王希春 朱電鋒 尹莉莉 李 玉 馮士彬 吳金節(jié)

(安徽農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，合肥 230036)

黨參多糖對仔豬生長性能、血清細胞因子及腸黏膜分泌型免疫球蛋白A含量的影響

王希春 朱電鋒 尹莉莉 李 玉 馮士彬 吳金節(jié)*

(安徽農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，合肥 230036)

本試驗旨在研究黨參多糖(CPP)對仔豬生長性能、血清細胞因子及腸黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量的影響。選取1日齡“杜×長×大”三元雜交仔豬60頭(6窩)，隨機分為3組，每組2個重復，每個重復10頭豬(公母各占1/2)。14日齡時開始試驗，3組仔豬分別飼喂仔豬代乳料(對照組)、仔豬代乳料+1%黨參多糖(低劑量組)、仔豬代乳料+2%黨參多糖(高劑量組)，所有仔豬21日齡斷奶，試驗期14 d。結(jié)果表明：與對照組相比，1)21日齡時，飼糧添加2%黨參多糖極顯著提高了仔豬的平均體重(P<0.01)；28日齡時，飼糧添加1%和2%黨參多糖顯著提高了仔豬的平均體重(P<0.05)。22～28日齡時，飼糧添加2%黨參多糖顯著提高了仔豬的平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)(P<0.05)。2)21日齡時，飼糧添加2%黨參多糖顯著提高了仔豬的血清γ-干擾素(IFN-γ)、白細胞介素-2(IL-2)和白細胞介素-6(IL-6)含量(P<0.05)；28日齡時，飼糧添加1%和2%黨參多糖顯著提高了仔豬的血清IL-2、白細胞介素-4(IL-4)和IL-6含量(P<0.05)。3)飼糧添加2%黨參多糖極顯著提高了仔豬的十二指腸、空腸和回腸黏膜SIgA含量(P<0.01)。由此可見，飼糧添加1%和2%黨參多糖能夠改善仔豬的生長性能，提高血清細胞因子和腸黏膜SIgA含量，其中添加2%黨參多糖的作用效果優(yōu)于1%黨參多糖。

黨參多糖；仔豬；生長性能；細胞因子；腸黏膜

黨參是我國傳統(tǒng)的補益藥材之一，常被作為人參的替代品，可用于脾肺氣虛、內(nèi)熱消渴、氣短心悸、食少便溏等的治療。多糖是黨參的活性成分，現(xiàn)代藥理學研究證實黨參多糖(Codonopsispilosulapolysaccharides，CPP)具有抗腫瘤、提高免疫力和抗疲勞等活性[1]。王敏等[2]研究發(fā)現(xiàn)，在D-半乳糖誘導的小鼠衰老模型中，黨參通過提高小鼠的血清白細胞介素-2(IL-2)含量，增強了小鼠的免疫功能，提高了其抗衰老能力。陳嘉嶼等[3]探討黨參多糖的抗腫瘤機制及其對外周血細胞因子的影響，結(jié)果顯示黨參多糖對荷瘤小鼠腫瘤有顯著抑制作用，并且顯著提高了血清細胞因子IL-2、白細胞介素-1β(IL-1β)、白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和γ-干擾素(INF-γ)含量。彭梅等[4]給小鼠灌服不同劑量的黨參多糖，結(jié)果顯示黨參多糖可顯著提高小鼠的體重增重率和食物利用率。也有研究表明，黨參提取物具有促進仔豬生長性能的作用[5]。分泌型免疫球蛋白A(SIgA)是腸道黏膜免疫系統(tǒng)的主要效應(yīng)分子，是體內(nèi)分泌量最多的免疫球蛋白。SIgA可以阻止微生物、病原體等黏附腸道，激活補體3(C3)旁路途徑，溶解細菌，增強單核細胞的殺菌活性[6]。目前關(guān)于黨參多糖對仔豬生長性能及免疫功能的影響還未見報道。本試驗通過在飼糧中添加不同劑量的黨參多糖，檢測其對仔豬生長性能、血清細胞因子和腸黏膜SIgA含量的影響，旨在研究黨參多糖對仔豬生長性能和免疫功能的作用效果，為今后黨參多糖在飼糧中的應(yīng)用提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗材料

