何瑤，阮一，李卓恒，王麗娟，李崢（.重慶市急救醫(yī)療中心藥劑科，重慶40004；.陸軍軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院藥劑科，重慶40000；.重慶醫(yī)藥高等?？茖W校藥學院，重慶40；4.重慶市第五人民醫(yī)院藥劑科，重慶40006）

卡前列甲酯-羥丙基-β-環(huán)糊精包合物舌下片的制備及質(zhì)量評價Δ

何瑤1＊，阮一1，李卓恒2，王麗娟3，李崢4#（1.重慶市急救醫(yī)療中心藥劑科，重慶400014；2.陸軍軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院藥劑科，重慶400020；3.重慶醫(yī)藥高等?？茖W校藥學院，重慶401331；4.重慶市第五人民醫(yī)院藥劑科，重慶400062）

目的：制備卡前列甲酯-羥丙基-β-環(huán)糊精（HP-β-CD）包合物舌下片，并進行質(zhì)量評價。方法：采用濕法制粒法制備卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片，以片劑的外觀、崩解時間、潤濕時間、主藥含量為考察指標，以處方中甘露醇-乳糖的質(zhì)量比、聚維酮的體積分數(shù)、低取代羥丙纖維素（L-HPC）的用量為因素，采用正交試驗篩選處方。評價最優(yōu)處方所制舌下片的崩解時間、潤濕時間、主藥含量、含量均勻度及溶出度。結(jié)果：最優(yōu)處方為卡前列甲酯-HP-β-CD包合物78.82 mg（含卡前列甲酯1 mg），甘露醇-乳糖（質(zhì)量比9∶1）的混合粉末100 mg，2%的PVP溶液適量，L-HPC 30 mg，硬脂酸鎂1 mg。所制3批舌下片的崩解時間為（25.30±3.21）～（26.53±2.69）s，潤濕時間為（64.65±8.07）～（65.54±7.21）s，主藥含量為（96.13±0.43）%～（97.06±0.82）%，含量均勻度為5.95～7.68，10 min內(nèi)累積溶出度均超過50%，30 min內(nèi)可完全溶出。結(jié)論：成功制得質(zhì)量符合要求的卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片。

卡前列甲酯；羥丙基-β-環(huán)糊精；包合物；舌下片；正交試驗；質(zhì)量評價

卡前列甲酯為前列腺素F2α衍生物，具有多種生理生化功能，對血管、支氣管、子宮和胃腸道平滑肌舒縮及胃酸分泌均有影響，還可以影響血小板和血管內(nèi)皮細胞功能，被廣泛用于防治產(chǎn)后出血[1]?？ㄇ傲屑柞ニ苄孕。瑢?、熱、濕等外界因素敏感，性質(zhì)不穩(wěn)定。目前僅有卡前列甲酯的栓劑（商品名：卡孕）上市，其藥品說明書給藥途徑為陰道給藥，且需在－5℃條件下儲存。較多臨床研究和專家共識表明，將卡孕栓通過口腔黏膜給藥用于產(chǎn)后出血，能迅速吸收并達到有效血藥濃度而發(fā)揮效果[1-3]。在此基礎上，本課題組希望將卡前列甲酯制成口服制劑，以增加臨床應用時的選擇劑型。

舌下黏膜給藥系統(tǒng)將藥物制備成適宜劑型通過黏膜吸收，避免了首關(guān)效應，能有效提高藥物生物利用度。本課題組前期試驗已經(jīng)制備了卡前列甲酯-羥丙基-β-環(huán)糊精（HP-β-CD）包合物，已證實其可顯著改善卡前列甲酯的溶解性能、提高藥物穩(wěn)定性、促進藥物吸收。因此，本課題組擬通過處方篩選和制備工藝研究，將卡前列甲酯-HP-β-CD包合物制成舌下片，旨在為臨床提供一種穩(wěn)定性好，貯藏、使用方便，生物利用度高的卡前列甲酯新型給藥制劑。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010型高效液相色譜儀，包括2010型四元梯度泵和2010型紫外檢測器（日本Shimadzu公司）；PM300型分析電子天秤（瑞士Mettler-Toledo公司）；TDP型單沖壓片機（上海第一制藥機械廠）；ZB-IB型智能崩解儀（天津大學精密儀器廠）；ZRS-8G智能溶出試驗儀（天津大學無線電廠）。

