繆 巍 才保加 劉 寧 王曉龍 馬曉明 戈 銳

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，青海 西寧 810001)

胃腺癌中白細(xì)胞介素-6、-17A表達(dá)與間質(zhì)中巨噬細(xì)胞的關(guān)系

繆 巍 才保加 劉 寧 王曉龍 馬曉明 戈 銳

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，青海 西寧 810001)

目的檢測胃腺癌中白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-17A的表達(dá)，關(guān)注二者與間質(zhì)中巨噬細(xì)胞的關(guān)系。方法胃腺癌術(shù)后組織共57例為觀察組，距腫瘤邊緣gt;3 cm的非腫瘤性胃黏膜組織13例組織為對照組。應(yīng)用免疫組化SP法檢測兩組腫瘤細(xì)胞中IL-6和IL-17A、間質(zhì)中白細(xì)胞分化抗原(CD)163的表達(dá)。結(jié)果觀察組腫瘤細(xì)胞中IL-6、IL-17A的表達(dá)、間質(zhì)中CD163的表達(dá)均明顯高于對照組。觀察組中IL-6、IL-17A和CD163的表達(dá)與腫瘤的炎性反應(yīng)程度、浸潤深度均密切相關(guān)，IL-6、IL-17A與腫瘤的最大徑密切相關(guān)，IL-17A的表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。線性相關(guān)分析顯示觀察組中IL-6和CD163、IL-17A和CD163呈正相關(guān)。結(jié)論胃腺癌術(shù)后組織中IL-6、IL-17A高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的形成和進(jìn)展，二者均與腫瘤間質(zhì)的巨噬細(xì)胞反應(yīng)具有相關(guān)性。

胃腺癌；白細(xì)胞介素(IL)-6；IL-17A；巨噬細(xì)胞；免疫組化

腫瘤細(xì)胞在生長過程中產(chǎn)生促腫瘤進(jìn)展的蛋白，近年研究顯示炎性相關(guān)因子參與腫瘤的進(jìn)展過程〔1〕。白細(xì)胞介素(IL)-6、-17A是炎性相關(guān)因子，可以誘導(dǎo)炎性因子的產(chǎn)生，促進(jìn)趨化因子的釋放。惡性腫瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生IL-6和IL-17A，不僅可以調(diào)節(jié)腫瘤的形成和進(jìn)展，還對腫瘤間質(zhì)的巨噬細(xì)胞的反應(yīng)起重要的調(diào)節(jié)作用〔2，3〕。本文關(guān)注胃腺癌術(shù)后組織中IL-6和IL-17A的表達(dá)，關(guān)注其與白細(xì)胞分化抗原(CD)163標(biāo)記的巨噬細(xì)胞的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 2014年1月至2016年6月青海大學(xué)附屬醫(yī)院行胃腺癌根治手術(shù)的患者57例為觀察組，均留取術(shù)后蠟塊組織。其中男29例，女28例，年齡45～80(平均59.2)歲。均經(jīng)術(shù)后病理明確診斷，其分型符合世界衛(wèi)生組織的診斷標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。距腫物邊緣gt;3 cm的非腫瘤性胃黏膜組織13例為對照組，其中男7例，女6例，年齡47～78(平均57.7)歲。兩組性別、年齡無明顯差異，具有可比性。

1.2IL-6、IL-17A和CD163表達(dá)的檢測方法 術(shù)后組織均固定、石蠟包埋，切取4 μm切片后脫蠟，應(yīng)用免疫組化SP法檢測IL-6、IL-17A和CD163的表達(dá)、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，嚴(yán)格按實驗步驟進(jìn)行，減少誤差，做好質(zhì)量控制。

1.3IL-6、IL-17A和CD163結(jié)果的判讀 IL-6、IL-17A 的表達(dá)部位是腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，CD163的表達(dá)部位是間質(zhì)中巨噬細(xì)胞的細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)，以染成棕黃色-棕褐色定為陽性，評定時以染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞的百分率之和綜合評價。著色強(qiáng)度評分：0分，無顯色；1分，棕黃色；2分，棕褐色。陽性細(xì)胞百分率評分：每張切片選擇染色集中(熱點區(qū))3個高倍視野，計數(shù)陽性率，取其平均值；0分，lt;10%；1分，10%～50%；2分，gt;50%。上述兩項相加即為最終評分結(jié)果，0～2分為陰性，gt;2分為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組中IL-6、IL-17A和CD163蛋白表達(dá)的比較 兩組腫瘤細(xì)胞中IL-6、IL-17A的表達(dá)，間質(zhì)中CD163表達(dá)的陽性率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均Plt;0.05)。見表1。

