黃欽成 申光榮 譚北平 章 雙 黑文靜 董曉慧*

(1.廣東海洋大學水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料實驗室，湛江 524088；2.深圳市裕農(nóng)科技股份有限公司，深圳 518110)

飼料中添加殼寡糖和/或霉菌毒素吸附劑對凡納濱對蝦生長性能、非特異性免疫力及抗病力的影響

黃欽成1申光榮2譚北平1章 雙1黑文靜2董曉慧1*

(1.廣東海洋大學水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料實驗室，湛江 524088；2.深圳市裕農(nóng)科技股份有限公司，深圳 518110)

本試驗旨在研究在飼料中單獨或聯(lián)合添加殼寡糖(COS)和霉菌毒素吸附劑(MA)對凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)生長性能、非特異性免疫力及抗病力的影響。首先配制基礎(chǔ)飼料(C0組，作為對照組)，然后在基礎(chǔ)飼料中分別添加100 mg/kg COS(C0.1組)、250 mg/kg COS(C0.25組)、2 500 mg/kg MA(M2.5組)、100 mg/kg COS+2 500 mg/kg MA(C0.1+M2.5組)、250 mg/kg COS+2 500 mg/kg MA(C0.25+M2.5組)，共制成6種等氮等脂的試驗飼料，投喂初重為(0.23±0.02) g的凡納濱對蝦8周。每組設(shè)3個重復，每個重復放養(yǎng)40尾對蝦。結(jié)果表明：1)C0.1+M2.5組的特定生長率、增重率顯著高于M2.5組(P<0.05)，C0.1+M2.5組的飼料系數(shù)最優(yōu)，顯著低于其他各組(P<0.05)，C0.1+M2.5組的蛋白質(zhì)效率最高并顯著高于除C0.25+M2.5組外的其他各組(P<0.05)；C0.1+M2.5組的蝦體粗蛋白質(zhì)含量較C0.1組顯著升高(P<0.05)，蝦體粗脂肪含量較C0.1組顯著降低(P<0.05)。2)C0.1+M2.5、C0.25+M2.5組血清中堿性磷酸酶(AKP)活性均顯著低于C0.1和C0.25組(P<0.05)，C0.1+M2.5組血清中超氧化物歧化酶(SOD)、酚氧化酶(PO)活性均顯著高于M2.5和C0.1組(P<0.05)，C0.1+M2.5組血清中丙二醛(MDA)含量顯著低于C0.1組(P<0.05)；C0.1+M2.5組肝胰腺中MDA含量顯著低于C0.1組(P<0.05)，C0.25+M2.5組肝胰腺中AKP、PO、SOD、溶菌酶(LZM)活性比C0.1+M2.5組均有降低，相反肝胰腺中MDA含量則有所升高。3)以哈維氏弧菌攻毒7 d后，C0.1+M2.5及C0.25+M2.5組的累積死亡率均顯著低于C0和M2.5組(P<0.05)。由結(jié)果可知：本試驗條件下，飼料中添加一定量的COS和/或MA均能促進凡納濱對蝦的生長，聯(lián)合添加COS與MA的促生長、提高免疫力和抗病力的效果優(yōu)于單獨添加COS和MA，綜合來看，以100 mg/kg COS和2 500 mg/kg MA聯(lián)合添加時作用效果較佳。

殼寡糖；霉菌毒素吸附劑；凡納濱對蝦；生長性能；非特異性免疫力；抗病力

凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)是世界三大主養(yǎng)蝦類之一[1]，其產(chǎn)量占全世界蝦產(chǎn)量的2/3。近年來對蝦養(yǎng)殖業(yè)的病害頻發(fā)嚴重影響了產(chǎn)業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展[2]，開發(fā)新型的綠色飼料添加劑，以增強養(yǎng)殖對象的免疫力和抗病力，提高養(yǎng)殖經(jīng)濟效益，已逐漸成為飼料行業(yè)的研發(fā)重點?？股仉m然能有效預防和治療各種疾病，但其殘留和環(huán)境污染問題使得安全高效綠色的抗生素替代品的研究迫在眉睫[3]。

