時(shí)磊，魏明

白細(xì)胞介素17A體外刺激角質(zhì)形成細(xì)胞株對(duì)角蛋白17表達(dá)的影響

時(shí)磊，魏明

目的觀察白細(xì)胞介素 17A（IL-17A）對(duì)體外培養(yǎng)的人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株 HaCaT 分泌角蛋白 17（K17）及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和信號(hào)轉(zhuǎn)錄激活因子 3（STAT3）信號(hào)通路的影響。

方法RPMI1640 培養(yǎng)液培養(yǎng)的 HaCaT 細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組、IL-17A（50 μg/L）刺激孔（誘導(dǎo)組）和 IL-17A（50 μg/L）+ 10 μmol/L STAT3 抑制劑白皮杉醇（抑制劑組）。收集培養(yǎng)的 HaCaT 細(xì)胞，采用四甲基偶氮唑鹽（MTT）檢測(cè) HaCaT 細(xì)胞增殖；采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)HaCaT 細(xì)胞凋亡；采用 RT-PCR 檢測(cè) HaCaT 細(xì)胞 K17 mRNA 表達(dá)水平；采用 Western blot 法檢測(cè) HaCaT 細(xì)胞K17 和磷酸化 STAT3（p-STAT3）蛋白表達(dá)水平。

結(jié)果誘導(dǎo)組、抑制劑組和空白對(duì)照組 HaCaT 細(xì)胞增殖差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 8.47，P= 0.006），誘導(dǎo)組 HaCaT 細(xì)胞增殖高于空白對(duì)照組和抑制劑組（均P＜ 0.05）；誘導(dǎo)組、抑制劑組和空白對(duì)照組 HaCaT 細(xì)胞凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 26.48，P= 0.001），誘導(dǎo)組 HaCaT 細(xì)胞凋亡率（5.96% ± 0.68%）低于空白對(duì)照組（15.34% ± 1.32%）和抑制劑組（15.62% ± 1.26%）（均P＜ 0.05）；誘導(dǎo)組、抑制劑組和空白對(duì)照組 HaCaT 細(xì)胞 K17 mRNA 表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 10.25，P= 0.001），與空白對(duì)照組和抑制劑組比較，誘導(dǎo)組的 HaCaT 細(xì)胞 K17 mRNA 表達(dá)明顯升高（均P＜ 0.05）；3 組 HaCaT 細(xì)胞 K17 和 p-STAT3 蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F分別為 11.62 和 9.86，P= 0.001和 0.003）。與空白對(duì)照組和抑制劑組比較，誘導(dǎo)組的HaCaT 細(xì)胞 K17 和 p-STAT3 蛋白表達(dá)明顯升高（均P＜0.05）。

結(jié)論IL-17A 能夠上調(diào)體外培養(yǎng)的 HaCaT 細(xì)胞 K17 的表達(dá)，其調(diào)控機(jī)制可能是通過激活 STAT3 來實(shí)現(xiàn)，表明IL-17A 在銀屑病中所發(fā)揮的作用可能與 K17 有關(guān)，為銀屑病的發(fā)病機(jī)制研究和治療提供了新的思路。

