許曉君

(荊州市第三人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 荊州 434000)

[引著格式]許曉君. 高效液相色譜法測定丹參注射液中丹酚酸B含量[J].長江大學(xué)學(xué)報(自科版), 2017,14(24):4～6.

高效液相色譜法測定丹參注射液中丹酚酸B含量

許曉君

(荊州市第三人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 荊州 434000)

目的：通過高效液相色譜法(HPLC)測定丹參注射液中丹酚酸B的含量，為其質(zhì)量控制提供可靠方法依據(jù)。方法：丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)溶液作為外標(biāo)溶液，采用高效液相色譜法測定丹酚酸B的含量。結(jié)果：丹酚酸B在0.0986～0.9860mg/mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好線性關(guān)系。結(jié)論：高效液相色譜法測定丹參注射液中丹酚酸B的含量，范圍廣、分辨率高、數(shù)據(jù)處理速度快、結(jié)果準(zhǔn)確、誤差小，可作為測定丹參注射液水溶性成分質(zhì)量的方法。

丹酚酸B；高效液相色譜法(HPLC)；含量測定

丹參是一種傳統(tǒng)的中藥，祛瘀活血，清心通絡(luò)，是我國中醫(yī)胸痹心痛辨證治療中的常用藥物[1]。藥效學(xué)研究結(jié)果表明:丹參水溶性成分和脂溶性成分均有明顯的心血管活性，對缺血心肌有保護(hù)作用[2]。丹參的有效成分主要是丹酚酸類和丹參酮兩大類有機(jī)物，丹參酸屬于水溶性組分，丹參酮屬于脂溶性組分[3],前者以抗氧化、抗凝血和細(xì)胞保護(hù)作用為主，而丹參酮類化合物以改善血液循環(huán)[4]、抗菌和抗炎作用為主[5]，并具有顯著的抗菌和適度的性激素樣作用[6]。丹參水溶性酚酸類成分中主是要丹參素、丹酚酸B等是主要起藥物療效的物質(zhì)[7]。許多研究文獻(xiàn)在評測丹參類注射液的質(zhì)量控制指標(biāo)成分時，僅以丹參素和原兒茶醛作為指標(biāo), 是不足以全面反映該制劑臨床療效的，也應(yīng)對丹參酚的含量進(jìn)行測評。故本實驗采用反相高效液相色譜法(HPLC)對丹參注射液中的丹酚酸B進(jìn)行含量測定，并對該實驗的方法進(jìn)行考察，使該丹參類注射液的質(zhì)量控制指標(biāo)成分評價指標(biāo)體系具有科學(xué)意義。

1 材料與方法

1.1 儀器

紫外可見分光光度計(日本島津UV-240型)；高效液相色譜儀(島津LC10AT)；紫外檢測器(PDA-100)；色譜工作站(浙大N2000)；色譜柱(島津C18色譜柱diamonsil@(鉆石)C18, 250mmx4．6mm，5μm)；100μL微量進(jìn)樣器 (上海高鴿)；電子分析天平(OHAUS CP114 )0.45μm微孔濾膜。

1.2 藥品及試劑

樣品：丹參注射液(四川宜賓制藥廠 10mL/支 批號100206)；對照品：丹酚酸B對照品(20mg/支批號111562-201514)；對照品均購自中國食品藥品檢定研究所，供含量測定用；甲醇(色譜純)，水為屈臣氏蒸餾水，其它試劑均為分析純。

1.3 對照品和供試品的制備

精密稱取對照品，加70%甲醇溶液制成含丹酚酸B 0.986mg/mL的溶液對照品溶液，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾即得。取適量丹參注射液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾即得供試品。

1.4 檢測波長的選擇

以水為空白溶液，分別取丹酚酸B對照品溶液，在200～400nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，最大吸收波長為282.8、280.4、286.8nm，比較丹參注射液在不同檢測波長下的色譜圖, 確定樣品測定波長為282nm。