殼寡糖(chitosan oligosaccharide，COS)又叫殼聚寡糖、低聚殼聚糖，為自然界中唯一帶正電荷的堿性氨基低聚糖，是將殼聚糖經(jīng)生物酶分解得到的一種聚合度在2～20之間的寡糖產(chǎn)品。COS有促進動物生長，改善機體腸道環(huán)境，抑制有害菌生長，促進腸道菌落形成的作用[4]。研究表明，殼聚糖與蒙脫石形成的高分子聚合物是一種性能非常優(yōu)良的新型抗菌劑[5]。已有研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加COS可提高凡納濱對蝦的免疫能力并顯著提高其生長性能和成活率[6]；飼料中添加適量的COS可以提高羅非魚(Oreochromis)[7]、卵形鯧鲹(Trachinotusovatus)[8]的生長性能，增強其抗病力；殼聚糖可提高克氏原螯蝦(Procambarusclarkia)[9]、銀鯽(Carassiusauratusgibelio)[10]、刺參(ApostichopusjaponicusSelenka)[11]的生長性能。COS對陸生動物同樣具有促生長、提高產(chǎn)品質(zhì)量的作用[12]。飼料霉變是影響飼料品質(zhì)的關(guān)鍵因素之一，動物食用了被霉菌毒素污染的飼料后，會產(chǎn)生霉菌毒素的急性或慢性中毒，導致機體免疫機能和抵抗力下降、飼料利用率降低、生產(chǎn)性能下降[13]。霉菌毒素吸附劑(mycotoxins adsorbent，MA)主要有改性的蒙脫石等硅鋁酸鹽類、復合礦物質(zhì)類、特定酵母提取物類等。硅鋁酸鹽是指含有氧化鋁和二氧化硅的一類黏土型礦物，如沸石、膨潤土及高嶺土等，硅鋁酸鹽因為具有較大的比表面積和離子交換能力而具有較強的吸附能力。有研究表明，飼糧中添加MA可以提高蛋雞的產(chǎn)蛋性能，增強血清抗氧化功能，改善健康狀況[14-16]，并可降低肉雞血清丙二醛(MDA)含量，逆轉(zhuǎn)霉變飼料導致的氧化損傷和免疫毒性[16]。研究發(fā)現(xiàn)，硅鋁酸鹽產(chǎn)品與β-葡聚糖或甘露寡糖同時添加可以提高凡納濱對蝦生長性能，增強非特異性免疫力，改善消化酶活性，提高抗溶藻弧菌及耐低氧能力[17]；酵母細胞壁多糖和硅鋁酸鹽復合物可提高生長豬的免疫功能[18]。任何單一的吸附劑都有其局限性，不能完全吸附所有的有害物質(zhì)或毒素，通過將不同類型的吸附劑進行復配可以取得較好的效果，COS與硅鋁酸鹽類MA在提升養(yǎng)殖動物生長性能，增強免疫力方面具有一致性，但在水產(chǎn)動物中同時使用此2種添加劑的研究在國內(nèi)尚無報道。因此，本試驗在飼料中單獨添加或聯(lián)合添加COS與MA，通過測定凡納濱對蝦的生長指標、體成分、血清和肝胰腺非特異性免疫酶活性及抗病力，對COS與MA的合理使用進行評估。

1 材料與方法

1.1試驗材料

試驗所用COS(聚合度2～8，寡糖含量≥85%)、MA(100%水合硅鋁酸鹽)均由深圳市裕農(nóng)科技股份有限公司提供。

1.2試驗飼料和試驗設(shè)計

首先配制基礎(chǔ)飼料(C0組，作為對照組)，然后在基礎(chǔ)飼料中分別添加100 mg/kg COS(C0.1組)、250 mg/kg COS(C0.25組)、2 500 mg/kg MA(M2.5組)、100 mg/kg COS+2 500 mg/kg MA(C0.1+M2.5組)、250 mg/kg COS+2 500 mg/kg MA(C0.25+M2.5組)，共制成6種等氮等脂的試驗飼料，其組成及營養(yǎng)水平見表1。將原料粉碎后過80目篩，按照配方要求準確稱量，微量成分采取逐級擴大法混合均勻后，用F-26式雙螺桿擠條機(華南理工大學，廣州)加工成粒徑為1.0和1.5 mm 2種規(guī)格的飼料，60 ℃烘箱熟化30 min。所制備飼料通風處風干后，用自封袋密封，放于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