白細(xì)胞介素 17； 銀屑??； Th17 細(xì)胞； 角蛋白 17； STAT3 轉(zhuǎn)錄因子

銀屑病是一種由 T 細(xì)胞介導(dǎo)的持續(xù)存在的慢性、炎癥性疾病，其主要表現(xiàn)是角質(zhì)形成細(xì)胞（keratinocytes，KC）的異常分化和增殖[1-2]。Th17細(xì)胞為一種新型細(xì)胞，其標(biāo)志性細(xì)胞因子IL-17 具有強(qiáng)大的致炎性，在銀屑病的發(fā)生發(fā)展過程中有重要作用[3-4]。近年來研究表明，銀屑病患者血清及皮損組織中 Th17 相關(guān)細(xì)胞因子水平以及皮損組織中 IL-17A 和 IL-23R 均表達(dá)升高[5-6]，由于 K17 與鏈球菌 M 蛋白具有交叉抗原特性，其表面含有多個(gè) T 淋巴細(xì)胞活化表位，能夠刺激炎癥皮損浸潤 T 淋巴細(xì)胞[7]，使之活化、增生，釋放IL-17 等炎性因子，這些因子又能夠誘導(dǎo) K17 的表達(dá)，從而在 K17 和 T 細(xì)胞之間形成一個(gè)相互促進(jìn)的環(huán)路[8-10]，導(dǎo)致炎性反應(yīng)和表皮細(xì)胞周期異常等病理改變[7]。為此本研究以體外培養(yǎng) HaCaT 細(xì)胞為模型，探析 K17 在銀屑病 T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)免疫機(jī)制中的作用以及對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和信號(hào)轉(zhuǎn)錄激活因子 3（STAT3）信號(hào)通路的影響，為銀屑病的發(fā)病機(jī)制研究提供新思路，并為今后開展銀屑病的靶向治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞與試劑 皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞株 HaCaT購于南京凱基生物有限公司；TRIzol 購于美國Invitrogen 公司；重組 IL-17A 購于美國 PeproTech公司；改良 Eagle 培養(yǎng)基（DMEM）、胎牛血清、0.25% 胰酶-EDTA、青霉素-鏈霉素雙抗溶液、二甲基亞砜（DMSO）、RPMI1640 培養(yǎng)液購于美國 Gibco公司；5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽（BCIP）-四唑硝基藍(lán)（NBT）顯色試劑盒購于瑞士 Roche 公司；四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）試劑盒購于美國 Sigma 公司；逆轉(zhuǎn)錄 PCR 試劑盒購于大連寶生物工程有限公司；異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）標(biāo)記的 AnnexinV 細(xì)胞凋亡試劑以及流式細(xì)胞儀檢測(cè)相關(guān)試劑購于美國 BD 公司；細(xì)胞培養(yǎng)箱為美國 Thermo 公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 HaCaT 細(xì)胞培養(yǎng) HaCaT 細(xì)胞在含 10%胎牛血清及 1% 青鏈霉素的改良 DMEM 培養(yǎng)基中，37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)，待細(xì)胞單層鋪滿培養(yǎng)瓶后，磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗 1 次，加0.25% 胰蛋白酶消化液，待鏡下細(xì)胞圓縮時(shí)，DMEM 培養(yǎng)液終止消化，細(xì)胞收集于離心管中，600 ×g離心 5 min，棄上清，將細(xì)胞懸液分別移至冷凍管中，每管 1.5 ml，將凍存管先置于 4 ℃ 冰箱 2 h，再移至 -80 ℃ 低溫冰箱 24 h，然后投入-196 ℃ 液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 HaCaT 細(xì)胞分組 將 HaCaT 細(xì)胞重懸于細(xì)胞培養(yǎng)液中，以 5 × 105個(gè)/ml 細(xì)胞鋪于 6 孔板中，用含 10% 胎牛血清的 RPMI1640 培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h。待其細(xì)胞達(dá)到 70% ～ 80% 融合度時(shí)，按實(shí)驗(yàn)要求分組如下：空白對(duì)照組（僅加 DMEM 高糖培養(yǎng)基）、誘導(dǎo)組（加含 50 μg/L IL-17A 的 DMEM高糖培養(yǎng)基）和抑制劑組（先加含 50 μg/L IL-17A的 DMEM 高糖培養(yǎng)基和 10 μmol/L STAT3 抑制劑白皮杉醇），孵育 6 h 后，置換為含 10% 胎牛血清的 RPMI1640 培養(yǎng)液，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求繼續(xù)培養(yǎng)，每組重復(fù) 3 次。

1.2.3 MTT 比色法檢測(cè) HaCaT 細(xì)胞增殖 HaCaT細(xì)胞分組處理后，于 12、24、36、48 h 時(shí)，用 MTT法檢測(cè) HaCaT 細(xì)胞增殖情況。胰酶消化細(xì)胞制備單細(xì)胞懸液，每組細(xì)胞以 6 × 104個(gè)/孔接種于96 孔培養(yǎng)板，細(xì)胞融合達(dá)到 80% 左右時(shí)開始檢測(cè)。吸棄原培養(yǎng)基，每孔加入 5 mg/ml 的 MTT 20 μl，37 ℃ 恒溫箱中孵育 4 h。吸棄上清后，每孔加入 150 μl DMSO，振蕩 10 min 充分溶解藍(lán)色結(jié)晶，測(cè) 490 nm 波長處的吸光值。