“杜×長×大”三元雜交仔豬，由安徽省青陽縣五星畜牧種豬場提供。

黨參中藥材購自安徽亳州濟仁堂藥業(yè)有限公司；豬IFN-γ、IL-2、白細胞介素-4(IL-4)、IL-6的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒購自上?？婆d商貿(mào)有限公司；豬SIgA的ELISA試劑盒購于南京森貝迦生物有限公司；三氯甲烷、水飽和酚、異戊醇、無水乙醇、乙酸鈉、乙酸鉀均購自無錫展望化工有限公司；離心管、槍頭購自美國Axygen Biosciences公司。

BSD-100電熱恒溫培養(yǎng)箱，購自上海博訊醫(yī)療設(shè)備廠；TD-100小型提取濃縮機組，購自浙江森力機械科技有限公司；MK3型酶聯(lián)免疫分析儀，購自美國Thermo有限公司；TGL-18R臺式高速離心機，購自珠海黑馬醫(yī)學儀器有限公司。

1.2黨參多糖的制備

稱取6 kg黨參，去除雜質(zhì)，清洗3次，瀝干水分，按照料液比為1∶10(質(zhì)量體積比)的比例加入60 L 84%的酒精，提取3次，每次1 h，去除油脂，烘干、稱重；按照料液比為1∶20(質(zhì)量體積比)的比例加入純水，超聲波振蕩提取40 min，將提取液轉(zhuǎn)移至濃縮罐中進行濃縮，經(jīng)濃縮→真空冷凍干燥→制成粉末。制備完成后采用苯酚-硫酸法測得1 g生藥約含0.11 g黨參多糖粉末。

1.3試驗設(shè)計和飼養(yǎng)管理

選取健康的1日齡“杜×長×大”三元雜交仔豬60頭(6窩)，隨機分為3組，每組2個重復，每個重復10頭豬(公母各占1/2)。所有仔豬于7日齡時誘食代乳料(其組成及營養(yǎng)水平見表1)；14日齡時開始試驗，3組仔豬分別飼喂仔豬代乳料(對照組)、仔豬代乳料+1%黨參多糖(低劑量組)、仔豬代乳料+2%黨參多糖(高劑量組)；21日齡時斷奶，斷奶前后飼糧不變。常規(guī)飲水，消毒及免疫程序嚴格按照豬場管理方案進行。試驗期14 d。

表1 仔豬代乳料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 Premix provided the following per kg of the diet:VA 7 000 IU，VD32 000 IU，VE 10 IU，VK32.2 mg，VB12.375 mg，VB24.8 mg，VB60.15 mg，VB120.017 5 mg，煙酸 nicotinic acid 16 mg，泛酸鈣 pantothenic calcium 5.75 mg，葉酸 folic acid 0.85 mg，生物素 biotin 0.017 5 mg，賴氨酸 lysine 0.95 mg，抗氧化劑 antioxidant 0.045 mg，酶制劑 enzyme preparation 1 100 mg，香味劑 flavour agents 45 mg，甜味劑 sweet agents 45 mg，Mn (as manganese sulfate) 20.18 mg，I (as potassium iodide) 0.4 mg，Se (as sodium selenite) 0.35 mg。

2)代謝能為計算值，其余為實測值。ME was a calculated value, while the others were measured values.

1.4樣品采集與處理

1.4.1 血清的制備

分別于仔豬14、21和28日齡時，各組隨機選擇10頭仔豬經(jīng)前腔靜脈采血，靜置2 h后，于3 000 r/min離心10 min，分離血清，于-20 ℃保存。

1.4.2 小腸組織采集及保存

試驗結(jié)束時，各組隨機選擇6頭仔豬剖殺，取十二指腸、空腸、回腸，縱向剪開腸管，刮取腸黏膜，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5生長性能測定

分別于仔豬14、21和28日齡時，早晨飼喂前稱量空腹仔豬的個體重，記錄始重(IBW)和末重(FBW)，計算每頭仔豬的平均日增重(ADG)；準確記錄各重復中仔豬的投料量和余料量，計算每頭仔豬的平均日采食量(ADFI)；根據(jù)ADFI和ADG計算料重比(F/G)。