續(xù)表1項目Items組別GroupsC0C0.1C0.25M2.5C0.1+M2.5C0.25+M2.5蝦殼粉Shrimpshellmeal6.006.006.006.006.006.00魚油Fishoil2.002.002.002.002.002.00大豆卵磷脂Soybeanlecithin2.002.002.002.002.002.00維生素預混料Vitaminpremix1)1.001.001.001.001.001.00維生素CVitaminC(35%)0.100.100.100.100.100.10氯化膽堿Cholinechloride0.500.500.500.500.500.50礦物質(zhì)預混料Mineralpremix2)1.001.001.001.001.001.00磷酸二氫鈣Ca(H2PO4)21.001.001.001.001.001.00微晶纖維素Microcrystallinecellulose9.409.309.156.906.806.65殼寡糖COS0.100.250.100.25霉菌毒素吸附劑MA2.502.502.50合計Total100.00100.00100.00100.00100.00100.00營養(yǎng)水平Nutrientlevels粗蛋白質(zhì)Crudeprotein42.7743.9243.0243.7042.8842.90粗脂肪Crudelipid7.777.327.306.947.437.37粗灰分Ash8.949.218.688.778.569.19水分Moisture11.1911.4811.7910.7010.6710.22

1)每千克維生素預混料含Contained the following per kg of vitamin premix：鹽酸硫胺素thiamine hydrochloride 25.50 g，核黃素 riboflavin 25.00 g，鹽酸吡哆醇 pyridoxine hydrochloride 50.00 g，VB120.10 g，VK 5.00 g，VE 99.00 g，維生素A醋酸酯 retinyl acetate 10.00 g，VD 50 g，煙酸 nicotinic acid 101.00 g，D-泛酸鈣D-calcium pantothenate 61.00 g，生物素 biotin 25.00 g，葉酸 folic acid 6.25 g，肌醇 inositol 153.06 g，纖維素 cellulose 389.09 g。

2)每千克礦物質(zhì)預混料含有Contained the following per kg of mineral premix：FeC6H5O713.71 g，ZnSO4·7H2O 28.28 g，MgSO4·7H2O 0.12 g，MnSO4·H2O 12.43 g，CuSO4·5H2O 19.84 g，CoCl2·7H2O 4.07 g，KI 0.03 g，KCl 15.32 g，NaSeO30.02 g，沸石粉 zeolite power 906.18 g。

1.3試驗動物與飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗在廣東海洋大學東海島海洋生物研究基地進行，試驗蝦苗購于湛江中聯(lián)蝦苗場。試驗前蝦苗在室外水泥池(4.9 m×4.5 m×1.8 m)中暫養(yǎng)，養(yǎng)殖試驗開始前禁食24 h后分組。根據(jù)試驗設(shè)計，挑選體格健壯、活力強、平均初重為(0.23±0.02) g的蝦苗，隨機分為6組。采用室內(nèi)海水養(yǎng)殖系統(tǒng)，每組3個重復，以重復為單位放養(yǎng)于0.3 m3的玻璃鋼桶內(nèi)，每桶放養(yǎng)40尾蝦。每天分別在08：00、12：00、16：00 和20：00各投喂1次，投喂1 h后觀察對蝦攝食情況，并根據(jù)攝食、天氣等情況適當調(diào)整投喂量，保證食完(無殘餌或極少)。試驗前2周每2 d換水1次，后期每天換水1次。試驗期間水溫25.5～30.0 ℃，海水鹽度為26.5～28.0，連續(xù)充氧，溶氧濃度>6.8 mg/L，pH 7.8～8.2，氨氮濃度<0.03 mg/L。試驗期為8周。

1.4樣品采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后禁食24 h后取樣。對每桶蝦稱重、記數(shù)，用于計算生長性能指標。每桶隨機取5尾蝦封口袋分裝，-20 ℃保存，備測體成分。每桶再隨機取10尾蝦，用1 mL無菌注射器自第5步足基部血竇抽血，將血淋巴注入1.5 mL的離心管后，迅速置于盛有碎冰的冰盒中，采樣結(jié)束后于4 ℃冰箱靜置過夜，然后4 ℃、8 000 r/min離心10 min，取上清液至離心管中，于-80 ℃冰箱保存?zhèn)錅y相關(guān)指標；取血后迅速解剖取肝胰腺并置于液氮中，后轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱保存?zhèn)錅y相關(guān)指標。

1.5指標測定

1.5.1 飼料和全蝦樣品的常規(guī)分析

對飼料和全蝦樣品進行常規(guī)養(yǎng)分分析，水分含量采用105 ℃烘干恒重法測定，粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法(KjeltecTM8400，瑞典)測定，粗脂肪含量采用索氏抽提法(抽提劑為石油醚)測定，粗灰分含量采用馬弗爐550 ℃灼燒法測定。

1.5.2 血清、肝胰腺樣品相關(guān)指標檢測

肝胰腺粗酶液的制作：稱取適量肝胰臟組織，準確記錄重量。按重量(g)∶體積(mL)=1∶9的比例加入9倍體積的預冷生理鹽水，冰水浴條件下勻漿。勻漿液2 500 r/min、4 ℃離心10 min，小心吸取上清液并分裝，-80 ℃冰箱保存?zhèn)錅y。