1.2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè) HaCaT 細(xì)胞凋亡 取培養(yǎng) 48 h 分組 HaCaT 細(xì)胞，用不含 EDTA 的胰蛋白酶消化分組處理，磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌后離心。吸棄上清后加入緩沖液 100 μl 重懸細(xì)胞，隨后加入 AnnexinV-FITC 5 μl 和碘化丙啶（PI），5 μl 放置于室溫避光孵育 15 min。加入 500 μl 緩沖液，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

1.2.5 RT-PCR 測(cè)定 HaCaT 細(xì)胞 K17 的表達(dá) 提取培養(yǎng) 48 h 后的各組 HaCaT 細(xì)胞總 RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，目的基因 K17 上游引物：5' ATGG ATCCATGACCATGCAGGCCTTGGAGA 3'，K17下游引物：5' AGGAATTCTCACGTCTTCACATCCA GCAGGA 3'，β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）上游引物：5' CA CGATGGAGGGGCCGGACTCATC 3'，β-actin 下游引物：5' TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT 3'。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄得到 cDNA。PCR反應(yīng)體系為 25 μl，擴(kuò)增條件為：94 ℃ 預(yù)變性 3 min；94 ℃ 變性 30 s，57 ℃ 退火 30 s，72 ℃ 延伸 50 s，共 35 個(gè)循環(huán)；最后 72 ℃ 延伸 5 min。PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng) 2% 瓊脂糖凝膠電泳后，用凝膠成像系統(tǒng)掃描拍照，檢測(cè)各電泳條帶的灰度，計(jì)算與 β-肌動(dòng)蛋白比值，得到目的產(chǎn)物的相對(duì)含量。

1.2.6 Western blot 法測(cè)定 HaCaT 細(xì)胞 K17 和p-STAT3 蛋白的表達(dá) 培養(yǎng) 48 h 后收集各組HaCaT 細(xì)胞，提取總蛋白，用二喹啉甲酸蛋白（BCA）法檢測(cè)蛋白濃度，上樣 40 μg 電泳、轉(zhuǎn)膜及封閉，一抗孵育（兔抗人 K17、p-STAT3 多克隆抗體滴度為 1∶1000，鼠抗人 β-actin 單克隆抗體為1∶1000），4 ℃ 過夜，二抗孵育（山羊抗兔 IgG 抗體滴度為 1∶2000，馬抗小鼠 IgG 抗體為 1∶2000）2 h，BCIP/NBT 顯色液顯色，凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果，目的蛋白條帶 K17 和 p-STAT3 與相應(yīng)內(nèi)參β-actin 條帶的灰度值比值作為其蛋白水平的半定量指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS 16.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用±s表示。多組間比較采用單因素方差分析，兩兩間比較采用 LSD-t檢驗(yàn)。以P＜ 0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RNA 質(zhì)量鑒定和濃度測(cè)定

取適量 RNA 水溶液行變性瓊脂糖凝膠電泳，以鑒定 RNA 質(zhì)量?？梢姌颖?28S 和18S 條帶清晰明亮，28S 亮度大于 18S，表明 RNA 質(zhì)量合格，沒有發(fā)生降解（圖 1）。OD260/280比值接近 2，提示 RNA 純度良好，可進(jìn)行下一步檢測(cè)。

2.2 IL-17A 體外刺激對(duì) HaCaT 細(xì)胞增殖的影響

MTT 檢測(cè) IL-17A 刺激 HaCaT 細(xì)胞 12、24、36、48 h 對(duì) HaCaT 細(xì)胞增殖能力的影響，結(jié)果見表 1。重復(fù)測(cè)量方差分析顯示，空白對(duì)照組、誘導(dǎo)組和抑制劑組間 HaCaT 細(xì)胞增殖不同（F= 8.47，

圖 1 RNA 瓊脂糖電泳圖Figure 1 Agarose gel electrophoresis of RNA

P= 0.006），提示 IL-17A 能促進(jìn) HaCaT 細(xì)胞的增殖；時(shí)間因素有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 15.36，P＜ 0.001），說明 HaCaT 細(xì)胞增殖率有隨時(shí)間變化的趨勢(shì)；時(shí)間和分組的交互作用沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 1.25，