1.6血清細胞因子和小腸黏膜SIgA含量測定

仔豬血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6含量和小腸黏膜SIgA含量均采用ELISA法進行測定，檢測方法嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)均以平均值±標準差表示，采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，采用Duncan氏法進行多重比較，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1黨參多糖對仔豬生長性能的影響

由表2可知，14日齡時，各組仔豬的平均體重基本一致，無顯著差異(P>0.05)；21日齡時，高劑量組仔豬的平均體重極顯著高于對照組(P<0.01)，顯著高于低劑量組(P<0.05)；28日齡時，高劑量組仔豬的平均體重極顯著高于低劑量組和對照組(P<0.01)，低劑量組仔豬的平均體重顯著高于對照組(P<0.05)。14～21日齡時，黨參多糖添加組仔豬的ADG高于對照組，但無顯著差異(P>0.05)；22～28日齡時，與對照組相比，高劑量組仔豬的ADG極顯著升高(P<0.01)，低劑量組仔豬的ADG顯著升高(P<0.05)。22～28日齡時，高劑量組仔豬的ADFI顯著高于對照組(P<0.05)。黨參多糖添加組仔豬的F/G均低于對照組(P>0.05)。

表2 黨參多糖對仔豬生長性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P>0.01)。下表同。

In the same row, values with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01). The same as below.

2.2黨參多糖對仔豬血清細胞因子含量的影響

2.2.1 黨參多糖對仔豬血清IFN-γ含量的影響

由表3可知，14日齡時，各組仔豬的血清IFN-γ含量基本一致，無顯著差異(P>0.05)；21日齡時，與對照組相比，高劑量組仔豬的血清IFN-γ含量顯著升高(P<0.05)；28日齡時，高劑量組仔豬的血清IFN-γ含量極顯著高于對照組(P<0.01)，顯著高于低劑量組(P<0.05)。

2.2.2 黨參多糖對仔豬血清IL-2含量的影響

由表4可知，14日齡時，各組仔豬的血清IL-2含量基本一致，無顯著差異(P>0.05)；21日齡時，與對照組相比，高劑量組仔豬的血清IL-2含量顯著升高(P<0.05)；28日齡時，與對照組相比，高劑量組仔豬的血清IL-2含量極顯著升高(P<0.01)，低劑量組顯著升高(P<0.05)。

2.2.3 黨參多糖對仔豬血清IL-4含量的影響

由表5可知，14日齡時，各組仔豬的血清IL-4含量基本一致，無顯著差異(P>0.05)；21日齡時，黨參多糖添加組仔豬的血清IL-4含量與對照組相比無顯著差異(P>0.05)；28日齡時，與對照組比較，高劑量組仔豬的血清IL-4含量極顯著升高(P<0.01)，低劑量組顯著升高(P<0.05)。

表3 黨參多糖對仔豬血清IFN-γ含量的影響

表4 黨參多糖對仔豬血清IL-2含量的影響

表5 黨參多糖對仔豬血清IL-4含量的影響

2.2.4 黨參多糖對仔豬血清IL-6含量的影響

由表6可知，14日齡時，各組仔豬的血清IL-6含量基本一致(P>0.05)；21日齡時，與對照組相比，高劑量組仔豬的血清IL-6含量顯著升高(P<0.05)；28日齡時，高劑量組仔豬的血清IL-6含量極顯著高于對照組(P<0.01)，低劑量組顯著高于對照組(P<0.05)，高劑量組顯著高于低劑量組(P<0.05)。

表6 黨參多糖對仔豬血清IL-6含量的影響

2.3黨參多糖對仔豬小腸黏膜SIgA含量的影響

由表7可知，高劑量組仔豬的十二指腸黏膜SIgA含量極顯著高于低劑量組和對照組(P<0.01)；與對照組相比，高劑量組空腸黏膜SIgA含量極顯著升高(P<0.01)；高劑量組回腸黏膜SIgA含量極顯著高于對照組(P<0.01)，顯著高于低劑量組(P<0.05)。

