王利軍，趙文文，么恩悅，劉 帥，刁新平

（東北農業(yè)大學動物科學技術學院，哈爾濱 150030）

發(fā)酵北蒼術對斷奶仔豬血清免疫和生化指標的影響

王利軍，趙文文，么恩悅，劉 帥，刁新平*

（東北農業(yè)大學動物科學技術學院，哈爾濱 150030）

試驗旨在研究飼糧中添加發(fā)酵北蒼術對斷奶仔豬血清免疫和生化指標影響。選取96頭（7.0±0.5）kg 28日齡斷奶二元雜交“長白×大白”仔豬，隨機分為6組，每組4個重復，每個重復4頭豬，試驗期為35 d，其中預試期7 d，正試期28 d。第Ⅰ組為對照組，飼喂基礎日糧；第Ⅱ組為抗生素組（基礎日糧中添加0.035%，硫酸粘桿菌素與桿菌肽鋅1：1混合），第Ⅲ組為未發(fā)酵北蒼術組（基礎日糧中添加0.2%未發(fā)酵北蒼術）；第Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組分別為：在基礎日糧中分別添加0.1%、0.2%、0.3%發(fā)酵北蒼術組。結果表明，① 試驗前期（1～14d），0.2%發(fā)酵北蒼術組與對照組相比血清中IgG含量提高19.1%（p＜0.05），谷丙轉氨酶（ALT）和谷草轉氨酶（AST）含量降低，但差異不顯著（P＞0.05）。0.3%發(fā)酵北蒼術組與對照組相比IgA和IgM分別提高6.4%和20.5%，總蛋白（TP）和白蛋白（ALB）含量分別提高12.1%和5.7%。② 試驗全期（1～28 d），0.2%發(fā)酵北蒼術組IgG、IgM、TP和ALB含量顯著（p＜0.05）高于對照組，分別提高9.9%、7.7%、20.9%和15.6%。0.2%發(fā)酵北蒼術組谷丙轉氨酶（ALT）含量與對照組相比降低25.6%（p＜0.05），谷草轉氨酶（AST）和尿素氮（BUN）差異不顯著（P＞0.05）。由此可知，發(fā)酵北蒼術與對照組相比可顯著提高斷奶仔豬免疫力，優(yōu)于未發(fā)酵北蒼術組，試驗前期發(fā)酵北蒼術最優(yōu)添加量為0.3%，后期最優(yōu)添加量為0.2%。綜上所述，斷奶仔豬日糧中添加發(fā)酵北蒼術可增強斷奶仔豬免疫力，提高生長性能，與抗生素藥效相近。研究為仔豬生產中以發(fā)酵中草藥飼料添加劑替代抗生素類藥物提供參考。

發(fā)酵北蒼術；斷奶仔豬；免疫指標；生化指標

隨著養(yǎng)豬業(yè)集約化規(guī)模擴大，為提高生產效率，早期斷奶技術應用廣泛。但仔豬消化機能發(fā)育不完善、胃腸道微生態(tài)平衡脆弱、免疫機能低，早期斷奶易誘發(fā)腹瀉。目前主要應用抗生素防治仔豬腹瀉，長期使用產生耐藥性、畜產品藥物殘留等問題， 尋找安全、 有效手段控制仔豬腹瀉成為研究熱點。

發(fā)酵中草藥是中草藥與生物工程、微生態(tài)學結合，利用現代生物技術監(jiān)控發(fā)酵參數（菌種、溫度、含水量、氧氣和酸堿度等）[1]。發(fā)酵中草藥具有新藥效物質及減毒增效特點，中草藥發(fā)酵后有效成分充分釋放，發(fā)酵后北蒼術以單劑形式添加到斷奶仔豬飼料中，可不同程度影響斷奶仔豬生長性能及機體免疫功能。Yu等從蒼術根莖中分離純化到3種具有腸免疫系統(tǒng)調節(jié)活性多糖[2]。張明發(fā)等研究發(fā)現蒼術具有抗腹瀉作用[3]。李啟照等發(fā)現蒼術多糖可預防蛋雞傳染性支氣管炎，提高蛋雞生產性能和蛋品質，降低蛋雞發(fā)病率、死亡率，顯著提高蛋雞生產經濟效益[4]。宋小珍等發(fā)現蒼術等中草藥添加劑可提高斷奶仔豬在熱應激情況下抗氧化能力[5]。何欣等發(fā)現蒼術等中草藥復方可增加種蛋雞夏季產蛋量，減少淘汰率[6]。

