張 花 李大彪 邢媛媛 孫 梅

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特 010018)

脂肪酸對奶牛乳腺上皮細胞乳蛋白和乳脂合成相關(guān)基因表達量的影響

張 花 李大彪*邢媛媛 孫 梅

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特 010018)

本試驗旨在探尋促進奶牛乳腺上皮細胞(BMECs)乳蛋白和乳脂合成的短鏈脂肪酸(乙酸、β-羥丁酸)和長鏈脂肪酸(油酸、亞油酸、亞麻酸)的組合添加模式，為調(diào)控乳成分合成提供理論依據(jù)。BMECs經(jīng)分離、純化后，選取第2代細胞，分為5組，對照組不添加脂肪酸，Ⅰ組和Ⅱ組添加的乙酸、β-羥丁酸濃度比例均為2.0(9.60 mmol/L)∶1.0(4.80 mmol/L)，油酸、亞油酸、亞麻酸的濃度比例分別為2.0(17.30 μmol/L)∶13.3(115.05 μmol/L)∶1.0(8.65 μmol/L)和9.6(75.20 μmol/L)∶7.4(58.00 μmol/L)∶1.0(7.80 μmol/L)；Ⅲ組和Ⅳ組添加的乙酸、β-羥丁酸的濃度比例均為1.0(7.20 mmol/L)∶1.0(7.20 mmol/L)，油酸、亞油酸、亞麻酸的濃度比例分別為2.0∶13.3∶1.0和9.6∶7.4∶1.0，各組添加的短鏈脂肪酸(SCFA)和長鏈脂肪酸(LCFA)總濃度為14.541 mmol/L，每組3個重復(fù)。培養(yǎng)24 h后，檢測細胞相對增殖率(RGR)、甘油三酯(TAG)的合成量以及乳蛋白和乳脂合成相關(guān)基因的表達量。結(jié)果表明：1)試驗組BMECs RGR及TAG的合成量均顯著高于對照組(P<0.05)；Ⅰ組RGR最高，TAG合成量最多。2)與對照組相比，Ⅱ組顯著提高了核糖體蛋白S6激酶1(S6K1)、κ-酪蛋白(CSN3)基因的表達量(P<0.05)；Ⅳ組顯著提高了CSN3、蛋白激酶B(AKT)、S6K1、真核翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1(4EBP1)基因的表達量(P<0.05)；試驗組信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5(STAT5)基因的表達量顯著降低(P<0.05)。3)與對照組相比，試驗組二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶2(DGAT2)基因的表達量顯著提高(P<0.05)，脂肪酸合成酶(FASN)基因的表達量顯著降低(P<0.05)。綜上所述，在培養(yǎng)液中添加7.20 mmol/L乙酸、7.20 mmol/L β-羥丁酸、75.20 μmol/L油酸、58.00 μmol/L亞油酸、7.80 μmol/L亞麻酸對BMECs乳蛋白和乳脂合成相關(guān)基因的表達量有較好的促進作用。