P= 0.26），說明各組 HaCaT 細(xì)胞增殖隨時(shí)間變化的趨勢(shì)沒有明顯差異。

2.3 IL-17A 體外刺激對(duì) HaCaT 細(xì)胞凋亡的影響

空白對(duì)照組、誘導(dǎo)組 HaCaT 細(xì)胞凋亡率分別為（15.34% ± 1.32%）和（5.96% ± 0.68%），抑制劑組 HaCaT 細(xì)胞的凋亡率為（15.62% ± 1.26%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 26.48，P= 0.001）。兩兩比較，誘導(dǎo)組 HaCaT 細(xì)胞凋亡率較空白對(duì)照組和抑制劑組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（LSD-t= 6.32，LSD-t= 6.38，P＜ 0.05），見圖 2。

2.4 IL-17A 體外刺激對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K17 mRNA表達(dá)的影響

空白對(duì)照組、誘導(dǎo)組和抑制劑組 HaCaT 細(xì)胞K17 mRNA 表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 10.25，P= 0.001），與空白對(duì)照組和抑制劑組比較，誘導(dǎo)組的 HaCaT 細(xì)胞 K17 mRNA 表達(dá)明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（LSD-t分別為 4.69 和 4.98，P＜0.05），見圖 3 和圖 4。

2.5 IL-17A 體外刺激對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K17 蛋白表達(dá)的影響

空白對(duì)照組、誘導(dǎo)組和抑制劑組 HaCaT 細(xì)胞K17 蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 11.62，P= 0.001），與空白對(duì)照組和抑制劑組比較，誘導(dǎo)組的HaCaT 細(xì)胞 K17 蛋白表達(dá)明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（LSD-t分別為 3.68 和 4.21，P＜ 0.05），見圖 5 和圖 6。

表 1 IL-17A 對(duì) HaCaT 細(xì)胞增殖的影響（A490，±s ）Table 1 Effects of IL-17A on the proliferation of HaCaT cells (A490,±s )

表 1 IL-17A 對(duì) HaCaT 細(xì)胞增殖的影響（A490，±s ）Table 1 Effects of IL-17A on the proliferation of HaCaT cells (A490,±s )

注：a每個(gè)時(shí)間點(diǎn) 3 個(gè)分組間的比較。*與空白對(duì)照組比較，12 h：LSD-t = 3.26；24 h：LSD-t = 4.51；36 h：LSD-t = 8.68；48 h：LSD-t = 9.62；#與抑制劑組比較，12 h：LSD-t = 3.29；24 h：LSD-t = 4.65；36 h：LSD-t = 7.37；48 h：LSD-t = 9.74。Notes： aCompared the three groups at each time point. *Compared blank control group, 12 h： LSD-t = 3.26; 24 h： LSD-t = 4.51; 36 h： LSD-t = 8.68; 48 h：LSD-t = 9.62; #Compared inhibitor group, 12 h： LSD-t = 3.29; 24 h： LSD-t = 4.65; 36 h： LSD-t = 7.37; 48 h： LSD-t = 9.74.

組別 G r o u p s 1 2 h 2 4 h 3 6 h 4 8 h空白對(duì)照組 B l a n k c o n t r o l g r o u p 0 . 2 1 ± 0 . 0 5 0 . 3 2 ± 0 . 0 5 0 . 4 0 ± 0 . 0 6 0 . 5 1 ± 0 . 0 5誘導(dǎo)組 I n d u c t i o n g r o u p 0 . 3 1 ± 0 . 0 6 0 . 4 5 ± 0 . 0 5 0 . 6 2 ± 0 . 0 7 *# 0 . 8 1 ± 0 . 0 8 *#抑制劑組 I n h i b i t o r g r o u p 0 . 1 9 ± 0 . 0 4 0 . 2 9 ± 0 . 0 6 0 . 3 9 ± 0 . 0 8 0 . 4 8 ± 0 . 0 6 Pa ＜ 0 . 0 5 ＜ 0 . 0 5 ＜ 0 . 0 0 1 ＜ 0 . 0 0 1

