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        15—LOX—1 對LPS作用下肺動脈內(nèi)皮細胞增殖和炎性因子的影響

        2017-12-19 22:35:00劉曄邢文婧李思佳
        中國醫(yī)藥導報 2017年31期

        劉曄+邢文婧+李思佳

        [摘要] 目的 探討下調(diào)15-脂氧酶-1(15-LOX-1)對脂多糖(LPS)作用下肺動脈內(nèi)皮細胞(PAECs)和炎性因子分泌的影響。 方法 體外培養(yǎng)PAECs,并隨機分為4組:對照組、LPS組、15-LOX-1 siRNA對照組(scramble組)和15-LOX-1 siRNA組。采用Real-time PCR檢測15-LOX-1表達,MTT法檢測PAECs增殖變化,ELISA法檢測產(chǎn)物13-HODE以及炎性因子白細胞介素1α(IL-1α)和白細胞介素6(IL-6)的變化。 結(jié)果 與LPS組比較,15-LOX-1 siRNA組15-LOX-1 mRNA表達降低,PAECs增殖增多,13-HODE、IL-1α和IL-6分泌減少,差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05)。 結(jié)論 下調(diào)15-LOX-1可抑制炎性因子分泌,促進PAEC增殖,改善LPS對內(nèi)皮的損傷。

        [關(guān)鍵詞] 肺動脈內(nèi)皮細胞;15-脂氧酶-1;脂多糖;炎性因子

        [中圖分類號] R563.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210(2017)11(a)-0024-03

        The effect of 15-LOX-1 on proliferation of pulmonary arterial endothelial cells and inflammatory cytokines by LPS

        LIU Ye XING Wenjing LI Sijia

        Department of Immunology, Harbin Medical University, Heilongjiang Province, Harbin 150081, China

        [Abstract] Objective To explore the effect of 15-LOX-1 on proliferation of pulmonary arterial endothelial cells (PAECs) and inflammatory cytokines by LPS. Methods PAECs were cultured in vitro, and divided into 4 groups, including control group, LPS group, 15-LOX-1 siRNA scramble group (scramble group) and 15-LOX-1 siRNA group. The expression of 15-LOX-1 mRNA was detected by Real-time PCR. The proliferation of PAECs was examined by MTT. The expressions of 13-HODE, IL-1α and IL-6 were detected by ELISA. Results In the 15-LOX-1 siRNA group, the expression of 15-LOX-1 mRNA was reduced, the proliferation of PAECs was increased, and the secretions of 13-HODE, IL-1α and IL-6 were reduced compared with the LPS group with statistically significant difference (P < 0.05)Conclusion Down-regulation of 15-LOX-1 can inhibit inflammatory cytokines, regulate PAECs proliferation, and improve endothelial injury induced by LPS.

        [Key words] Pulmonary arterial endothelial cells; 15-lipoxygenase-1; Lipopolysaccheride; Inflammatory cytokines

        肺炎是臨床上常見病、多發(fā)病,如不能及時治療,可導致呼吸衰竭、肺心病等,甚至死亡[1-2]。細菌脂多糖(Lipopolysaccheride,LPS)是細菌內(nèi)毒素的主要成分,可參與誘導細胞損傷,加重炎癥[3-4]。研究表明15-脂氧酶-1(15-LOX-1)可參與調(diào)控炎性反應[5-6]。本研究通過體外實驗探討下調(diào)15-LOX-1對LPS作用下肺動脈內(nèi)皮細胞(PAECs)和炎性因子分泌的影響,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

        1 材料與方法

        1.1 實驗動物

        選取10只健康雄性Wistar大鼠,月齡2個月,SPF級,體重(250±20)g,購于哈爾濱醫(yī)科大學附屬二院實驗動物中心(合格證號:20150921)。

        1.2 材料和儀器

        白細胞介素1α(IL-1α)、白細胞介素6(IL-6)和13-HODE ELISA試劑盒分別購自美國R&D公司和Enzolife公司。RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國invitrogen公司。細胞培養(yǎng)試劑購自美國Hyclone公司。siRNA引物由美國QIAGEN公司合成。siRNA沉默構(gòu)建試劑盒購自美國Amaxa Biosystems technology公司。

        1.3 方法

        1.3.1 PAECs培養(yǎng)和分組 0.25%胰蛋白酶消化Wistar大鼠肺動脈內(nèi)皮細胞層,收集PAECs體外培養(yǎng)并隨機分為4組:正常對照組、LPS組、15-LOX-1 siRNA對照組(scramble組)、15-LOX-1 siRNA組。其中,LPS組加入10 μmol/L LPS刺激培養(yǎng)48 h;scramble組在LPS組基礎(chǔ)上,轉(zhuǎn)染siRNA陰性對照于細胞中作用48 h;15-LOX-1 siRNA組在LPS組基礎(chǔ)上,轉(zhuǎn)染15-LOX-1 siRNA于細胞中作用48 h。endprint

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