藍(lán)永洪 解 娜 饒朗毓 牛海艷 齊亞靈

(海南醫(yī)學(xué)院形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571199)

乳腺癌組織中熱休克蛋白70和p53表達(dá)及相關(guān)性

藍(lán)永洪 解 娜1饒朗毓2牛海艷1齊亞靈3

(海南醫(yī)學(xué)院形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，海南 海口 571199)

目的探討熱休克蛋白(HSP)70和p53在乳腺癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)關(guān)系。方法采用免疫組化技術(shù)檢測24例乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中HSP70與p53的表達(dá)情況。結(jié)果與癌旁正常乳腺組織相比，乳腺癌組織HSP70與p53的陽性率顯著升高(Plt;0.05)，與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(Plt;0.05)，而與年齡和腫瘤的大小無關(guān)(Pgt;0.05)；同時(shí)HSP70與p53的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.516，P=0.013)。結(jié)論HSP70與p53在乳腺癌組織呈高表達(dá)且關(guān)系密切，在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到一定作用。

乳腺癌；熱休克蛋白70；p53

中國癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告中指出預(yù)計(jì)2016年中國乳腺癌發(fā)病人數(shù)達(dá)268 600人，在女性惡性腫瘤中發(fā)病率為第一位，病死率為第二位〔1，2〕。熱休克蛋白(HSP)70廣泛存在于生物體內(nèi)，是HSPs家族中最保守、應(yīng)激過程中表達(dá)最高的一種蛋白質(zhì)，在細(xì)胞凋亡、DNA損傷、免疫反應(yīng)等方面起著重要的作用，具有分子伴侶、細(xì)胞保護(hù)、結(jié)合功能等功能，在缺血、損傷、感染、腫瘤等情況下可誘發(fā) HSP70過量表達(dá)〔3〕。p53分為野生型和突變型，野生型p53在維持細(xì)胞正常生長，抑制細(xì)胞惡性增殖過程中起主要作用，而突變型p53失去抑癌作用，同時(shí)還因突變而具有癌基因的作用〔4，5〕。研究表明HSP70可與p53結(jié)合，介導(dǎo)其蛋白產(chǎn)物的構(gòu)象成熟，進(jìn)而影響細(xì)胞的周期，調(diào)控細(xì)胞的增殖能力〔6〕。本研究采用免疫組化檢測乳腺癌組織中HSP70與p53的表達(dá)情況，探討二者的表達(dá)關(guān)系及其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1資料及方法

1.1一般資料 2015年1月至2016年12月海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院乳腺癌外科切除的病理標(biāo)本24例，年齡35～72歲，平均(51.2±10.4)歲，術(shù)前均未行放、化療，術(shù)后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。所取組織標(biāo)本為乳腺癌組織及其癌旁正常乳腺組織，經(jīng)10%中性甲醛溶液固定后，常規(guī)脫水和石蠟包埋，連續(xù)切片厚度5 μm，撈片后放入干燥箱中烤片。

1.2主要試劑 兔單克隆抗體HSP70為英國Abcam公司產(chǎn)品、鼠單克隆抗體p53為福建邁新的產(chǎn)品； PV-6001〔山羊抗兔IgG/辣根過氧化物(HRP)聚合物〕、PV-6002(山羊抗小鼠IgG/HRP聚合物)、DAB顯色試劑盒均為北京中杉金橋的產(chǎn)品。

1.3免疫組化方法 石蠟切片常規(guī)脫蠟和水化，置于枸櫞酸緩沖液中微波修復(fù)，自然冷卻后用3%過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，山羊血清封閉，加HSP70或p53抗體置于4℃冰箱中過夜，滴加PV-6001或PV-6002室溫下孵育，DAB顯色，觀察染色結(jié)果，適時(shí)終止反應(yīng)，蘇木素復(fù)染，酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.4結(jié)果判斷 HSP70、p53分別以胞質(zhì)、胞核呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。高倍鏡下選擇10個(gè)視野，陽性細(xì)胞比例lt;20%為陰性(-)，≥20%為陽性(+)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1HSP70和p53的表達(dá)情況 與癌旁正常乳腺組織(29.2%、20.8%)相比，乳腺癌組織中HSP70(83.3%)和p53的陽性率(75.0%)顯著升高(Plt;0.05)。HSP70和p53的表達(dá)見圖1。

2.2HSP70和p53陽性表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系 HSP70與p53陽性表達(dá)均與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(Plt;0.05)，而與年齡和腫瘤的大小無關(guān)(Pgt;0.05)，見表1。

2.3HSP70和p53表達(dá)的相關(guān)性 20例HSP70陽性組織中有17例(85.0%)p53陽性，4例HSP70陰性組織中有1例(25.0%)