1.2 藥品與試劑

卡前列甲酯對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100320-201302，純度：99.2%，）；HP-β-CD（山東新大精細化工有限公司，批號：20130622）；卡前列甲酯-HP-β-CD包合物（重慶市急救醫(yī)療中心自制，批號：20151003，規(guī)格：79 mg含有卡前列甲酯1 mg）；甘露醇（法國Roquette公司，批號：120594）；乳糖（海拉爾乳糖廠，批號：15-8665）；低取代羥丙纖維素（L-HPC，上海運宏化工有限公司，批號：20130911）；聚維酮（PVP，上海維酮材料科技有限公司，批號：20141093）；硬脂酸鎂（淄博市魯川化工有限公司，批號：20140725）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片的制備

2.1.1 處方卡前列甲酯-HP-β-CD包合物78.82 mg（含卡前列甲酯1 mg），甘露醇與乳糖的混合粉末100 mg，1%～3%（V/V）濃度的PVP溶液適量，L-HPC適量，硬脂酸鎂1 mg。

2.1.2 制備工藝按“2.1.1”項下處方量稱取卡前列甲酯-HP-β-CD包合物、甘露醇與乳糖的混合粉末，混勻，再加入L-HPC，過40目篩混勻后，再加入PVP溶液作為黏合劑制成軟材；過20目篩制粒，50℃干燥2 h；過40目篩整粒，最后加入硬脂酸鎂，混勻后壓片機壓制成片。

2.2 卡前列甲酯的含量測定方法

2.2.1 對照品溶液的制備取卡前列甲酯對照品100 mg，精密稱定，置于10 mL棕色量瓶中，用流動相稀釋并定容至刻度，制得質(zhì)量濃度為10.0 mg/mL的對照品溶液，于4℃下保存，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備取20片卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片，研細，取2.00 g粉末（相當于卡前列甲酯10 mg），置于50 mL棕色量瓶中，用流動相超聲（功率200 W，間隔5 s）20 min溶解，靜置至室溫，用流動相定容。取約40 mL上述溶液，2 000 r/min（離心半徑：3 cm）離心5 min，取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，制得供試品溶液，于4℃下保存，備用。

2.2.3 空白溶液的制備按照“2.1.1”項下處方中輔料配比制備不含卡前列甲酯-HP-β-CD包合物的空白片劑，

再按“2.2.2”項下方法制成空白溶液，于4℃下保存，備用。

2.2.4 色譜條件參考文獻[4]色譜條件。色譜柱為Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（70∶30，V/V）；流速為1 mL/min；柱溫為室溫（25～30℃）；檢測波長為202 nm；進樣量為20 μL。取對照品溶液、空白溶液和供試品溶液，進樣測定。結(jié)果，在該色譜條件下，卡前列甲酯的保留時間約為12.2 min，理論板數(shù)以卡前列甲酯計大于8 000，空白溶液在對照品溶液色譜圖中的相同保留時間處無吸收峰，表明輔料不干擾卡前列甲酯的測定。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1HPLC chromatograms

2.2.5 線性關(guān)系考察分別移取對照品溶液0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于10 mL量瓶中，流動相定容至刻度，制得質(zhì)量濃度分別為0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的系列對照品溶液。按“2.2.4”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以卡前列甲酯質(zhì)量濃度為橫坐標（x）、峰面積為縱坐標（y）進行線性回歸，得回歸方程為y＝0.257 8x+0.015 6（r＝0.999 6，n＝7）。結(jié)果表明，卡前列甲酯在0.05～1.0 mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。以3倍信噪比計算得檢測限為0.4μg/mL；以10倍信噪比計算得定量限為1.0μg/mL。