3 討 論

研究表明，黨參提取物中含多種成分，主要包括甾醇類、糖和甙類、生物堿和含氮成分、揮發(fā)性成分、微量元素以及氨基酸等，其中所含多糖成分具有改善動物腸道微生物多樣性和提高生產(chǎn)性能的作用[7]。多糖還可顯著降低胃液、胃酸分泌和胃蛋白酶活性[8]。報道認為，仔豬飼糧中添加中藥黨參，能顯著提高仔豬的日增重，降低F/G，改善仔豬的生長性能和免疫功能[9]，但具體是黨參中的哪一種成分發(fā)揮主要作用卻很難確定。為進一步探索黨參多糖的作用效果，本試驗選擇胎次相同、體重相近的仔豬進行臨床試驗，結(jié)果表明，飼糧中添加1%和2%黨參多糖均能提高仔豬的ADG和ADFI，降低F/G，特別是2%黨參多糖的作用效果更明顯；飼糧中添加2%黨參多糖顯著提高了仔豬斷奶時(21日齡)和斷奶后(28日齡)的平均體重，顯著提高了斷奶后1周(22～28日齡)仔豬的ADG和ADFI。以上結(jié)果說明，飼糧中添加適量的黨參多糖能改善仔豬的生長性能，促進仔豬生長，這與曾丹等[5]的研究結(jié)果相一致。

表7 黨參多糖對仔豬小腸黏膜SIgA含量的影響

細胞因子是一類具有免疫活性的多功能小分子物質(zhì)。白細胞介素(IL)是由多種類型細胞產(chǎn)生的一類細胞因子，參與體內(nèi)多種生理病理過程[10]。Th1類細胞分泌IL-2、α-干擾素(IFN-α)和腫瘤壞死因子-β(TNF-β)等細胞因子，是機體抗癌、抗病毒的主要參與者；Th2類細胞分泌IL-4、IL-6和白細胞介素-10(IL-10)等細胞因子，在體內(nèi)可抑制免疫應(yīng)答[11-12]。IL-2是一種多向性作用的細胞因子，主要由活化T細胞產(chǎn)生，可刺激T細胞生長、增殖和分化[13]；促進細胞毒性T前體細胞分化為細胞毒性T細胞，增強殺傷力，發(fā)揮細胞毒性作用，促進自然殺傷細胞的功能和釋放免疫干擾素[14]。IL-4是一種多功能多效性的細胞因子，主要由Th2細胞分泌，能刺激B細胞的增殖分化產(chǎn)生抗體，促進B細胞合成并分泌免疫球蛋白介導體液免疫[15]。IL-6則可由Th2細胞、成纖維細胞和巨噬細胞產(chǎn)生。IL-4和IL-6均可作用于B細胞，IL-4能夠增強免疫球蛋白E(IgE)誘導的免疫反應(yīng)，IL-6則指導免疫球蛋白G(IgG)的合成、分泌，兩者均參與抗體介導的體液免疫應(yīng)答[16]。IL-6作為一種前炎癥細胞因子，可由單核-巨噬細胞、內(nèi)皮細胞、淋巴細胞以及成纖維細胞等多種細胞合成，在感染發(fā)生時可促進急性期反應(yīng)蛋白的合成以及抗體的產(chǎn)生；同時，IL-6可促進T淋巴細胞表面表達IL-2受體，增強IL-2的作用，促進天然殺傷細胞的增殖、分化并提高其活性，改善機體免疫功能[17]。張曉君等[18]研究發(fā)現(xiàn)，黨參多糖對小鼠的細胞免疫有一定的促進作用。曹麗等[19]研究證明，黨參多糖對雞分泌IL-2有顯著的增強作用。林丹丹等[20]用硝酸-亞硒酸鈉法來硒化修飾黨參多糖，并研究硒化黨參多糖對免疫機制的影響，結(jié)果表明其對環(huán)磷酰胺誘導的小鼠免疫器官萎縮具有逆轉(zhuǎn)功能，并且能夠促進細胞因子IL-2、IL-6等的生成。韓麗[21]研究發(fā)現(xiàn)，黨參多糖能夠通過調(diào)節(jié)血清細胞因子TNF-α和IL-6含量、控制腫瘤生長來抑制癌性惡病質(zhì)。本試驗研究結(jié)果與上述報道基本一致，飼糧中添加不同劑量的黨參多糖均能通過細胞免疫提高仔豬血清中細胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6含量，增強機體的免疫功能；2%黨參多糖對仔豬的作用效果尤為顯著。

