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        右歸丸“陰中求陽(yáng)”配伍對(duì)腎陽(yáng)虛大鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸的作用

        2017-12-20 09:38:20劉浩龍王家典盧鋆翟鵬云趙暉李明王蕾
        環(huán)球中醫(yī)藥 2017年9期
        關(guān)鍵詞:右歸丸方組腎陽(yáng)虛

        劉浩龍 王家典 盧鋆 翟鵬云 趙暉 李明 王蕾

        ·論著·

        右歸丸“陰中求陽(yáng)”配伍對(duì)腎陽(yáng)虛大鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸的作用

        劉浩龍 王家典 盧鋆 翟鵬云 趙暉 李明 王蕾

        目的探究右歸丸及其拆方滋陰和補(bǔ)陽(yáng)對(duì)腎陽(yáng)虛大鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸的調(diào)節(jié)作用,闡釋右歸丸“陰中求陽(yáng)”理論的科學(xué)內(nèi)涵。方法將30只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、右歸丸組、滋陰方組和補(bǔ)陽(yáng)方組5組,每組6只。采用肌肉注射氫化可的松注射液的方法建立大鼠腎陽(yáng)虛模型。觀察各組大鼠體重、胸腺、腎上腺和脾重量變化;采用放免法測(cè)定各組大鼠下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin releasing hormone,CRH),血清促腎上腺皮質(zhì)激素(adreno cortico hormones,ACTH)和皮質(zhì)酮(Corticosterone,Cort)含量。結(jié)果右歸丸及其拆方對(duì)腎陽(yáng)虛大鼠的體重、胸腺、腎上腺和脾重量有不同程度的改善作用,并且對(duì)大鼠下丘腦CRH、血清ACTH和Cort的含量也有調(diào)節(jié)作用,而右歸丸在調(diào)節(jié)CRH和Cort方面的作用優(yōu)于滋陰方。結(jié)論右歸丸及其拆方均具有改善腎陽(yáng)虛大鼠的作用,可能與調(diào)節(jié)腎陽(yáng)虛大鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸有關(guān)。右歸丸治療作用優(yōu)于滋陰方或補(bǔ)陽(yáng)方。

        右歸丸及其拆方; 腎陽(yáng)虛大鼠; 下丘腦-垂體-腎上腺軸

        近年來(lái)研究表明,下丘腦-垂體-腎上腺軸功能紊亂與腎陽(yáng)虛證有密切關(guān)系[1]。具有補(bǔ)腎功效的單味中藥或復(fù)方對(duì)于腎陽(yáng)虛證的治療作用主要是通過改善受損的下丘腦-垂體-靶腺軸而實(shí)現(xiàn)的[2],包括腎上腺軸、甲狀腺軸和性腺軸的作用[3-5]。右歸丸出自于明代張景岳所著《景岳全書》,主治腎陽(yáng)不足、命門火衰,方中既有溫補(bǔ)腎陽(yáng)的附子、肉桂和補(bǔ)陽(yáng)益精之鹿角膠、菟絲子等,又配伍滋陰補(bǔ)腎、填精益髓之熟地黃、山藥、山茱萸、枸杞子等,諸藥合用,則“陽(yáng)得陰助,生化無(wú)窮”,體現(xiàn)“陰中求陽(yáng)”“精中生氣”之方劑配伍特色。

        本研究采用傳統(tǒng)的腎陽(yáng)虛模型建立方法,于大鼠后肢肌肉注射氫化可的松建立腎陽(yáng)虛模型[6]。根據(jù)右歸丸“陰中求陽(yáng)”的組方思路,將右歸丸拆分為滋陰方(熟地黃、山藥、山茱萸、枸杞子、當(dāng)歸)和補(bǔ)陽(yáng)方(附子、肉桂、杜仲、菟絲子、鹿角膠)。實(shí)驗(yàn)過程中觀察大鼠精神、毛色等一般情況及大鼠體重、胸腺重量、腎上腺重量和脾臟重量,并采用放射免疫分析法(以下簡(jiǎn)稱放免法)測(cè)定各組大鼠下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、血清促腎上腺皮質(zhì)激素(adreno cortico hormones,ACTH)和皮質(zhì)酮(corticosterone,Cort)含量的變化。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雄性Wistar大鼠30只,8周齡,購(gòu)自于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,許可證號(hào):SCXK(京)2012-0001。飼養(yǎng)于首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證號(hào):SCXK(京)2010-0020。實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)后執(zhí)行。

