董一蕾，許嘯，張旭，高同雨，劉勇，王加利，姬瑞芳，全慶華，武雅娟，劉永剛*

(1.北京中醫(yī)藥大學，北京 100102；2.北京市門頭溝區(qū)國家生態(tài)修復科技綜合示范基地，北京 102300)

·基礎研究·

HPLC測定北京妙峰山玫瑰花中蘆丁的含量△

董一蕾1，許嘯1，張旭1，高同雨2，劉勇1，王加利1，姬瑞芳1，全慶華1，武雅娟2，劉永剛1*

(1.北京中醫(yī)藥大學，北京 100102；2.北京市門頭溝區(qū)國家生態(tài)修復科技綜合示范基地，北京 102300)

目的采用高效液相色譜法測定北京妙峰山玫瑰花中蘆丁的含量。方法超聲提取法，色譜柱為Agilent zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測波長為310 nm，柱溫為25 ℃，流動相為0.2%冰醋酸-乙腈(90∶10)，流速為0.8 mL·min-1。結果北京妙峰山玫瑰花中蘆丁的含量為1.254 9 mg·g-1。結論該方法簡便、快速、準確、重復性好，適用于玫瑰花中蘆丁的含量測定。

高效液相色譜；蘆丁；玫瑰花；妙峰山

玫瑰Rosarugosa是薔薇科植物，小灌木，高1～2 m，其花朵中含有多種生物活性成分，是民間常用的中藥材，其藥理作用有理氣調經(jīng)、鎮(zhèn)靜安神、和血養(yǎng)血等[1-3]。北京妙峰山的玫瑰花以其花朵飽滿、顏色艷麗、香氣濃郁而獨特，在國內外享有較高名譽，妙峰山玫瑰產于北京市門頭溝區(qū)的妙峰山，此處海拔高、氣候涼爽、晝夜溫差大，自然條件得天獨厚，具有500多年的玫瑰花栽培歷史，玫瑰花已成為北京特色植物資源[4-6]。

研究表明，玫瑰花中主要活性成分為黃酮，黃酮類成分是具有開發(fā)前景的天然抗氧化劑，但是目前對玫瑰花中黃酮類具體成分的研究報道較少[7]，本文以蘆丁為指標，建立了用高效液相色譜法測定妙峰山玫瑰花中蘆丁含量的方法，為北京市特色農業(yè)——妙峰山玫瑰的發(fā)展提供了參考，也為玫瑰藥物的深度開發(fā)提供了實驗依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 材料與試劑

北京市門頭溝區(qū)妙峰山玫瑰種植地干燥玫瑰花花瓣，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學教授劉勇鑒定為玫瑰花RosarugosaThunb.；乙腈(色譜純)、冰醋酸(色譜純)、甲醇(分析純)，由北京高華偉業(yè)食品添加劑有限公司提供；蘆丁對照品(中國食品藥品檢定研究院)，純度>98%；去離子水。

1.2 儀器

日本島津公司20A系列高效液相色譜儀；LC solution工作站；KQ-100型超聲波清洗儀。

2 樣品測定

2.1 色譜條件

Agilent zorbax SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫：25 ℃，流動相為0.2%冰醋酸-乙腈(90∶10)，檢測波長為310 nm，流速為0.8 mL·min-1，進樣量為10 μL。

2.2 供試品溶液的制備

取妙峰山干燥玫瑰花瓣1 g，精密稱定，精密加入甲醇50 mL，超聲處理40 min，提取蘆丁，搖勻，過濾，取濾液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。色譜圖見圖1。

圖1 玫瑰花HPLC圖

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取2.030 mg蘆丁對照品，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，得到0.203 mg·mL-1對照品溶液。色譜圖見圖2。

圖2 蘆丁HPLC圖

2.4 線性關系考察

在2.1色譜條下依次進樣1、2、5、10、20 μL蘆丁對照品溶液。以蘆丁峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，進行回歸計算，得蘆丁回歸方程，Y=1 001 639X-58 394，r=0.999 9。結果表明，在給定的范圍內，蘆丁線性關系良好。