以上研究結果表明，發(fā)酵中草藥作為抗生素替代品潛力較大，但發(fā)酵北蒼術作為飼料添加劑在斷奶仔豬中應用鮮有報道。本研究將發(fā)酵北蒼術應用于斷奶仔豬，通過斷奶仔豬免疫和生化指標變化驗證其可行性，為仔豬生產提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗斷奶仔豬購自哈爾濱三元豬場，仔豬飼料購自哈爾濱華達飼料公司，發(fā)酵北蒼術購自哈爾濱三棵樹藥材市場，抗生素為桿菌肽鋅+硫酸粘桿菌素。酶聯免疫試劑盒：免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）,均購自R&D公司。生化指標試劑盒：總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、尿素氮（BUN），由黑龍江電力醫(yī)院提供檢測。

臺式高速離心機（Allegra 64R）購自美國Beckman Coulter公司；全自動生化分析儀購自美國Beckman Coulter公司。

1.2 試驗日糧

日糧配制參照美國NRC（1998）和2011年農業(yè)部公布豬飼養(yǎng)標準配制，第Ⅰ組為對照組，僅飼喂基礎日糧；第Ⅱ組為抗生素組，在基礎日糧中添加0.035%抗生素；第Ⅲ組在基礎日糧上添加0.2%未發(fā)酵北蒼術飼料添加劑；第Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組分別在基礎日糧中添加0.1%、0.2%、0.3%發(fā)酵北蒼術飼料添加劑，基礎日糧配方及營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎日糧組成和營養(yǎng)水平（風干基礎）Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets

1.3 試驗動物及飼養(yǎng)管理

采用單因素隨機設計，選取96頭（28±2）d“長白×大白”二元雜交仔豬，按體重、性別、窩別一致原則隨機分為6組，每組設4個重復，每個重復4頭豬，開展為期34 d飼養(yǎng)試驗，其中預試期7 d，正試期28 d。

第Ⅰ組為對照組，飼喂基礎日糧；第Ⅱ組為抗生素組（基礎日糧中添加0.035%，硫酸粘桿菌素與桿菌肽鋅1：1混合），第Ⅲ組未發(fā)酵北蒼術組（基礎日糧中添加0.2%未發(fā)酵北蒼術）；第Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組分別為：在基礎日糧中分別為添加0.1%、0.2%、0.3%發(fā)酵北蒼術組。仔豬舍為半開放式，采用自動乳頭式飲水器供水，仔豬自由飲水和采食，每天飼喂3次（6：00、11：30、18：00 各喂1次），每天清理糞便及運動場地1次。參照豬場現行方法免疫。

1.4 樣品采集

試驗正式期第14、28天早晨，每個重復隨機選取2頭仔豬，每組8頭，前腔靜脈采血約10 mL，置于肝素鈉真空管中，3 000 r·min-1離心15 min，分離血清，Eppendorf管中-80℃保存， 待測血清免疫和生化指標。血清中免疫指標測定IgA、IgM、IgG。血清中生化指標測定總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、尿素氮（BUN）。

1.5 指標檢測

1.5.1 血清免疫指標

IgA、IgM和IgG為雙抗體夾心法測定，使用南京建成生物試劑盒，方法按說明書操作。

1.5.2 血清生化指標

總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）和尿素氮（BUN）使用南京建成生物試劑盒測定，方法按說明書操作。

1.6 統(tǒng)計分析

數據采用 SPSS19.0軟件作ANOVA方差分析、Duncan's多重比較，結果用“平均值±標準誤”表示。p＜0.05為差異顯著，p＜0.01為差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 發(fā)酵北蒼術對仔豬斷奶第14天血清免疫指標影響

發(fā)酵北蒼術飼料添加劑對仔豬斷奶血清免疫指標影響見表2。在試驗第14天，各試驗組IgA含量均高于對照組，其中，添加未發(fā)酵北蒼術Ⅲ組和發(fā)酵北蒼術Ⅳ組與對照組相比，IgA含量有增高趨勢（P＞0.05），其余各組與對照組相比，IgA含量均顯著提高（p＜0.05），發(fā)酵北蒼術Ⅵ組IgA含量最高，與對照組和抗生素組相比分別提高6.4%（p＜0.05）和1.67%（P＞0.05）；試驗組IgG含量均較對照組顯著提高（p＜0.05），其中抗生素組和發(fā)酵Ⅴ組表現最佳，與對照組相比IgG含量分別提高19.8%（p＜0.05）和19.1%（p＜0.05）；試驗組IgM含量均高于對照組，除Ⅲ組IgM含量與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）外，其余各組與對照組相比IgM含量均顯著提高（p＜0.05），其中Ⅵ組IgM含量最高，與對照組和抗生素組相比，IgM含量分別提高20.5%（p＜0.05）和11.6%（p＜0.05）。