2.2.6 精密度試驗按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.4”項下色譜條件進樣測定。同日內(nèi)測定5次考察日內(nèi)精密度；每日測定1次，連續(xù)測定5 d，考察日間精密度。結(jié)果，峰面積日內(nèi)RSD為0.54%（n＝5），日間RSD為0.88%（n＝5），符合含量測定相關(guān)規(guī)定。

2.2.7 準確度考察按“2.1.1”項下處方量取各輔料，加入10 mL的流動相溶解，再分別加入1 mL的對照品溶液制備成低、中、高質(zhì)量濃度（0.2、0.4、0.8 mg/mL）的樣品溶液。按“2.2.2”項下方法處理后測定并計算回收率。結(jié)果，低、中、高質(zhì)量濃度樣品溶液的回收率分別為（99.96±0.98）%、（100.07±0.67）%、（100.12±0.55）%（n＝3），符合含量測定相關(guān)規(guī)定。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗取卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片適量，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，分別放置于0、12、24、36、48、60、72 h時進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，峰面積的RSD為1.23%（n＝7），表明供試品溶液在72 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 重復性試驗取卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片適量，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，分別量取供試品溶液6份，進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，峰面積的RSD為0.55%（n＝6），符合含量測定相關(guān)規(guī)定。

2.3 正交試驗設計優(yōu)選處方

2.3.1 因素與水平通過查閱文獻[4-9]，結(jié)合前期預試驗，選擇處方中填充劑甘露醇-矯味劑乳糖的質(zhì)量比（A）、黏合劑PVP的體積分數(shù)（B，%）、崩解劑L-HPC的用量（C，mg）為因素，每個因素選擇3個水平，因素與水平見表1。

表1 因素與水平Tab 1Factors and levels

2.3.2 評價指標參考文獻[5-8]，以片劑的外觀、崩解時間、潤濕時間、主藥含量為指標進行綜合評分，設計正交試驗優(yōu)化卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片處方。綜合評分總分為10分，其中外觀1分（表面光滑，有亮澤，計1分；表面粗糙，有麻點、粉塵，計0分）；崩解時間3分（30 s以內(nèi)，計3分；30～60 s，計2分；大于60 s，計1分）；潤濕時間3分（50 s以內(nèi)，計3分；50～90 s，計2分；大于90 s，計1分）；主藥含量3分（大于95%，計3分；90%～95%，計2分；小于90%，計1分）。正交試驗設計與結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

由表2和表3結(jié)果可知，各因素對綜合評分的影響大小順序為C＞A＞B，其中A和C對綜合評分有顯著影響（P＜0.05），B對綜合評分無顯著影響（P＞0.05）。根據(jù)數(shù)據(jù)分析，確定最優(yōu)處方為A3B2C3，即甘露醇-乳糖質(zhì)量比為9∶1、PVP體積分數(shù)為2%、L-HPC用量為30 mg。

2.4 質(zhì)量評價

表2 正交試驗設計與結(jié)果Tab 2Design and results of orthogonal test

表3 方差分析結(jié)果Tab 3Results of variance analysis

以最優(yōu)處方制備3批卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片，對其進行質(zhì)量評價。

2.4.1 含量測定將3批樣品按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.4”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，代入回歸方程計算卡前列甲酯的含量。結(jié)果，卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片中卡前列甲酯含量均在標示量的90.0%～110.0%范圍內(nèi)，結(jié)果見表4。

表4 3批卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片的質(zhì)量評價結(jié)果（±s，n＝9）Tab4Resultsofqualityevaluationof3batchesofCarboprostmethyl-HP-β-CD clathrate sublingual tablets（±s，n＝9）