奶牛乳腺上皮細胞；短鏈脂肪酸；長鏈脂肪酸；乳蛋白；乳脂

乳蛋白和乳脂是牛奶質(zhì)量的關(guān)鍵指標。乙酸和β-羥丁酸來源于瘤胃發(fā)酵，它們是奶牛乳腺上皮細胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)脂肪酸從頭合成的主要前體物，約50%的C16脂肪酸和長鏈脂肪酸(long chain fatty acids,LCFA)來源于飼料和體脂分解[1]?？讘c洋[2]在BMECs中添加乙酸和β-羥丁酸，結(jié)果表明提高了乙酰輔酶A羧化酶(ACC)和脂肪酸合成酶(FASN)基因的表達量及甘油三酯(triglyceride，TAG)的合成量，同時也提高了哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶2(DGAT2)基因的表達量。梁夢瑤等[3]研究結(jié)果表明，低濃度的油酸促進BMECsACC和FASN基因的表達，進而促進乳脂的合成。李紅磊[4]研究表明，當油酸、亞油酸、亞麻酸的濃度比例為2.0(22.20 μmol/L)∶13.3(147.70 μmol/L)∶1.0(11.10 μmol/L)時，上調(diào)了BMECs αS1-酪蛋白(CSN1S1)、κ-酪蛋白(CSN3)和mTOR基因的表達量。由此可見，在泌乳過程中，脂肪酸起到重要的調(diào)控作用，對乳蛋白和乳脂的合成具有重要影響。Mach等[5]研究表明，飼糧中添加油菜籽、大豆、亞麻籽后，乳脂和乳蛋白的含量下降，產(chǎn)奶量增加。因此，可以假設(shè)乳脂合成前體物(MFP)中不飽和脂肪酸的比例可以調(diào)乳成分合成。綜觀國內(nèi)外文獻報道，在牛奶的分泌機制和營養(yǎng)調(diào)控乳成分含量方面取得了一些進展，但是營養(yǎng)素調(diào)控乳蛋白、乳脂合成分子生物學(xué)機制和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑仍然不清楚。單一脂肪酸的添加對BMECs乳蛋白和乳脂合成影響的研究最多，而短鏈脂肪酸(short chain fatty acids，SCFA)和LCFA的混合添加對BMECs乳成分合成影響的研究較少。因此，本試驗混合添加不同比例的乙酸、β-羥丁酸、油酸、亞油酸、亞麻酸，研究其對BMECs乳蛋白和乳脂合成相關(guān)基因表達量的影響，旨在探尋促進乳蛋白和乳脂合成的脂肪酸組合添加模式，為調(diào)控乳成分合成提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1BMECs的分離與純化

選取體況良好、處于泌乳高峰期的中國荷斯坦奶牛進行乳腺組織取樣，剪取含有大量腺泡的

乳腺組織約55 g放于含有雙抗的磷酸鹽緩沖液(PBS)中，通過Ⅱ型膠原酶消化獲得原代BMECs。放于37 ℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)原代細胞，大約1周細胞長滿培養(yǎng)瓶底部的80%左右時，利用胰酶對成纖維上皮細胞和乳腺上皮細胞的消化時間不同來純化BMECs并傳代。以第2代的BMECs為試驗對象。

1.2試驗培養(yǎng)基

試驗培養(yǎng)基為添加氫化可的松、谷氨酰胺、胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白硒鈉、催乳素的DMEM/F12的培養(yǎng)基，試劑均購自GIBCO公司。

1.3試驗設(shè)計

本試驗采用單因素完全隨機試驗設(shè)計。脂肪酸添加濃度比例參考李紅磊[4]和塔娜等[6]的研究結(jié)果設(shè)置，當乙酸∶β-羥丁酸的濃度比例為2.0∶1.0、油酸∶亞油酸∶亞麻酸的濃度比例為2.0∶13.3∶1.0時，對乳脂合成相關(guān)基因的表達有較好的促進作用；當乙酸∶β-羥丁酸的濃度比例為1.0∶1.0、油酸∶亞油酸∶亞麻酸的濃度比例為9.6∶7.4∶1.0時，對乳蛋白合成相關(guān)基因的表達有較好的促進作用。因此，依據(jù)SCFA(乙酸、β-羥丁酸，總添加量為14.4 mmol/L)和LCFA(油酸、亞油酸、亞麻酸，總添加量為141 μmol/L)的總添加量相同，各脂肪酸間的比例不同的原則，交叉設(shè)計了5組，試驗設(shè)計見表1。

表1 試驗設(shè)計

1.4測定指標與方法

1.4.1 細胞活力的檢測

采用四甲基偶氮唑鹽(thiazoly blue tetrazolium bramide,MTT)比色法檢測BMECs的細胞活力。每孔接種細胞懸浮液的密度為1×104個，將96孔板置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞生長至培養(yǎng)瓶底部的80%左右時，添加不同濃度比例的乙酸、β-羥丁酸、油酸、亞油酸、亞麻酸的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，放置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，每組均設(shè)3個重復(fù)；培養(yǎng)結(jié)束前4 h，每孔加入MTT(5 mg/mL)20 μL；4 h后棄上清，每孔加入二甲基亞砜(DMSO)100 μL，振蕩10 min后，用全自動酶標儀檢測490 nm下吸光度值(OD490 nm)。