2.2 發(fā)酵北蒼術對仔豬斷奶第28天血清免疫指標影響

發(fā)酵北蒼術飼料添加劑對仔豬斷奶血清免疫指標影響見表3。在試驗第28天，各試驗組IgA含量與對照組相比均有所提高，除Ⅲ組和Ⅳ組IgA含量與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）外，Ⅱ、Ⅴ和Ⅵ組IgA含量與對照組相比差異顯著（p＜0.05），其中Ⅴ組和Ⅵ組較好，與對照組和抗生素組相比IgA含量分別提高7.7%、17.7%和7.1%、14.1%（p＜0.05）；試驗組IgG含量均高于對照組，其中Ⅲ組和Ⅳ組IgG含量與對照組差異不顯著（P＞0.05），Ⅱ、Ⅴ和Ⅵ組IgG含量與對照組相比差異顯著（p＜0.05），且Ⅴ組IgG含量最高，與對照組和抗生素組相比，IgG含量分別提高9.9%（p＜0.05）和3.8%（p＜0.05）；試驗組Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ組IgM含量與對照組相比有下降趨勢，Ⅱ和Ⅵ組與對照組相比，IgM含量顯著提高（p＜0.05），其中Ⅴ組IgM含量最高，與對照組與抗生素組相比，IgM含量分別提高7.7%（p＜0.05）和3.8%（p＜0.05）。

表2 發(fā)酵北蒼術對仔豬斷奶第14天血清免疫指標影響Table 2 Effects of fermented Atractylodes chinensis on immune indices in weaned piglets at 14th day

表3 發(fā)酵北蒼術對仔豬斷奶第28天血清免疫指標影響Table 3 Effects of fermented Atractylodes chinensis on serum immune indices in weaned piglets at 28th day

2.3 發(fā)酵北蒼術對仔豬斷奶第14天血清生化指標影響

由表4可知，Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組血清中總蛋白TP含量與對照組相比有增加趨勢，但差異不顯著（P＞0.05），抗生素組和Ⅵ組血清中TP含量比對照組分別增加15.6%和12.1%，且差異顯著（p＜0.05）。與對照組相比，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ組血清中ALB含量差異不顯著（P＞0.05），Ⅱ組血清中ALB含量顯著提高13.1%（p＜0.05），Ⅵ組血清中ALB含量略低于抗生素組，但差異不顯著（P＞0.05）。試驗組血清中ALT、AST和BUN與對照組相比，差異均不顯著（P＞0.05）。

2.4 發(fā)酵北蒼術對仔豬斷奶第28天血清生化指標影響

由表5可知，各試驗組血清中TP含量均高于對照組，其中Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ組與對照組相比血清中TP含量有增加趨勢，但差異不顯著（P＞0.05），Ⅴ組與對照組和抗生素組相比，血清中TP含量顯著增加20.9%（p＜0.05）和12.6%（p＜0.05）。試驗組血清中ALB含量與對照組相比，均高于對照組，其中Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ組血清中ALB含量與對照組相比，增加不顯著（P＞0.05），Ⅴ組和抗生素血清中ALB含量比對照組顯著增加15.6%（p＜0.05）和14.4%（p＜0.05），且Ⅴ組和抗生素組血清中ALB含量之間差異不顯著（P＞0.05）。試驗組血清中ALT含量均低于對照組，其中Ⅱ、Ⅳ和Ⅵ組與對照組相比，血清中ALT含量呈下降趨勢但差異不顯著（P＞0.05），Ⅲ和Ⅴ組血清中ALT含量與對照組相比顯著下降30.4%（p＜0.05）和25.6%（p＜0.05），Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ組血清中ALT含量與抗生素組相比差異不顯著（P＞0.05）。試驗組血清中AST和BUN與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

表4 發(fā)酵北蒼術對仔豬斷奶第14天血清生化指標影響Table 4 Effects of fermented Atractylodes chinensis on biochemical indices in weaned piglets at 14th day

表5 發(fā)酵北蒼術對仔豬斷奶第28天血清生化指標影響Table 5 Effects of fermented Atractylodes chinensis on biochemical indices in weaned piglets at 28th day