表4 3批卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片的質(zhì)量評價結(jié)果（±s，n＝9）Tab4Resultsofqualityevaluationof3batchesofCarboprostmethyl-HP-β-CD clathrate sublingual tablets（±s，n＝9）

批號20160317 20160318 20160319含量，%96.13±0.43 97.06±0.82 96.77±0.96崩解時間，s 25.30±3.21 26.53±2.69 25.79±4.75潤濕時間，s 65.54±7.21 64.65±8.07 65.54±5.76含量均勻度7.68 7.22 5.95 30 min累積溶出度，%101.76±1.35 99.97±1.65 101.70±1.79

2.4.2 崩解時限測定參照2015年版《中國藥典》（四部）“崩解時限的測定方法”[10]，分別取3批樣品各6片，置于升降式崩解儀轉(zhuǎn)籃中，測定其崩解時限。結(jié)果顯示，3批樣品的崩解時間均不超過35 s，見表4。

2.4.3 潤濕時限測定參照文獻[11]方法，取一張吸水紙（8 cm×4 cm），對折后放入pH 6.8的10 mL磷酸鹽緩沖液（PBS）的培養(yǎng)皿（直徑9.5 cm）中，待其完全吸收飽和時，傾出多余溶液。取3批樣品，各6片，分別置于吸水紙中心，直到水分分散至整個片劑為止，記錄時間。結(jié)果顯示，3批樣品的潤濕時間均不超過80 s，具體見表4。

2.4.4含量均勻度參照2015年版《中國藥典》（四部）“含量均勻度檢查方法”[10]，分別取3批樣品各6片，以含量測定項下測定的結(jié)果計算含量均勻度（A+1.8S）。結(jié)果顯示，3批樣品的含量均勻度均小于8，具體見表4。

2.4.5 溶出度測定參照2015年版《中國藥典》（四部）“溶出度的測定方法”[10]，采用槳法測定3批樣品的體外溶出度。設定轉(zhuǎn)速為50 r/min，水溫為（37±0.5）℃，溶出介質(zhì)為pH 6.8的PBS 1 000 mL，取樣時間為5、10、15、20、30、45、60 min，取樣量為10 mL，取樣同時補加等量同溫介質(zhì)。溶出液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。以PBS為空白，進樣測定續(xù)濾液中卡前列甲酯的含量，計算累積溶出度。結(jié)果顯示，3批樣品在10 min時的累積溶出度均已超過50%，30 min內(nèi)可完全溶出，見表4。3批樣品的體外溶出曲線見圖2。

圖23 批卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片的體外溶出曲線Fig 2The in vitro dissolution curves of 3 batchesofCarboprostmethyl-HP-β-CD clathrate sublingual tablets

3 討論

由于卡前列甲酯對光、熱、濕等外界因素敏感，性質(zhì)不穩(wěn)定，因此其舌下片處方所用輔料應符合吸濕性小的條件。有研究針對常用輔料的吸濕性進行了對比[6，11-12]，甘露醇、乳糖溶解性好又有甜味，幾乎無吸濕性，且在已上市的舌下片制劑中廣泛使用，因此為卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片的理想填充劑和矯味劑。本課題組前期試驗比較了分別單用甘露醇和乳糖作為填充劑的情況，試驗發(fā)現(xiàn)單用甘露醇時，流動性較乳糖差；單用乳糖時，制得的片劑易出現(xiàn)表面粗糙、有麻點等現(xiàn)象，因此本試驗最終選擇甘露醇和乳糖的混合粉末作為填充劑。