相對增殖率(relative growth rate，RGR)=
試驗組OD490 nm/對照組OD490 nm。

1.4.2 TAG合成量的測定

接種第2代BMECs懸浮液于75 cm2培養(yǎng)瓶中，每瓶吸取10 mL細胞懸浮液，每瓶細胞約為8×105個，放置在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞生長至培養(yǎng)瓶底部的80%左右時，添加不同乙酸、β-羥丁酸、油酸、亞油酸、亞麻酸濃度比例的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，每組均設(shè)3個重復(fù)，用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)將細胞消化后離心8 min，棄上清，用PBS清洗1次，采用TAG試劑盒檢測BMECs內(nèi)TAG的合成量。

1.4.3 乳蛋白和乳脂合成相關(guān)基因表達量

將第2代的BMECs置于37 ℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞長滿約70%時，添加不同濃度比例的乙酸、β-羥丁酸、油酸、亞油酸、亞麻酸的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每組設(shè)3個重復(fù)，培養(yǎng)24 h后，收集細胞，提取RNA(試劑盒為RNA isoplus，TaKaRa公司)，反轉(zhuǎn)錄(試劑盒為prime scriptTMRT reagent kit，TaKaRa公司)，應(yīng)用RT-qPCR法(試劑盒購自TaKaRa公司)，檢測乳蛋白合成的相關(guān)基因(CSN1S1、CSN3)、信號通路相關(guān)基因[mTOR、轉(zhuǎn)錄激活因子5(STAT5)、真核翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1(4EBP1)、核糖體蛋白S6激酶1(S6K1)、蛋白激酶B(AKT)]、乳脂合成的相關(guān)基因(ACC、FASN、DGAT2)、乳脂合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子[過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白1(SREBP1)]的表達量。試驗重復(fù)3次。本試驗內(nèi)參基因為甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)。引物序列及參數(shù)見表2。各基因表達量用2-△△Ct值表示[6]。

表2 引物序列及參數(shù)

續(xù)表2基因Genes引物序列Primersequences(5'—3')GenBank登錄號GenBankaccessionNo.二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶2DGAT2F:5'-CATGAAGACCCTCATAGCCG-3?倕R::5'-ACCAGCCAGGTGAAGTAGAGC-3'NM_205793過氧化物酶體增殖物激活受體γPPARγF:5'-ATGTCTCATAATGCCATCAGGTT-3'R:5'-GATAACAAACGGTGATTTGTCTGTC-3'NM_181024固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白1SREBP1F:5'-CGCTCTTCCATCAATGACAA-3'R:5'-TTCAGCGATTTGCTTTTGTG-3'NM_001113302

F:上游引物；R:下游引物。

F: forward primer; R: reverse primer.

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用Excel 2007進行計算和整理試驗數(shù)據(jù)，實時定量PCR試驗結(jié)果采用2-△△Ct法進行相對定量數(shù)據(jù)分析。利用SAS 9.0軟件的ANOVA程序?qū)?shù)據(jù)進行方差分析，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1不同濃度比例脂肪酸對BMECsRAG和TAG合成量的影響

由表3可知，試驗組BMECs的RGR和TAG合成量都顯著高于對照組(P<0.05)。Ⅰ組RGR和TAG合成量顯著高于其他試驗組(P<0.05)，Ⅱ組和Ⅳ組顯著低于Ⅲ組(P<0.05)，Ⅱ組和Ⅳ組之間無顯著差異(P>0.05)。

2.2不同濃度比例的脂肪酸對BMECs乳蛋白合成相關(guān)基因表達量的影響

由表4可知，與對照組相比，Ⅰ組顯著降低了BMECsCSN1S1、CSN3和STAT5基因的表達量(P<0.05)，而mTOR和4EBP1基因表達量顯著提高(P<0.05)；Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組顯著上調(diào)了CSN3和S6K1基因的表達量(P<0.05)，而STAT5基因表達量顯著降低(P<0.05)；Ⅲ組和Ⅳ組AKT和4EBP1基因的表達量顯著提高(P<0.05)；Ⅳ組CSN1S1基因表達量顯著高于Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組(P<0.05)；Ⅱ組mTOR和4EBP1基因的表達量顯著降低(P<0.05)。