2.5 精密度試驗

精密吸取對照品，在2.1色譜條件下重復進樣5次，每次10 μL，計算得到蘆丁峰面積RSD=0.89%，說明精密度良好。

2.6 重復性試驗

精密稱取妙峰山玫瑰花5份，按2.2項下方法制備供試品，按2.1項下色譜條件依次進行測定，計算得到蘆丁平均含量的RSD=2.25%，說明本實驗重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品，分別在0、2、4、6、8 h進樣10 μL，測定蘆丁峰面積，結果得到蘆丁峰面積的RSD=2.30%，說明本實驗穩(wěn)定性較好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的與重復性試驗同一批的玫瑰花9份，每份0.50 g，精密稱定，加入蘆丁對照品適量，按照2.2項下方法制備供試品溶液，按照2.1項下色譜條件進樣測定，以外標法計算蘆丁的量，見表1。

表1 蘆丁加樣回收率試驗結果

2.9 樣品測定結果

取妙峰山干燥玫瑰花花瓣3批，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣，以外標法計算含量，結果3批樣品中的蘆丁含量分別為1.25、1.23、1.26 mg·g-1。

3 結論

3.1 檢測波長的選擇

本實驗選擇310 nm作為檢測波長，在該波長下色譜峰對稱、干擾少。

3.2 蘆丁提取方法的選擇

對黃酮成分的提取方法有加熱回流提取法[8]和超聲波提取法[9-12]，超聲波提取法與加熱回流提取法所得的蘆丁含量相當。但采用超聲波法從玫瑰花中提取蘆丁，無需加熱，樣品處理方法簡單、快速，大大縮短了提取時間。故本文采用加入甲醇超聲處理40 min的提取方法。

4 討論

文獻報道，玫瑰花中主要含黃酮類成分，具有廣泛的藥理活性，有預防心血管疾病、防癌、抗癌、調節(jié)免疫、抗衰老、抗菌殺菌、抗病毒、抗糖尿病、吸收紫外輻射、止咳、祛痰、瀉下、解痙、提高記憶力、抗過敏、活血化疲、利膽及肝臟保護等諸多藥理作用及功效[1，7]。關于黃酮類指標性成分的篩選報道相對較少，目前，通常采用紫外分光光度計法來測定玫瑰花中黃酮的含量[8]，尚未見對妙峰山玫瑰花中黃酮含量測定的報道。故本課題選擇蘆丁作為指標成分，對妙峰山玫瑰花進行指標性成分控制研究，為進一步研究提供參考。

本實驗通過甲醇超聲波提取法提取北京妙峰山干燥玫瑰花花瓣中蘆丁成分，并采用高效液相色譜法檢測其中蘆丁含量，具有提取完全、效率高、能耗低、所需時間短、待測成分損失少、測定結果準確等特點。方法準確可靠，重現(xiàn)性好，可用于玫瑰花中蘆丁含量測定，具有很好的實用價值，對促進該藥材的進一步推廣具有重大意義。

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DeterminationofContentofRutininRoseFlowersofMiaofengMountaininofBeijingbyHPLC

DONG Yilei1，XU Xiao1，ZHANG Xu1，GAO Tongyu2，LIU Yong1，WANG Jiali1，JI Ruifang1，QUAN Qinghua1，WU Yajuan2，LIU Yonggang1*

(1.BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China；2.TheScienceandTechnologyofEcologyRestorationStateComprehensiveModelBaseofBeijingMentougouDistrict,Beijing102300，China)

Objective：To determine the content of rutin in rose flowers of Miaofeng Mountain in Beijing by HPLC.MethodsThe samples were extracted by ultrasonic，column chromatography of Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used in the study，the detection wavelength was 310 nm，the column temperature was 25 degrees，the mobile phase was 0.2% acetic acid acetonitrile (90∶10)，elution rate was 0.8 mL·min-1.ResultsThe content of rutin in rose flowers of Miaofeng Mountain in Beijing was 1.254 9 mg·g-1.ConclusionThe method is simple，rapid，accurate and reproducible.So it is suitable for the determination of the content of rutin in rose flowers.

HPLC；rutin；rose flowers；Miaofeng Mountain

北京市科委課題(Z151100001415009)；北京中醫(yī)藥大學大學生教育課題(BJGJ1633)

*

劉永剛，副教授，研究方向：中藥物質基礎研究及質量標準；E-mail：liuyg0228@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.10.011

2017-02-28)