2.2觀察組不同臨床特征中IL-6、IL-17A和CD163表達(dá)陽性率的比較 觀察組中IL-6、IL-17A和CD163的表達(dá)與腫瘤的炎性反應(yīng)程度、浸潤深度密切相關(guān)，IL-6、IL-17A與腫瘤最大徑密切相關(guān)，IL-17A的表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。見表2。

表1 兩組中IL-6、IL-17A和CD163蛋白表達(dá)陽性率的比較〔n(%)〕

表2 觀察組不同臨床特征中IL-6、IL-17A和CD163表達(dá)陽性率的比較〔n(%)〕

2.3觀察組中IL-6、IL-17A和CD163的相關(guān)性 IL-6和CD163(r=0.48，P=0.039)、IL-17A和CD163(r=0.50，P=0.025)均呈正相關(guān)。

3 討 論

腫瘤性病變形成時人們主要關(guān)注腫瘤的實質(zhì)，即腫瘤細(xì)胞，而很少關(guān)注腫瘤的微環(huán)境〔4〕，近年研究顯示腫瘤在生長和進(jìn)展的過程中間質(zhì)可以出現(xiàn)明顯的變化，如促纖維結(jié)締組織反應(yīng)、炎性相關(guān)反應(yīng)等〔5〕。炎癥反應(yīng)可以為腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造各種有利條件，而巨噬細(xì)胞這一作為微環(huán)境中數(shù)量最多的免疫細(xì)胞起著重要作用〔6〕。巨噬細(xì)胞作為一種異質(zhì)性細(xì)胞，受所處微環(huán)境的影響會發(fā)生不同性質(zhì)的活化，成為不同表型和功能的亞群，參與免疫應(yīng)答、殺傷病原體，并對形成的腫瘤細(xì)胞起一定的調(diào)控作用〔7〕。巨噬細(xì)胞來源于CD34陽性的骨髓樣干細(xì)胞，受各種趨化因子如單核細(xì)胞趨化因子、巨噬細(xì)胞集落刺激因子等作用下進(jìn)入血液循環(huán)，進(jìn)而移行到全身各組織器官，最終發(fā)育為成熟的巨噬細(xì)胞〔8〕。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞是腫瘤免疫微環(huán)境中最豐富的免疫細(xì)胞，在炎性反應(yīng)和腫瘤性病變之間起重要作用〔9〕。CD163主要標(biāo)記的是M2型巨噬細(xì)胞，其對腫瘤的作用主要是促進(jìn)其浸潤、淋巴管生成及血管新生。與M1型巨噬細(xì)胞作用不完全相同〔10〕。IL-6、IL-17A是多功能的生物活性多肽物質(zhì)，主要產(chǎn)生于單核巨噬細(xì)胞，某些腫瘤細(xì)胞也可以產(chǎn)生IL-6、IL-17A。IL-6通過其受體傳導(dǎo)激活Janus激酶(JAK)/信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)3信號通路，形成二聚體繼而轉(zhuǎn)入核內(nèi)，調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄活性〔11，12〕。二者與腫瘤的形成有一定的聯(lián)系。本研究提示腫瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生IL-6、IL-17A，不僅促進(jìn)腫瘤性病變的形成，還對腫瘤相關(guān)的炎性反應(yīng)起重要的促進(jìn)作用，同時其間質(zhì)可以形成較多的CD163陽性的巨噬細(xì)胞，這些細(xì)胞與腫瘤的形成過程有直接相關(guān)性的作用。本文結(jié)果顯示IL-6、IL-17A和CD163三種蛋白是引發(fā)腫瘤炎性相關(guān)作用的直接調(diào)控蛋白。三者高表達(dá)可以對促進(jìn)腫瘤的浸潤起重要作用。本文結(jié)果提示IL-6、IL-17A二者可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和生長，使腫瘤細(xì)胞繁殖能力明顯增高，腫瘤旺熾性增生。本文提示IL-17A高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤淋巴道播散，IL-17A可能對促進(jìn)腫瘤性的遷移有一定的影響〔13，14〕，這與IL-6的調(diào)節(jié)過程可能不完全一樣〔15〕。IL-6、IL-17A均對腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的形成有一定的影響〔16，17〕。