表3 不同濃度比例脂肪酸對BMECs RAG和TAG合成量的影響

同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

Values in the same row with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no small letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.3不同濃度比例的脂肪酸對BMECs乳脂合成相關(guān)基因表達量的影響

由表5可知，與對照組相比，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組ACC和試驗組DGAT2基因的表達量顯著高于對照組(P<0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組ACC基因的表達量顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05)，Ⅱ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅱ組和Ⅳ組DGAT2基因的表達量顯著高于Ⅰ組和Ⅲ組(P<0.05)，Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；試驗組FASN和SREBP1基因的表達量顯著下降(P<0.05)；Ⅰ組PPARγ基因的表達量顯著上升(P<0.05)，而其他試驗組則顯著降低(P<0.05)。

3 討 論

3.1不同濃度比例的脂肪酸對BMECs增殖的影響

脂肪酸是乳腺組織中的一種重要的營養(yǎng)素，對BMECs的生長增殖具有一定的作用。齊利枝等[7]研究表明,低濃度的乙酸對BMECs的增殖有較好的促進作用，而高濃度則抑制BMECs的增殖。孫曉菊[8]研究表明，當油酸的濃度為50～400 μmo/L、亞油酸的濃度為25～100 μmol/L時，對BMECs的增殖有促進作用，但是當油酸和亞油酸的濃度分別達到800和200 μmol/L時，BMECs的增殖受到抑制；低濃度的亞油酸促進BMECs的增殖，而高濃度則表現(xiàn)出抑制作用。Yonezawa等[9]研究表明，當油酸和亞油酸的濃度均為100 μmol/L時，促進BMECs的增殖。有研究表明，當油酸濃度高于0.20 mmol/L時，細胞增殖受到了抑制[10-11]。AKT有助于細胞的存活和增殖[12]。本試驗中，AKT基因的表達量與RGR的變化一致,相關(guān)作用機理有待進一步研究。

表4 不同濃度比例的脂肪酸對BMECs乳蛋白合成相關(guān)基因表達量的影響

表5 不同濃度比例的脂肪酸對BMECs乳脂合成相關(guān)基因表達量的影響

3.2不同濃度比例的脂肪酸對BMECs乳蛋白合成相關(guān)基因表達量的影響

Janus激酶2(JAK2)/STAT5信號通路的主要調(diào)控機制是結(jié)合在受體上的STAT5被JAK磷酸化修飾，靶基因與以二聚體的形式進入細胞核的活化STAT5結(jié)合，從而調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄水平[13]。Bionaz等[14]的研究發(fā)現(xiàn)，泌乳階段STAT5和Janus激酶(JAK)的基因表達量沒有顯著變化，表明JAK/STAT5對乳蛋白合成的調(diào)節(jié)作用較小。本試驗中，試驗組STAT5基因表達量均顯著低于對照組，Ⅲ組和Ⅳ組4EBP1和S6K1基因表達量顯著高于對照組，而且STAT5基因表達量的變化規(guī)律與CSN1S1和CSN3的基因表達量并不一致，這提示乳蛋白基因表達量的變化是mTOR信號通路和JAK2/STAT5信號通路綜合作用的結(jié)果。CSN1S1、CSN3是2個主要的酪蛋白基因，其對BMECs乳蛋白的合成有很強的相關(guān)性[15]。Yonezawa等[16]研究發(fā)現(xiàn)，當油酸和亞油酸的濃度為400 μmol/L時，對CSN1S1的基因表達量有促進作用。Pauloin等[17]研究表明，在鼠的乳腺上皮細胞中添加不飽和脂肪酸降低CSN3基因的表達量。本試驗研究得出，對于CSN1S1基因的表達量，Ⅳ組高于對照組，但差異不顯著，Ⅱ組CSN3基因的表達量最高，表明油酸、亞油酸、亞麻酸的濃度比例為9.6∶7.4∶1.0時，對CSN1S1、CSN3基因的表達有顯著的促進作用。mTOR是一種非典型的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶[18-19]，除了內(nèi)分泌信號外，mTOR信號途徑還能調(diào)節(jié)乳蛋白合成、細胞能量水平和乳腺氨基酸的利用[20]。此信號通路上游受到AKT磷酸化的正調(diào)節(jié)，下游可促進S6K1和4EBP1的磷酸化調(diào)節(jié)翻譯起始，下游的這2條通路是2條平行的信號通路，各自控制特定亞基的mRNA翻譯過程[21]；同時SREBP1作用的靶基因ACC和FASN的表達受到mTOR信號通路的抑制，表明mTOR參與了脂肪酸的從頭合成[22]。本試驗研究得出，Ⅰ組和Ⅲ組的mTOR和4EBP1基因表達量均顯著高于對照組，說明油酸、亞油酸、亞麻酸的濃度比例為2.0∶13.3∶1.0時，上調(diào)了mTOR、4EBP1和S6K1基因的表達量，乙酸、β-羥丁酸濃度比例為2.0∶1.0時，對S6K1基因的表達有抑制作用?；旌现舅嵴{(diào)控BMECs乳蛋白和乳脂合成的機理有待進一步研究。