        1.1.2 藥品與試劑 右歸丸中的藥物由北京市同仁堂有限責(zé)任公司提供,參考《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)[7]右歸丸的制法,簡(jiǎn)要步驟如下:熟地黃240 g、炮附子60 g、肉桂60 g、山藥120 g、酒山茱萸90 g、菟絲子120 g、鹿角膠120 g、枸杞子120 g、當(dāng)歸90 g、鹽杜仲120 g,以上十味,除鹿角膠外,熟地黃等九味粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻。鹿角膠加白酒燉化,混勻即得。滋陰方和補(bǔ)陽(yáng)方的制備方法同上。氫化可的松注射液購(gòu)自于國(guó)藥集團(tuán)容生制藥有限公司,批號(hào)1601201;CRH、ACTH和Cort放免試劑盒均由北京華英生物技術(shù)研究所提供。

        1.2 方法

        1.2.1 動(dòng)物分組 8周齡雄性Wistar大鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,隨機(jī)分為5組,分別為正常組、模型組、右歸丸組、滋陰方組、補(bǔ)陽(yáng)方組,每組6只。

        1.2.2 動(dòng)物模型制備與藥物處理 模型組和各治療組大鼠每日兩后肢交替肌注氫化可的松(25 mg/kg),連續(xù)注射14天,制備腎陽(yáng)虛模型[5]。正常組大鼠肌注等體積生理鹽水。將各組藥物以0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸液。右歸丸組于造模后第1天灌胃給予大鼠右歸丸混懸液(1.8 g/kg);滋陰組給予滋陰方混懸液(1.0 g/kg);補(bǔ)陽(yáng)組給予補(bǔ)陽(yáng)方混懸液(0.8 g/kg)。各治療組連續(xù)給藥4周,正常組和模型組給予等量的羧甲基纖維素鈉溶液。

        1.2.3 樣本收集與處理 每日觀察一般情況,記錄大鼠體重、體態(tài)、皮毛光澤度、豎毛情況、是否畏寒扎堆。給藥4周后,以40 mg/kg劑量對(duì)各組大鼠腹腔注射0.1%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉,麻醉后腹主動(dòng)脈取血,以3000 r/min于4℃離心分離血清,用于測(cè)定各組大鼠血清中ACTH、Cort含量;取各組大鼠下丘腦,用于測(cè)定CRH含量,取胸腺、腎上腺、脾臟等稱重。

        2 結(jié)果

        2.1 一般情況的比較

        與正常組比較,造模后模型組大鼠出現(xiàn)精神差,自主活動(dòng)減少,畏寒扎堆,皮毛光澤差,豎毛等現(xiàn)象。與模型組大鼠相比,各治療組大鼠自主活動(dòng)增多,無(wú)扎堆現(xiàn)象,皮毛光澤稍好,豎毛現(xiàn)象少。模型組大鼠的體重、胸腺和腎上腺重量均低于正常組,且具有顯著性差異(P<0.01),而脾重量明顯高于正常組(P<0.01)。右歸丸及其拆方滋陰方和補(bǔ)陽(yáng)方組大鼠的體重均明顯升高,與模型組比較,具有顯著性差異(P<0.01)。右歸丸及其拆方組大鼠的胸腺重量較模型組升高,但只有補(bǔ)陽(yáng)方組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。右歸丸組大鼠的腎上腺重量較模型組明顯升高(P<0.01)。另外,右歸丸及其拆方組大鼠的脾重量較模型組均明顯降低(P<0.05)。見表1。