綜上，胃腺癌術(shù)后組織中IL-6、IL-17A高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的形成和進(jìn)展，二者均與腫瘤間質(zhì)的巨噬細(xì)胞反應(yīng)相關(guān)。

1Lu L，Pan K，Zheng HX，etal.IL-17A promotes immune cell recruitment in human esophageal cancers and the infiltrating dendritic cells represent a positive prognostic marker for patient survival〔J〕.J Immunother，2013；36(8)：451-8.

2Tan Z，Qian X，Jiang R，etal.IL-17A plays a critical role in the pathogenesis of liver fibrosis through hepatic stellate cell activation〔J〕.J Immunol，2013；191(4)：1835-44.

3Sansone P，Storci G，Tavolari S，etal.IL-6 triggers malignant features in mammospheres from human ductal breast carcinoma and normal mammary gland〔J〕.J Clin Investig，2007；117(12)：3988-9.

4李韻穎，張 輝，康 山，等.IL-17D、CD163在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及意義〔J〕.實用婦產(chǎn)科雜志，2015；31(5)：383-7.

5樓亞玲，丁 玲，徐 煒，等.HER2與CD163在胃癌中的表達(dá)及意義〔J〕.實用腫瘤雜志，2016；31(2)：131-4.

6張志斌，朱 艷，席俊峰.CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞對食管癌浸潤及預(yù)后的影響〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015；24(6)：590-2.

7徐海霞，鄧征浩，周建華，等.CD163、E-Cadherin在非小細(xì)胞肺癌腫瘤芽殖中的表達(dá)及意義〔J〕.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2016；16(3)：248-51.

8Fujii N，Shomori K，Shiomi T，etal.Cancer-associated fibroblasts and CD163-positive macrophages in oral squamous cell carcinoma：their clinicopathological and prognostic significance〔J〕.J Oral Pathol Med，2012；41(6)：444-51.

9Kazankov K，Rode A，Simonsen K，etal.Macrophage activation marker soluble CD163 may predict disease progression in hepatocellular carcinoma〔J〕.Scand J Clin Lab Investig，2015；76(1)：68-77.

10Shabo I，Olsson H，Sun X，etal.Expression of the macrophage antigen CD163 in rectal cancer cells is associated with early local recurrence and reduced survival time〔J〕.Int J Cancer，2009；125(8)：1826-7.

11Gooding R，Rowbottom A，Riches P，etal.Interleukin-6 (IL-6) functions as an autocrine growth factor in cervical carcinomas in vitro〔J〕.Gynecol Oncol，1993；50(1)：15-9.

12Thiounn N，Pages F，F(xiàn)lam T，etal.IL-6 is a survival prognostic factor in renal cell carcinoma〔J〕.Immunol Lett，1997；58(2)：121-4.

13范莎莎，李愛民，李 榮，等.IL-17在肝癌患者血清中表達(dá)增高對肝癌診斷的研究〔J〕.湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報，2014；37(3)：19-23.

14Cui G，Yuan A，Goll R，etal.IL-17A in the tumor microenvironment of the human colorectal adenoma-carcinoma sequence〔J〕.Scand J Gastroenterol，2012；47(11)：1304-12.

15Michalaki V，Syrigos K，Charles P，etal.Serum levels of IL-6 and TNF-α correlate with clinicopathological features and patient survival in patients with prostate cancer〔J〕.Brit J Cancer，2004；90(12)：2312-6.

16Liu Y，Zhao X，Sun X，etal.Expression of IL-17A，E，and F and their receptors in human prostatic cancer：Comparison with benign prostatic hyperplasia〔J〕.Prostate，2015；75(16)：1844-56.

17孟粹達(dá)，朱冬冬，李 琳，等.炎癥相關(guān)的IL-17在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2013；12(6)：312-6.

〔2016-12-27修回〕

(編輯 苑云杰)

R73

A

1005-9202(2017)21-5353-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.21.061

繆 巍(1975-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事胃腸腫瘤外科臨床研究。