3.3不同濃度比例的脂肪酸對BMECs乳脂合成相關(guān)基因表達量及TAG合成量的影響

AKT與mTOR信號通路不僅調(diào)控乳蛋白合成相關(guān)基因的表達，同時促進固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白(SREBP)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，并進一步調(diào)控其靶基因ACC、FASN的表達從而影響乳脂的合成，ACC和FASN是乳脂從頭合成中2個重要的基因[23]。Ma等[24]研究表明，BMECs中添加100 nmol/L，SREBP1的siRNA、ACC和FASN的mRNA水平下降。本試驗結(jié)果得出，試驗組AKT和ACC基因的表達量均高于對照組，而FASN和SREBP1基因的表達量下降，這表明加入混合脂肪酸后，AKT信號通路負反饋調(diào)節(jié)SREBP1，SREBP1正反饋調(diào)節(jié)FASN,可能會負反饋調(diào)節(jié)ACC。大量的研究表明，SREBP1和PPARγ是調(diào)節(jié)乳脂合成相關(guān)基因重要的核受體和轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，而且PPARγ可能參與調(diào)控SREBP1基因的表達。在脂肪合成細胞調(diào)控因子通路中PPARγ處于樞紐位置，可以通過影響脂肪酸的攝取、轉(zhuǎn)運、從頭合成和酯化過程從而調(diào)控基因的表達[25]。本試驗得出，Ⅰ組PPARγ基因表達量顯著高于對照組，其他組顯著低于對照組，從而證明PPARγ可能參與了SREBP1的調(diào)控，同時受到AKT和mTOR的調(diào)控。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中DGAT2是一種完整的細胞微粒體酶，在催化TAG合成的過程中發(fā)揮著重要作用，在TAG合成過程中，它是唯一的限速酶[26]。本試驗得出，Ⅱ組和Ⅳ組DGAT2基因的表達量都高于對照組，且其TAG合成量也顯著高于對照組，這表明DGAT2對TAG的合成具有調(diào)控作用。乳脂大部分由TAG組成，來源于BMECs的乳糜微粒，TAG的合成量可以直接反映BMECs乳脂的合成狀況。脂肪酸通過上述信號通路的調(diào)節(jié)合成TAG。崔瑞蓮[27]研究指出，BMECs的活力不受抑制的條件下(脂肪酸添加濃度為0～10 μmol/L)，TAG的合成與各十八碳脂肪酸添加濃度呈正相關(guān)。塔娜等[6]研究表明，適宜的乙酸和β-羥丁酸的濃度比例(2.0∶1.0和4.0∶1.0)對BMECs中TAG的合成和乳脂合成相關(guān)基因的表達有較好的促進作用。Sheng等[28]研究指出，油酸、亞油酸和亞麻酸的添加濃度比例為2.0∶13.3∶1.0時對BMECs的TAG合成有較好的促進作用。本試驗結(jié)果表明，試驗組TAG合成量顯著高于對照組，表明添加適宜濃度比例的混合脂肪酸對BMECs內(nèi)TAG的合成有促進作用。