SIgA由呼吸道、泌尿道、消化道黏膜固有層中的漿細胞產(chǎn)生，通過與抗原微生物結(jié)合，阻止病原體黏附和定植在細胞表面，形成黏膜免疫的第1道防線。在腸黏膜免疫中，以SIgA為主的體液免疫占主導地位，主要作用包括腸道組織病原體黏附、中和病毒、中和毒素及免疫排除。趙珊珊等[22]研究不同濃度板藍根多糖對無初乳仔鼠十二指腸SIgA細胞表達的影響，結(jié)果顯示，板藍根多糖能夠促進小腸SIgA細胞的表達，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。王雪等[23]報道，長根菇多糖能夠調(diào)整腸道菌群失調(diào)小鼠的腸道菌群且提高腸道黏膜中SIgA含量。本試驗結(jié)果同樣得出，2%黨參多糖能夠通過體液免疫顯著提高仔豬十二指腸、空腸和回腸黏膜SIgA含量，增強腸道黏膜免疫，進一步改善了仔豬的黏膜屏障作用。

4 結(jié) 論

飼糧中添加適量的黨參多糖可以改善仔豬的生長性能，促進仔豬生長，不同程度的提高血清細胞因子含量，增加仔豬的腸道黏膜免疫，其中添加2%黨參多糖的效果優(yōu)于1%黨參多糖。

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*Corresponding author, professor, E-mail: wjj@ahau.edu.cn

EffectsofCodonopsispilosulaPolysaccharideonGrowthPerformance,SerumCytokinesandIntestinalMucosalSecretoryImmunoglobulinAContentsofPiglets

WANG Xichun ZHU Dianfeng YIN Lili LI Yu FENG Shibin WU Jinjie*

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230036,China)

This experiment was conducted to investigate the effects ofCodonopsispilosulapolysaccharide (CPP) on growth performance and the contents of serum cytokines and intestinal mucosal secretory immunoglobulin A (SIgA) of piglets. Sixty 1-day-old “Duroc×Landrace×Yorkshire” crossbred piglets from six litters were randomly divided into three groups with two replicates per group and ten piglets per replicate (males and females in half). Piglets in control group were fed with milk replacer, those in low dosage group were fed with milk replacer+1% CPP, and the others in high dosage group were fed with milk replacer+2% CPP from 14 days of age, respectively. All piglets were weaned at 21 days of age. The trial lasted for 14 days. The results showed as follows: compared with control group, 1) diet adding 2% CPP extremely significantly increased average body weight of piglets at 21 days of age (P<0.01), and diet adding 1% and 2% CPP significantly increased average body weight of piglets at 28 days of age (P<0.05). Diet adding 2% CPP significantly increased average daily gain (ADG) and average daily feed intake (ADFI) of piglets from 22 to 28 days of age (P<0.05). 2) Diet adding 2% CPP significantly increased the contents of interferon-γ (IFN-γ), interleukin-2 (IL-2) and interleukin-6 (IL-6) in serum of piglets at 21 days of age (P<0.05), and diet adding 1% and 2% CPP significantly increased the contents of IL-2, interleukin-4 (IL-4) and IL-6 in serum of piglets at 28 days of age (P<0.05). 3) Diet adding 2% CPP extremely significantly increased the content of duodenal, jejunum, and ileal mucosal SIgA (P<0.01). It is concluded that diet adding 1% and 2% CPP can improve the growth performance and the contents of serum cytokines and intestinal mucosal SIgA of piglets. The effect of adding 2% CPP is better than that of 1% CPP.[ChineseJournalofAnimalNutrition,2017,29(11)：4069-4075]

Codonopsispilosulapolysaccharide; piglets; growth performance; cytokine; intestinal mucosa

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.11.028

S828

A

1006-267X(2017)11-4069-07

2017-05-03

安徽省生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助項目(2016-2020)

王希春(1978—)，男，安徽利辛人，副教授，博士，從事畜禽營養(yǎng)代謝病與中毒病研究。E-mail: wangxichun@ahau.edu.cn

*通信作者:吳金節(jié)，教授，碩士生導師，E-mail: wjj@ahau.edu.cn

(責任編輯 李慧英)