圖 2 IL-17A 刺激對(duì) HaCaT 細(xì)胞凋亡的影響（A：空白對(duì)照組；B：誘導(dǎo)組；C：抑制劑組）Figure 2 IL-17A stimulating on effect of HaCaT cells apoptosis (A： Blank control group; B： Induction group; C： Inhibitor group)

圖 3 K17 mRNA 電泳圖Figure 3 Electrophoregram of K17 mRNA

圖 4 IL-17A 刺激對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K17 mRNA 表達(dá)的影響（*與空白對(duì)照組和抑制組比較，P ＜ 0.05）Figure 4 Effect of IL-17A on the expression of K17 mRNA in keratinocyte (*P ＜ 0.05, compared with control group and inhibitor group)

圖 5 IL-17A 刺激對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K17 蛋白表達(dá)的影響Figure 5 Effect of IL-17A on the expression of K17protein in keratinocyte

2.6 IL-17A 體外刺激對(duì) HaCaT 細(xì)胞 STAT3 信號(hào)通路 p-STAT3 蛋白表達(dá)的影響

空白對(duì)照組、誘導(dǎo)組和抑制劑組 HaCaT 細(xì)胞p-STAT3 蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 9.86，P= 0.003），與空白對(duì)照組和抑制劑組比較，誘導(dǎo)組的 HaCaT 細(xì)胞 p-STAT3 蛋白表達(dá)明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（LSD-t分別為 4.13 和 4.27，P＜ 0.05），見圖 7 和圖 8。

圖 6 K17 蛋白相對(duì)表達(dá)水平（*與空白對(duì)照組和抑制組比較，P ＜ 0.05）Figure 6 Expression of K17 protein (*P ＜ 0.05, compared with control group and inhibitor group)

圖 7 IL-17A 刺激對(duì) HaCaT 細(xì)胞 p-STAT3 蛋白表達(dá)的影響Figure 7 Effect of IL-17A on the expression of p-STAT3 protein in keratinocyte

圖 8 p-STAT3 蛋白相對(duì)表達(dá)水平（*與空白對(duì)照組和抑制組比較，P ＜ 0.05）Figure 8 Expression of p-STAT3 protein (*P ＜ 0.05, compared with control group and inhibitor group)

3 討論

角蛋白是角質(zhì)細(xì)胞中的主要骨架蛋白，多于上皮細(xì)胞中表達(dá)，是上皮細(xì)胞生長、分化及成熟的重要標(biāo)志物[11]。有研究表明，在銀屑病患者皮損中，KC 所表達(dá)的角蛋白譜會(huì)發(fā)生改變，K17 水平顯著升高。K17 作為銀屑病增殖相關(guān)角蛋白在正常皮膚中不表達(dá)或表達(dá)量很低，而在銀屑病患者的皮損中則是高表達(dá)，同時(shí)其表達(dá)水平與銀屑病發(fā)病過程和嚴(yán)重程度有一定相關(guān)性[12-13]。所以 K17 與銀屑病的關(guān)系非常密切，在銀屑病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。

文獻(xiàn)[15]報(bào)道，來源于 Th17、Th22 細(xì)胞的IL-17A 和 IL-22 在角質(zhì)形成細(xì)胞以劑量相關(guān)性方式上調(diào) K17 mRNA 水平及蛋白水平，這些效應(yīng)被STAT-1 和 STAT-3 特異抑制劑小干擾 RNA 部分阻斷[14]。在該報(bào)道中還提出存在 K17-T 細(xì)胞-細(xì)胞因子免疫環(huán)，其中異位表達(dá) K17 通過激活自身反應(yīng)性 T 細(xì)胞影響銀屑病。應(yīng)用反義寡核苷酸和RNAi 抑制 K17 mRNA 和蛋白在銀屑病皮膚的表達(dá)，在臨床和組織學(xué)上均發(fā)揮對(duì)銀屑病的改善作用[15]。也有研究表明，K17 攜帶某些和鏈球菌 M6蛋白相似的表位[16]，這些表位可以激活 T 細(xì)胞增殖，如 Th1 細(xì)胞 T 細(xì)胞，活化的 T 細(xì)胞產(chǎn)生銀屑病相關(guān)細(xì)胞因子 IFN-γ，細(xì)胞因子 IFN-γ 又可以依賴 STAT1 和 STAT3 信號(hào)通路激活 KC 表達(dá)K17，繼而形成了一個(gè)反應(yīng)環(huán)路再次激活 T 細(xì)胞增殖和銀屑病相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生[17]。