4 結(jié) 論

乙酸、β-羥丁酸、油酸、亞油酸、亞麻酸的濃度分別為7.20 mmol/L、7.20 mmol/L、75.20 μmol/L、58.00 μmol/L、7.80 μmol/L時，提高了CSN1S1、CSN3、AKT、4EBP1、S6K1、DGAT2基因的表達量，對BMECs乳蛋白和乳脂的合成有較好的促進作用。

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*Corresponding author, associate professor, E-mail： dkyldb@imau.edu.cn

EffectsofFattyAcidsonExpressionLevelsofGenesInvolvedinMilkProteinandMilkFatSynthesisinBovineMammaryEpithelialCells

ZHANG Hua LI Dabiao*XING Yuanyuan SUN Mei

(CollegeofAnimalScience,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Hohhot010018,China)

The aim of this study was to explore combined supplemental model of short chain fatty acids (acetic acid, β-hydroxybutyric acid) and long chain fatty acids (oleic acid, linoleic acid, linolenic acid) to promote milk protein and milk fat synthesis in bovine mammary epithelial cells (BMECs)， to provide theoretical basis for the regulation of synthesis of milk composition. BMECs were separated and purified, and the second generation of cells was selected and divided into 5 groups with 3 replicates per group. No fatty acid was added in control group; in groups Ⅰ and Ⅱ, the concentration radio of supplied acetate acid and β-hydroxybutyric acid was 2.0 (9.60 mmol/L) ∶1.0 (4.80 mmol/L), however, the concentration radio of oleic acid, linoleic acid and linolenic acid was 2.0 (17.30 μmol/L) ∶13.3 (115.05 μmol/L) ∶1.0 (8.65 μmol/L) and 9.6 (75.20 μmol/L) ∶ 7.4 (58.00 μmol/L) ∶ 1.0 (7.80 μmol/L), respectively; in groups Ⅲ and Ⅳ, the concentration radio of acetate acid and β-hydroxybutyric acid was 1.0∶1.0, however, the concentration radio of oleic acid, linoleic acid and linolenic acid was 2.0∶13.3∶1.0 and 9.6∶7.4∶1.0, respectively. The total concentration of short chain fatty acids and long chain fatty acids was 14.541 mmol/L. After cultured for 24 h, relative growth rate (RGR), triglyceride (TAG) synthesis amount and expression levels of genes involved in milk protein and milk fat synthesis were measured. The results showed as follows: 1) RGR and TAG synthesis amount of BMECs in experimental groups were significantly higher as comparing with control group (P<0.05); RGR and TAG synthesis amount were the highest in group Ⅰ. 2) Compared with control group, expression levels of ribosomal protein S6kinase (S6K1) and κ-casein (CSN3) genes in group Ⅱ were significantly increased (P<0.05)； expression levels ofCSN3, protein kkinase B(AKT),S6K1 and eukaryotic initiation 4E binding protein (4EBP1) gene in group Ⅳ was significantly increased (P<0.05); expression level of signal transduction and transcriptional activation factor 5 (STAT5) gene in experimental groups was significantly decreased (P<0.05). 3) Compared with control group, expression level of diacylgycerol acyltransferase 2 (DGAT2) gene in experimental groups was significantly increased (P<0.05), and expression level of fatty acid synthase (FASN) gene was significantly decreased (P<0.05). In conclusion, expression levels of genes involved in milk protein and milk fat synthesis has a better effect when culture medium is added with 7.20 mmol/L acetate acid, 7.20 mmol/L β-hydroxybutyric acid, 75.20 μmol/L oleic acid, 58.00 μmol/L linoleic acid, and 7.80 μmol/L linolenic acid.[ChineseJournalofAnimalNutrition,2017,29(11)：4143-4150]

bovine mammary; short chain fatty acid; long chain fatty acid; milk protein; milk fat

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.11.038

S823

A

1006-267X(2017)11-4143-08

2017-04-18

國家自然科學(xué)基金(31360559)

張 花(1991—)，女，山西朔州人，碩士研究生，從事反芻動物營養(yǎng)生理及瘤胃微生態(tài)研究。E-mail： xiayeyuye@126.com

*通信作者：李大彪，副教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail：dkyldb@imau.edu.cn

(責任編輯 王智航)