        表1 各組大鼠體重、胸腺重量、腎上腺重量、脾臟重量測(cè)定結(jié)果

        注: 與正常組比較,aP<0.01;與模型組比較,bP<0.05,cP<0.01。

        2.2 各組大鼠下丘腦CRH及血清ACTH、Cort含量比較

        本實(shí)驗(yàn)采用放免法測(cè)定了下丘腦CRH及血清ACTH、Cort含量,模型組大鼠下丘腦CRH及血清ACTH均明顯高于正常組(P<0.01),而血清Cort顯著低于正常組(P<0.05)。與模型組相比,右歸丸及其拆方組大鼠下丘腦CRH含量均明顯低于模型組(P<0.05),滋陰方組CRH明顯高于右歸丸組(P<0.05);右歸丸和滋陰方組大鼠血清ACTH與模型組比較沒有明顯變化,而補(bǔ)陽(yáng)方組ACTH顯著升高,與模型組、右歸丸及滋陰方組比較,具有明顯差異(P<0.01);右歸丸及其拆方組大鼠血清Cort含量明顯高于模型組(P<0.01),而滋陰方組Cort含量明顯低于右歸丸組(P<0.05)。結(jié)果見表2。

        表2 各組大鼠下丘腦內(nèi)CRH、血清ACTH及Cort的含量

        注: 與正常組比較,aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01;與右歸丸組比較,eP<0.05,fP<0.01;與滋陰方組比較,gP<0.01。

        3 討論

        用氫化可的松建立腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型是傳統(tǒng)的造模方法,該模型通過對(duì)大鼠注射一定量的外源性糖皮質(zhì)激素,從而使腎上腺皮質(zhì)的類固醇分泌減少,動(dòng)物則出現(xiàn)一系列耗竭現(xiàn)象[8]。目前研究顯示,大鼠與小鼠均可采用連續(xù)多日后肢肌肉注射25 mg/kg氫化可的松注射液的方法造成腎陽(yáng)虛模型[5-6]。本實(shí)驗(yàn)中,每日注射氫化可的松后,模型組大鼠逐漸出現(xiàn)畏寒喜暖、精神萎頓、體毛枯萎、消瘦等癥狀,并且其體重、胸腺和腎上腺重量明顯下降,脾重量明顯增加,并存在下丘腦-垂體-腎上腺軸功能的失調(diào),與文獻(xiàn)所描述腎陽(yáng)虛證相符?,F(xiàn)代研究顯示,右歸丸對(duì)下丘腦-垂體-靶腺軸具有調(diào)控作用,如右歸丸能夠明顯升高腎陽(yáng)虛大鼠的三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸、睪酮、ACTH、Cort的含量[4],但對(duì)右歸丸的拆方研究較少。

        右歸丸符合“陰中求陽(yáng)”的配伍理論,是基于陰陽(yáng)互根、陰陽(yáng)互生等理論用來(lái)治療腎陽(yáng)虛的補(bǔ)益法,即治療陽(yáng)虛證時(shí)配伍滋陰藥,達(dá)到“陰陽(yáng)相濟(jì)之妙”[9-10]。本實(shí)驗(yàn)依“陰中求陽(yáng)”理論,將右歸丸拆方為滋陰方與補(bǔ)陽(yáng)方探討其治療效果,以闡釋“陰中求陽(yáng)”配伍理論的部分科學(xué)內(nèi)涵。

        經(jīng)右歸丸治療后,右歸丸及其兩組拆方均能顯著增加大鼠降低的體重,對(duì)抗腎陽(yáng)虛所致大鼠胸腺和腎上腺萎縮,補(bǔ)陽(yáng)方改善胸腺的作用明顯,而右歸丸對(duì)腎上腺萎縮有明顯緩解作用。另外,右歸丸及其拆方均能降低腎陽(yáng)虛大鼠增加的脾重量。以上結(jié)果表明,右歸丸及其拆方可以緩解長(zhǎng)期注射糖皮質(zhì)激素所造成的免疫抑制現(xiàn)象,從而對(duì)腎陽(yáng)虛大鼠具有明顯的改善作用。

        研究發(fā)現(xiàn),分泌CRH的神經(jīng)元主要分布在下丘腦室旁核,下丘腦CRH以脈沖式釋放,激發(fā)垂體釋放ACTH,又使腎上腺皮質(zhì)分泌Cort而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),腎陽(yáng)虛大鼠的HPA軸功能出現(xiàn)失調(diào),表現(xiàn)為下丘腦CRH和血清ACTH含量明顯升高,血清Cort含量明顯下降。經(jīng)過右歸丸及其拆方治療后,上述指標(biāo)得到明顯的改善,表明各治療方可以調(diào)節(jié)腎陽(yáng)虛大鼠HPA軸負(fù)反饋引起的CRH、ACTH和Cort的分泌的異常變化,從而緩解大鼠的腎陽(yáng)虛癥狀,并且右歸丸全方在調(diào)節(jié)CRH和Cort方面的作用優(yōu)于滋陰方。以上結(jié)果部分闡釋了右歸丸“陰中求陽(yáng)”配伍的科學(xué)內(nèi)涵,也為本方臨床治療腎陽(yáng)虛疾病提供了部分依據(jù),但其深入的作用及其配伍機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

        [1] 沈自尹,王文健,俞瑾.腎本質(zhì)理論研究與臨床應(yīng)用[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2006,26(1):94-95.

