.02mg/mL的溶液。精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積，以雙氯芬酸鈉的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以雙氯芬酸鈉的量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=5.0647×103X-2.2667 r=0.9999表明雙氯芬酸鈉在20～300μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取雙氯芬酸鈉對(duì)照品溶液10μL，在上述的色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，所得峰面積的平均值4082.5，RSD為0.2%。表明本方法測(cè)定雙氯芬酸鈉含量精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取雙氯芬酸鈉樣品6份(批號(hào)：DOSR-1703031)，按上述方法分析，計(jì)算雙氯芬酸鈉的平均含量為99.6%，RSD為0.3%，表明本方法測(cè)定雙氯芬酸鈉含量重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取雙氯芬酸鈉對(duì)照品溶液10μL，分別于0、1、2、4、6、8、12h，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，所得峰面積的平均值為4078.9，RSD為0.3%。表明雙氯芬酸鈉對(duì)照品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 定量限試驗(yàn)

精密稱取雙氯芬酸鈉對(duì)照品，加70%甲醇制成0.25mg·mL-1的溶液。精密吸取該溶液10μL，注入液相色譜儀中，按S/N=10計(jì)算，雙氯芬酸鈉定量限約為0.19μg(n=3)。

2.7 回收率試驗(yàn)

取雙氯芬酸鈉對(duì)照品適量、精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的配制方法操作，制成低、中、高三種濃度(相當(dāng)于供試品溶液濃度的80%、100%和120%)的樣品溶液，每個(gè)濃度3份，共9份。按照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法，進(jìn)樣10μL，計(jì)算回收率，平均回收率為98.66%，RSD為0.87%(n=9)。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表1(續(xù))

2.8 含量測(cè)定

取本品，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液及對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定。采用外標(biāo)法計(jì)算雙氯芬酸鈉的含量，結(jié)果見表2。

表2 雙氯芬酸鈉含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 吸收波長選擇

使用DAD檢測(cè)器對(duì)雙氯芬酸鈉對(duì)照溶液進(jìn)行光譜掃描，在276nm波長處有最大吸收，參考有關(guān)文獻(xiàn)，確定雙氯芬酸鈉的測(cè)定波長為276nm。

3.2 流動(dòng)相的選擇

分別比較《中國藥典》2015年版雙氯芬酸鈉有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的流動(dòng)相甲醇-4%冰醋酸溶液(65：35)和本試驗(yàn)流動(dòng)相以甲醇-4%冰醋酸溶液(70：30)，結(jié)果顯示，在后者色譜圖中測(cè)定成分峰形良好、且目標(biāo)色譜峰干擾峰分離度好，保留時(shí)間適中，均可達(dá)基線分離，可作為該原料HPLC含量測(cè)定方法的流動(dòng)相。

3.3 耐用性試驗(yàn)考察

分別采用不同品牌色譜柱：(1)Agilent C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；(2)Zorbax SB C18(4.6mm×250mm，5μm)；(3)SUNTEK C18(4.6mm×250mm，5μm)進(jìn)行試驗(yàn)，三者色譜峰形均分離良好，含量測(cè)定結(jié)果基本一致，表明該方法耐用性良好，比較擇優(yōu)后選擇Agilent C18柱作為系統(tǒng)條件色譜柱。

[1] 中國藥典委員會(huì).中國藥典二部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：99-102.

[2] 張媛媛，馬雯雯.HPLC法測(cè)定雙氯芬酸鈉滴眼液中苯扎氯銨的含量[J].黑龍江科技信息2010(11)：181-182.

[3] 楊 直，林麗琴，吳好好.膠束毛細(xì)管電泳同時(shí)測(cè)定雙氯芬酸鈉注射液的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜志，2013(2)：312-316.

[4] 劉福艷，李 軍，謝元超，等.中成藥中非添加化學(xué)藥品的現(xiàn)狀與分析檢測(cè)對(duì)策[J].中國藥事，2008，22(12)：1067-1069.

DeterminationofDiclofenacSodiumbyHPLC

WangLiuguo,ZhaoXilian,TianJing,LiuXuewei

( Henan Topfond Pharmaceutical Co., Ltd.，Zhumadian 463000,China)

Objective to develop an HPLC method for the Determination of Diclofenac Sodium.Methods C18 column(4.6mm×250mm，5μm)was adopted with Methanol-4% Aceticacid (70:30) as the mobile phase. The detection wavelength was 276 nm and the column temperature was set at 30℃. Results Within the range from 20μg to 300μg (r=0.9999),diclofenac sodium presented a good relationship between the injected amounts and peak areas, with the minimum detectable amount of 0.19ug. The average recovery was 98.66%, with the RSD of 0.87%. Conclusion The method is simple, rapid, accurate, sensitive and reproducible. It can be used for the contents determination of diclofenan sodium.

diclofenan sodium;HPLC determination;contents determination

2017-09-27

王留國(1984—)，河南駐馬店人，工程師，主要從事質(zhì)量管理與研究。

O657.7+2

A

1008-021X(2017)22-0074-01

(本文文獻(xiàn)格式：王留國，趙喜蓮，田靖，等.雙氯芬酸鈉含量的HPLC測(cè)定法[J].山東化工，2017，46(22)：74,76.)