3 討論與結論

3.1 發(fā)酵蒼術飼料添加劑對斷奶仔豬免疫指標影響

本研究中仔豬斷奶28 d與14 d相比，血清中IgA、IgG、IgM水平不同程度提高，且添加0.2%發(fā)酵復方中草藥組血清中IgA、IgG、IgM水平與對照組相比顯著增加，可能是仔豬斷奶前體內免疫因子主要由母乳提供，仔豬斷奶后由于機體自身免疫機制不完善體內免疫因子數量明顯減少，此時試驗中添加抗生素、未發(fā)酵北蒼術、發(fā)酵北蒼術可刺激動物機體產生自身免疫因子，提高動物機體免疫功能。李國忠等研究表明，枯草芽孢桿菌發(fā)酵中草藥黃芩添加到斷奶仔豬日糧中，可顯著提高仔豬血清中IgA、IgG、IgM水平[7]，姜衛(wèi)星等研究表明，隨著含板藍根的中草藥劑量提高，育肥豬血清中IgA、IgM、IgG濃度呈遞增趨勢[8]。劉紀方等研究復方中草藥對斷奶仔豬生產性能和免疫功能影響發(fā)現，斷奶20日齡各組血清IgA、IgG、IgM水平比斷奶10日齡有不同程度提高[9]；試驗組與對照組相比，試驗組血清IgA和IgM水平分別比對照組提高15.22%（p＜0.05）和30.66%（p＜0.05），與本試驗結果基本一致。劉芬等研究蒼術提取物對脾虛證大鼠胃粘膜及胃腸免疫功能影響，發(fā)現蒼術提取物可以提高腸道灌流液IgA、血清IgG含量，改善脾虛證大鼠免疫功能[10]。本研究在斷奶仔豬日糧中添加發(fā)酵北蒼術和未發(fā)酵北蒼術均可提高仔豬血清中IgA、IgG、IgM水平，增強免疫功能，本試驗研究結果一致，即蒼術可提高免疫球蛋白含量，增強動物免疫功能。本試驗中，相比對照組，發(fā)酵北蒼術組IgG與IgM均呈增長趨勢，證實添加發(fā)酵北蒼術可改善仔豬抗病力，增強免疫功能，有利于在仔豬感染早期發(fā)揮更高效免疫功效。

3.2 發(fā)酵蒼術對斷奶仔豬血清生化指標影響

早期斷奶仔豬由于被動免疫保護消失，主動免疫功能不完善，抵抗力差，易出現腹瀉等疾病。夏新山等研究表明，血液中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）含量顯著提高，說明豬消化吸收、蛋白質代謝加強，免疫力提高[11]。田允波等研究表明，血清蛋白質含量高，有利于提高豬代謝水平和免疫能力，促進其健康快速生長[12]。本試驗在仔豬日糧中添加發(fā)酵北蒼術后，各試驗組總蛋白含量均比對照組有不同程度提高，且仔豬斷奶14 d和28 d均為添加0.2%發(fā)酵北蒼術組含量最高，與高士爭等研究結果一致[13]，仔豬總蛋白含量升高，機體免疫力提高，機體營養(yǎng)水平增強，抵御外界不良因素侵襲能力提高。

ALT和AST是動物體內重要轉氨酶，與蛋白質和氨基酸代謝密切相關，也是評價藥物毒副作用最佳指標。肝細胞受損害后，細胞變性、壞死，細胞膜破碎或細胞膜通透性增加，肝細胞中所含ALT和AST釋放到血液中，血液中ALT、AST活性增加。轉氨酶是氨基酸分解代謝過程中促進氨基轉換的一種酶，可參與蛋白質的合成和分解代謝。陳玉春等研究表明，在鯉魚飼料中添加中草藥可降低其血清中ALT、AST活力，但差異不顯著[14]； 陳曉明等研究發(fā)現，在斷奶仔豬飼料中添加中草藥渣可顯著增加其血清中 ALT、AST活力[15]；李清宏等研究發(fā)現，在仔豬飼料中添加中草藥復方（枳實、蒼術、木香、陳皮、山楂等12味中草藥）可顯著提高其血清中AST活力，但對ALT活力影響不顯著[16]。本試驗結果表明，在試驗1～14 d，添加發(fā)酵北蒼術組血清中ALT和AST含量與對照組相比差異不顯著；在試驗1～28 d，添加0.2% 發(fā)酵蒼術與對照組相比血清中ALT含量顯著降低，而對血清中AST含量無顯著影響，與上述研究結果相似，表明復方中草藥制劑促進早期斷奶仔豬蛋白質合成酶產生，可提高血清中蛋白質合成酶水平，促進蛋白質合成，最適添加比例為0.2%。