圖1 乳腺癌組織HSP70和p53的表達(dá)情況(×400)

臨床病理特征nHSP70P值p53P值年齡(歲) ≤4097(77.8)0.5726(66.7)0.465 gt;401513(86.7)12(80.0)腫瘤直徑(cm) ≤264(66.7)0.2063(50.0)0.102 gt;21816(88.9)15(83.3)TNM分期 Ⅰ63(50.0)0.0382(33.3)0.020 Ⅱ1312(92.3)11(84.6) Ⅲ55(100.0)5(100.0)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有1111(100.0)0.04410(90.9)0.040 無139(69.2)8(53.3)

p53陽性，乳腺癌組織中HSP70和p53的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.516，P=0.013)。

3 討 論

HSP70高表達(dá)通常與腫瘤細(xì)胞的低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤耐藥等緊密相關(guān)，可能參與腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為〔7〕。細(xì)胞中野生型p53蛋白分布少，且溶于水，免疫組化難以檢測，而突變型p53蛋白因?yàn)榭臻g構(gòu)象發(fā)生改變，穩(wěn)定性增強(qiáng)，容易檢測出，因此免疫組化檢測到的p53基本為突變型p53蛋白〔8〕。近一半的腫瘤組織存在 p53蛋白的高表達(dá)，而p53蛋白的高表達(dá)與腫瘤的臨床病理特征密切相關(guān)〔9〕。本研究結(jié)果提示HSP70和p53參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展；乳腺癌組織中的HSP70與p53兩者可能在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中相互影響，其原因可能為〔10～12〕：①HSP70的分子伴侶作用可以調(diào)節(jié)p53蛋白的構(gòu)象平衡，避免p53蛋白被降解；②HSP70與p53蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，導(dǎo)致p53蛋白在胞質(zhì)積聚，共同參與腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。 綜上，HSP70與p53蛋白在乳腺癌組織中呈高表達(dá)且關(guān)系密切，在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中起一定作用，可能成為判斷患者病情的指標(biāo)；同時(shí)HSP70與 p53蛋白聯(lián)合檢測結(jié)果可以初步判斷乳腺癌所處的階段，也為其靶向治療研究提供了一個(gè)方向。

1Chen W，Zheng R，Baade PD，etal.Cancer statistics in China， 2015〔J〕.CA Cancer J Clin， 2016；66(2)：115-32.

2Siegel RL，Miller KD，Jemal A.Cancer statistics，2016〔J〕.CA Cancer J Clin，2016；66(1)：7-30.

3Silver JT， Noble EG.Regulation of survival gene HSP70 〔J〕.Cell Stress Chaperones， 2012； 17(1)：1-9.

4Li Y， Bhuiyan M， Vaitkevicius VK，etal.Structural alteration of p53 protein correlated to survival in patients with pancreatic adenocarcinoma 〔J〕.Pancreas， 1999； 18(1)：104-10.

5詹 媛，江錦良，鄔黎青.p53在乳腺癌基因治療中的研究進(jìn)展〔J〕.中國老年學(xué)雜志， 2016；36(17)：4391-3.

6Tollv C，Morimoto RI.Role of the heat shock response and molecular chaperones in oncogenesis and cell death〔J〕.J Natl Cancer Inst，2000；92(19)：1564-72.

7王曉東，陳善成，楊俊葆，等.星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤中HSP70的表達(dá)及生物學(xué)活性〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2015；35(6)：1477-9.

8蒙健軍，藍(lán) 東，韋敏怡.P73、P5蛋白在胃癌中的表達(dá)及意義〔J〕.廣西醫(yī)學(xué)，2010；32(5)：510-2.

9張媛媛，付 麗.p53基因治療研究的新進(jìn)展〔J〕.中華病理學(xué)雜志，2006；35(1)：49-50.

10范云霞.熱休克蛋白70與腫瘤〔J〕.國際腫瘤學(xué)雜志，2000；27(4)：196-9.

11李三峰，丁 偉.HSP70與p53蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究〔J〕.腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2009；22(6)：468-71.

12李延輝，夏明汗，康舉齡，等.HSP70和P53蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011；11(13)：2504-7.

〔2017-02-19修回〕

(編輯 苑云杰)

R737.9

A

1005-9202(2017)21-5245-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.21.012

海南省自然科學(xué)基金(No.814301)；海南醫(yī)學(xué)院科研培育基金(No.HY2013-12)

1 病理學(xué)教研室 2 病原生物學(xué)教研室

3 組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室

齊亞靈(1967-)，女，教授，醫(yī)學(xué)博士，博士生導(dǎo)師，主要從事腫瘤基因診斷及生物治療研究。

藍(lán)永洪(1978-)，男，碩士，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，主要從事分子病理學(xué)研究。