Th17 細(xì)胞在銀屑病形成中發(fā)揮關(guān)鍵作用[18]，分泌的 IL-17A 通過多種途徑影響角蛋白細(xì)胞[19]，有關(guān) IL-17A 激活 KC 中 STAT3 信號(hào)通路未見文獻(xiàn)報(bào)道，為此我們對(duì) IL-17A 調(diào)控 KC 中 K17表達(dá)的具體機(jī)制做了進(jìn)一步的探索。我們預(yù)先用STAT3 信號(hào)通路抑制劑白皮杉醇處理 KCs，再用IL-17A 進(jìn)行刺激后發(fā)現(xiàn)，與誘導(dǎo)組比較，K17 mRNA 和蛋白的表達(dá)均下降，表明 IL-17A 調(diào)控K17 的表達(dá)可能是通過激活 JAK-STAT3 這條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路實(shí)現(xiàn)的。這個(gè)結(jié)果與 STAT3 在銀屑病患者皮損 KC 中特異性高表達(dá)是一致的[20]。其調(diào)控機(jī)制是 IL-17A 通過與 KC 表面受體結(jié)合后激活 STAT3 來上調(diào) K17 的表達(dá)。IL-17A 可在角蛋白水平上參與促進(jìn)銀屑病的發(fā)生發(fā)展，進(jìn)一步肯定了 Th 細(xì)胞及其細(xì)胞因子在銀屑病中的作用。為銀屑病的發(fā)病機(jī)制研究和將來對(duì)細(xì)胞因子、信號(hào)通路的抗銀屑病臨床治療提供新的靶點(diǎn)和思路。

綜上所述，K17 在 T 細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)下，通過STAT3 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡，活化相關(guān)生長因子，在促進(jìn)銀屑病發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，為銀屑病的發(fā)病機(jī)制研究提供了理論依據(jù)。

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Effect of interleukin-17A on keratin 17 in keratinocyte and its molecular mechanismin vitro

SHI Lei, WEI Ming

ObjectiveTo explore the effect of IL-17A on the expression of K17 in keratinocytes (KCs) and its molecular mechanism.

MethodsIL-17A (50 μg/L) was used to stimulate the KCs for 12 to 48 h, and three groups were divided that included control group, induction group and both induction and inhibitor (abbreviated as inhibitor) group. MTT assay was used to detect the proliferation. Flow cytometry was used to test apoptosis. Real-time PCR and Western blot were used to detect K17 mRNA and protein levels, as well as STAT3 signaling pathway.

ResultsHaCaT cell proliferation was different among the blank control group, induction group and inhibitor group, as tested by MTT (F= 8.47,P= 0.006). The apoptosis rate of HaCaT cells was (15.34% ± 1.32%), (5.96% ± 0.68%) and (15.62% ± 1.26%) in the blank control group, induction group and inhibitor group, respectively (F= 26.48,P= 0.001). K17 mRNA and protein expression levels were statistically significant among the three groups (F= 10.25,P= 0.001 for mRNA andF= 11.62,P= 0.001 for protein, respectively). The p-STAT3 protein expression was statistically significant as well (F= 9.86,P= 0.003).

Conclusions IL-17A can up-regulate the expression of K17 in KC, and its specific regulation mechanism is by the activation of STAT3. Our experimental results prove that IL-17A takes part in the pathogenesis of psoriasis on the level of keratin. This work provides a new strategy toward pathogenesis and remedy in psoriasis.

Interleukin-17; Psoriasis; Th17 cells; Keratin17; STAT3 transcription factor

Author Affiliation:Department of Pharmacy, The Fifth Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China

WEI Ming, Email： gushiweiming@126.com

10.3969/j.issn.1673-713X.2017.06.006

450052 鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院藥學(xué)部

魏明，Email：gushiweiming@126.com

2017-09-13

www.cmbp.net.cn 中國醫(yī)藥生物技術(shù), 2017, 12(6):526-531