由于舌下片舌下含服僅依靠唾液潤濕藥片，使藥片崩解，在服藥時不得飲水，因此舌下片要求在少量水環(huán)境下即可達到快速崩解溶出。結(jié)合2015年版《中國藥典》（四部）片劑質(zhì)量要求，并參考文獻[4-8，13-15]，本研究選擇了崩解時間、潤濕時間、體外溶出度和含量均勻度為指標進行質(zhì)量評價。其中，在2015年版《中國藥典》（四部）中并沒有明確規(guī)定潤濕時間的測定方法和標準。因此，本試驗參照文獻方法進行潤濕時限測定，試驗結(jié)果表明，該方法適用于本研究中的舌下片，測定潤濕時間較準確。通過對卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片質(zhì)量評價，結(jié)果顯示，該舌下片質(zhì)量指標符合相關(guān)規(guī)定，制備工藝也較簡單，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。本文為卡前列甲酯新劑型的研究提供了試驗依據(jù)，但有關(guān)其藥動學試驗還需進一步研究。

本研究首次將卡前列甲酯-HP-β-CD包合物制備成舌下片，具有較好的開發(fā)前景，對于臨床產(chǎn)后出血防治的新劑型的研發(fā)具有很好的參考價值。

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Preparation and Quality Evaluation of Carboprost Methyl-hydroxypropyl-β-cyclodextrin Clathrate Sublingual Tablets

HE Yao1，RUAN Yi1，LI Zhuoheng2，WANG Lijuan3，LI Zheng4（1.Dept.of Pharmacy，Chongqing Emergency Medical Center，Chongqing 400014，China；2.Dept.of Pharmacy，the Third Affiliated Hospital of Army Medical University，Chongqing 400020，China；3.School of Pharmacy，Chongqing Medical and Pharmaceutical College，Chongqing 401331，China；4.Dept.of Pharmacy，the Fifth People’s Hospital of Chongqing，Chongqing 400062，China）

OBJECTIVE：To prepare the Carboprost methyl-hydroxypropyl-β-cyclodextrin（HP-β-CD）clathrate sublingual tablets，and conduct quality evaluation.METHODS：Wet granulation method was used to prepare Carboprost methyl-HP-β-CD clathrate sublingual tablets.Using the appearance，calving time，wetting time and main drug content as investigation indexes，mass ratio of mannitol-lactose，povidone volume fraction and amount of low-substituted hydroxypropylcellulose（L-HPC）as factors，orthogonal test was used to screen the formulation.The calving time，wetting time，main drug content，content uniformity，dissolution degree of sublingual tablets with optimal formulation were evaluated.RESULTS：The optimal formulation was as follow as 78.82 mg of carboprost methyl-HP-β-CD clathrate（containing carboprost methyl 1 mg），100 mg of mannitol-lactose（mass ratio of 9∶1）mixed powder，appropriate amount of 2%povidone solution，30 mg of L-HPC，and 1 mg of magnesium stearate.The calving time of prepared 3 batches of sublingual tablets was（25.30±3.21）-（26.53±2.69）s；wetting time was（64.65±8.07）-（65.54±7.21）s；main drug content was（96.13±0.43）%-（97.06±0.82）%；content uniformity was 5.95-7.68；the cumulative dissolution degree within 10 min was more than 50%，and it can completely dissolute within 30 min.CONCLUSIONS：Carboprost methyl-HP-β-CD clathrate sublingual tablets，which are up to requirements，are prepared successfully.

Carboprost methyl；Hydroxypropyl-β-cyclodextrin；Clathrate；Sublingual tablets；Orthogonal test；Quality evaluation

R943

A

1001-0408（2017）34-4860-04

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.34.28

重慶市衛(wèi)生和計劃生育委員會醫(yī)學科研計劃項目（No.20142078）

＊主管藥師，碩士。研究方向：醫(yī)院藥學、藥劑學。電話：023-63692203。E-mail：27382552@qq.com

#通信作者：主管藥師。研究方向：醫(yī)院藥事管理、臨床藥學、藥劑學。電話：023-62875628。E-mail：597220337@qq.com

2017-06-03

2017-08-30）

（編輯：鄒麗娟）