尿素氮是機體蛋白質代謝終產物之一，反映飼料蛋白利用情況。 血清中尿素氮含量下降說明蛋白質分解速度降低，蛋白質沉淀加強[17-18]。Borg等研究表明，血清尿素氮濃度可準確反映動物體內蛋白質代謝和氨基酸間平衡狀況，氨基酸平衡良好時血清尿素濃度下降[19]。Coma等研究發(fā)現，肌肉組織增長與血清尿素氮濃度呈顯著負相關[20]，董國忠等和陳代文等研究也發(fā)現，血清尿素氮濃度與斷奶仔豬肌肉增長或日增重呈負相關[21-22]。因此，尿素氮水平可反映仔豬生長表現、體內蛋白質合成、飼糧粗蛋白質利用效率。試驗組斷奶仔豬血清中尿素氮含量相對于對照組有所提高，說明在飼糧中添加發(fā)酵北蒼術促進蛋白質在斷奶仔豬體內分解代謝，改善斷奶仔豬體內氨基酸平衡狀態(tài)，降低除尿素氮以外含氮化合物合成或增加體內含氮物質分解，降低氮沉積，尿素氮含量在正常范圍內提高。因此，仔豬日糧中添加發(fā)酵蒼術未損害仔豬腎功能。

飼料中添加0.2%發(fā)酵北蒼術可提高斷奶仔豬血清中IgA、IgG、IgM、TP和ALB含量，降低血清中ALT含量，提高仔豬自身免疫力，緩解斷奶應激，促進仔豬自身免疫機能完善。

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Effect of fermentedAtractylodes chinensison immune and biochemical indexes of weaned piglets/

WANG Lijun,ZHAO Wenwen,YAO enyue,LIU Shuai,DIAO Xinping
(School of Animal Science and Technology,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China)

This experiment was conducted to study the effects of fermented Atractylodes chinensis on immune and biochemical indices of weaned piglets.A total of 96(Landrace×Yorkshire)28-day-old weaned piglets with an average body weight of(7.0±0.5)kg were randomly allocated into six groups with four replicates in each group and four piglets in each replicate.The test period was 35 days,of which the pre-test period was 7 d and the formal period was 28 days.Piglets in group Ⅳ(control group)were fed a basal diet,groupsandwere fed a basal diet supplemented with 0.035%antibiotic(the mixture of colistin sulfat and bacitracin zine 1：1)and 0.2%unfermentedAtractylodes chinensis,respectively.And those in groups Ⅳ toⅣwere fed the basal diet supplemented with 0.1%,0.2%and 0.3%fermentedAtractylodes chinensis,respectively.The results showed as follows：Ⅳ On 1 to 14 days of experiments,compared with the control group,the content of IgG increased by 19.1%(p＜0.05)and the content of ALT and AST decreased(P＞0.05).Compared with the control group,the content of IgA,IgM,total protein(TP)and albumin(ALB)in 0.3%fermentedAtractylodes chinensisgroup increased by 6.4%,20.5%,12.1%and 5.7%,respectively.ⅣAt 1 to 28 days of experiments,the contents of IgA,IgM,TP and ALB in the 0.2%fermented Atractylodes chinensis group were improved 9.9%,7.7%,20.9%and 15.6%,respectively.The content of ALT in 0.2%fermented ofAtractylodes chinensisgroup decreased by 25.6%compared with the control group,while there was no significant difference in AST and BUN(P＞0.05).In conclusion,diet supplemented with fermented Atractylodes chinensis could significantly improve the immunity of weaned piglets,compared with the control and unfermentedAtractylodes chinensisgroups.Furthermore,the result suggested that the optimal dose of fermentedAtractylodes chinensisin diet was 0.3%during earlier experimental stage.While,during the last time of the trial,the optimal adding amount was 0.2%.In summary,added fermented fermentedAtractylodes chinensisto diets of weaned piglets can enhance the weaned piglet immunity,improve growth performance,which the efficacy is similar to antibiotics.This study provided a reference for antibiotics the instead of the fermentation of Chinese herbal feed additives for piglet production.

fermentedAtractylodes chinensis;weaned piglet;immune index;biochemical index

S816

A

1005-9369（2017）10-0035-07

王利軍,趙文文,么恩悅,等.發(fā)酵北蒼術對斷奶仔豬血清免疫和生化指標的影響[J].東北農業(yè)大學學報,2017,48(10)：35-41.

Wang Lijun,Zhao Wenwen,Yao enyue,et al.Effect of fermented Atractylodes chinensis on immune and biochemical indexes of weaned piglets[J].Journal of Northeast Agricultural University,2017,48(10)：35-41.(in Chinese with English abstract)

216-12-07

黑龍江省科技廳對外合作攻關項目（WB13B101）

王利軍（1988-），女，博士研究生，研究方向為動物營養(yǎng)。E-mail：645720037@qq.com

*通訊作者：刁新平，副教授，研究方向為動物營養(yǎng) 。E-mail：diaoxp63@163.com