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        [3] 陳李圳,王秀鳳,馬娜,等.右歸丸對(duì)腎陽(yáng)虛大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸的動(dòng)態(tài)影響[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2016,32(6):771-774.

        [4] 張磊,廖成彬,黃榕波,等.右歸丸調(diào)節(jié)腎陽(yáng)虛垂體-靶腺軸功能的動(dòng)態(tài)變化[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2016,32(1):102-106.

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        [7] 國(guó)家藥典委員會(huì).《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:767.

        [8] 黃厚才,彭蘊(yùn)茹,沈明勤.金匱腎氣丸對(duì)大鼠腎陽(yáng)虛模型的影響[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2004,14(3):155-157.

        [9] 王建紅,胡翊健,羅來(lái)成,等.復(fù)雜系統(tǒng)理論思路設(shè)計(jì)腎氣丸右歸丸右歸飲3首補(bǔ)腎陽(yáng)類方配伍規(guī)律研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2011,22(1):13-14.

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        EffectofcompatibilityofreinforcingyangfromyinofYouguipillonhypothalamic-pituitary-adrenalaxisinratswithkidney-yangdeficiency

        LIUHaolong,WANGJiadian,LUYun,etal.

        SchoolofTraditionalChineseMedicine,BeijingKeyLabofTCMCollateralDiseaseTheoryResearch,CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China

        WANGLei,E-mail:tmwangl@ccmu.edu.cn

        ObjectivesTo study the effect ofYouguipill (YGP) and its disassembled formulas of nourishingyin(NY) and tonifyingyang(TY) on regulation of hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis in rats with kidney-yangdeficiency and illuminate the scientific meaning of reinforcingyangfromyin.MethodsThe 30 Wistar male rats were randomly divided into 5 groups: normal group, model group (MO), YGP group, NY group and TY group, 6 rats in each group. The kidney-yangdeficiency rat model was induced by intramuscular injection with hydrocortisone. The changes of weight, thymus gland, adrenal gland and spleen were observed. The corticotropin releasing hormone (CRH) in hypothalamus, corticosterone (Cort) and adrenocorticotropic hormone (ACTH) in serum were detected by radioimmunoassay.ResultsThe weight of rat, thymus gland, adrenal gland and spleen were improved by YGP and its disassembled formulas. The contents of CRH, ACTH and Cort were regulated by the above formulas. And the effect of YGP in the regulation of CRH and Cort was better than that of BY formula.ConclusionYGP and its disassembled formulas could improve the function of HPA axis in rats with kidney-yangdeficiency. It might be related to the regulation of HPA axis. Therapeutical effect of YGP is better than the BY formula or TY formulas.

        Youguipill and its disassembled formulas; Rats with kidney-yangdeficiency; HPA axis

        北京市自然科學(xué)基金(7132031);北京市屬高等學(xué)校高層次人才引進(jìn)與培養(yǎng)計(jì)劃—長(zhǎng)城學(xué)者項(xiàng)目(CIT&TCD20140329)

        100069 北京,首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院 中醫(yī)絡(luò)病研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室[劉浩龍(博士研究生)、王家典(本科生)、盧鋆(本科生)、翟鵬云(本科生)、趙暉、李明、王蕾]

        劉浩龍(1988- ),2014級(jí)在讀博士研究生。研究方向:天然藥物學(xué)。E-mail: 793146134@qq.com

        王蕾(1967- ),女,博士,教授,博士生導(dǎo)師。研究方向:中醫(yī)藥防治腦病研究。E-mail:tmwangl@ccmu.edu.cn

        R285.5

        A

        10.3969/j.issn.1674-1749.2017.09.004

        2016-11-04)

        (本文編輯: 禹佳)

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