1.5 HPLC色譜條件

色譜柱：選擇C18反相色譜柱；流動相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；檢測波長：282nm；流速：0.8mL/min；洗脫時間：約40min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。

1.6 方法學(xué)考察

丹酚酸B對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入高效液相儀，記錄色譜圖。由保留時間確定各物質(zhì)相應(yīng)的色譜峰，確定參照峰。

精密量取1、2、4、6、8、10mL混合對照品溶液分別置于10mL量瓶中，加70%甲醇至刻度稀釋搖勻，在波長：282nm；流速：0.8mL/min；洗脫時間：約40min；柱溫：室溫條件下分別進(jìn)樣10μL，分別記錄色譜圖、峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察結(jié)果

取丹酚酸B對照品溶液10μL，注入高效液相儀，記錄色譜圖，結(jié)果如圖1、2所示。從圖中可以看出丹酚酸B對照品色譜峰的保留時間tR約為36min，可以確定峰3-為丹酚酸B。另兩峰為已知成分為丹參素鈉、原兒茶醛。

圖1 丹酚酸B對照品HPLC色譜圖 圖2 丹參注射液HPLC色譜圖

2.2 線性關(guān)系

將稀釋后的對照品取10μL進(jìn)樣，以峰面積為橫坐標(biāo)，對照品溶液的量(μg)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求回歸方程，丹酚酸B在0.0986～0.9860mg/mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好線性關(guān)系。結(jié)果見表1、圖3。

表1 丹酚酸B線性關(guān)系考察數(shù)據(jù)表

圖3 丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3 加樣回收率試驗結(jié)果

按已確定的色譜條件，測定峰面積，采用外標(biāo)法求出丹酚酸B的含量，并計算回收率，所測得的回收率為均在95%～105%之內(nèi)，符合方法學(xué)考察要求。見表2。

3 討論

本實驗采用HPLC法測定丹參注射液中丹酚酸B水溶性成分含量, 使丹參類注射液的質(zhì)量控制指標(biāo)成分評價指標(biāo)體系具有科學(xué)意義。

由于溫度和pH對丹參注射液中水溶性有效成分丹酚酸B的回收率影響比較大，而現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)制備工藝中沒有明確規(guī)定在水沉醇沉?xí)r的溫度，因此在開展實驗前要對丹參注射液進(jìn)行必要的優(yōu)化。丹參注射液生產(chǎn)廠家眾多，市面上生產(chǎn)丹參注射的廠家眾多，有香丹注射液、丹紅注射(滴注)液、丹參多酚酸鹽、注射用丹參(凍干)等多種品種。不同廠家的丹參注射液由于生產(chǎn)工藝有所不同，還有使用的原料也不盡相同，導(dǎo)致其質(zhì)量可能存在較大差異。因此必須嚴(yán)格控制丹參的原藥材來源的單一性，最終才能保證產(chǎn)品的療效和質(zhì)量的可靠、均一性。丹參水溶性成分主要是酚酸類化合物[8], 與丹參藥材相比，丹參注射液的化學(xué)成分研究比較薄弱，廠家評測丹參注射液時僅僅評測丹參素和原兒茶醛來評估注射液的效果是不科學(xué)的，難以保證其臨床使用的安全性和有效性，制約了其長期的健康發(fā)展。針對目前這一的狀況，可采用高效液相色譜法方法對丹參制劑中的系列化學(xué)成分進(jìn)行進(jìn)一步的測定，重點對其酚酸類活性如丹酚酸B，進(jìn)行定量的研究，對藥品質(zhì)量工藝控制，保障病人用藥安全都具有深遠(yuǎn)的意義。

表2 丹酚酸B回收率測定結(jié)果

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2017-04-28

許曉君(1965-)，女，主管護(hù)師，主要從事臨床護(hù)理工作，409720909@qq.com。

R285.5；R927.2

A

1673-1409(2017)24-0004-03

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