血清、肝胰腺堿性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、酚氧化酶(PO)、溶菌酶(LZM)活性及MDA含量的測定均使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，測定方法按試劑盒說明書進行。

1.5.3 生長性能指標計算公式

增重率(WGR，%)=100×(末均重-
初均重)/初均重；特定生長率(SGR，%/d)=100×(ln末均重-
ln初均重)/飼養(yǎng)天數(shù)；蛋白質(zhì)效率(PER)=(終末體重-初始體重)/
(飼料攝入量×飼料粗蛋白質(zhì)含量)；飼料系數(shù)(FCR)=攝食飼料干重/
(終末體重-初始體重)；成活率(SR，%)=100×試驗結(jié)束時蝦尾數(shù)/
試驗開始時蝦尾數(shù)。

1.6攻毒試驗

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，每桶取10尾蝦，用于攻毒試驗(期間仍投喂對應試驗飼料及換水)。攻毒所用哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)由廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟動物病原生物學及流行病學重點實驗室提供。通過預試驗確定凡納濱對蝦的半致死濃度(LD50，7 d)為3.89×108CFU/mL，攻毒時在對蝦第2、3腹節(jié)背部注射30 μL該濃度的哈維氏弧菌液，統(tǒng)計7 d的死亡尾數(shù)并計算累積死亡率(CMR)。

累積死亡率(%)=100×累積死亡
尾數(shù)/初始尾數(shù)。

1.7數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準差(mean±SD)表示，數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，組間若有顯著性差異，再用Duncan氏法進行多重比較，顯著性水平為P<0.05。

2 結(jié) 果

2.1飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦生長性能的影響

由表2可知，對蝦的特定生長率在C0.25、C0.1+M2.5、C0.25+M2.5組之間無顯著性差異(P>0.05)，但上述3組均顯著高于C0與M2.5組(P<0.05)，而C0.1組則與其他各組無顯著性差異(P>0.05)。C0.1、C0.25、C0.1+M2.5和C0.25+M2.5組之間增重率無顯著性差異(P>0.05)，但三者均顯著高于C0、M2.5組(P<0.05)。C0.1+M2.5組的飼料系數(shù)顯著低于其他各組(P<0.05)；C0.25+M2.5組的飼料系數(shù)顯著高于C0.1+M2.5組(P<0.05)，但顯著低于其他各組(P<0.05)；C0組的飼料系數(shù)與C0.25組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著高于C0.1+M2.5、C0.25+M2.5組(P<0.05)并顯著低于C0.1、M2.5組(P<0.05)；C0.1組的飼料系數(shù)與C0.25組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著低于M2.5組(P<0.05)。C0.1+M2.5組的蛋白質(zhì)效率與C0.25+M2.5組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)；C0、C0.1、M2.5組之間蛋白質(zhì)效率無顯著性差異(P>0.05)，三者均顯著低于C0.1+M2.5、C0.25+M2.5組(P<0.05)；C0.25組的蛋白質(zhì)效率顯著低于C0.1+M2.5組(P<0.05)，與其他各組無顯著性差異(P>0.05)。各組成活率無顯著性差異(P>0.05)。

2.2飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦體成分的影響

由表3可知，各組對蝦蝦體水分、粗灰分含量無顯著性差異(P>0.05)。C0.1+M2.5組蝦體粗蛋白質(zhì)含量與C0.25組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)；C0、C0.1、M2.5組之間蝦體粗蛋白質(zhì)含量無顯著性差異(P>0.05)，但三者均顯著低于C0.1+M2.5組并均顯著高于C0.25+M2.5組(P<0.05)；C0.25+M2.5組蝦體粗蛋白質(zhì)含量顯著低于其他各組(P<0.05)。各添加組蝦體粗脂肪含量均顯著低于C0組(P<0.05)；M2.5、C0.1+M2.5和C0.25+M2.5組蝦體粗脂肪含量與C0.25組無顯著性差異(P>0.05)，但均顯著低于C0和C0.1組(P<0.05)；C0.1組蝦體粗脂肪含量與C0.25組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著低于C0組并顯著高于其他各組(P<0.05)。

表2 飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦生長性能的影響

同列數(shù)據(jù)肩標不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

Values in the same row with different letter superscripts differ significantly (P<0.05). The same as below.

表3 飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦體成分的影響

2.3飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦血清中非特異性免疫酶活性及MDA含量的影響

由表4可知，C0.25+M2.5組血清中AKP活性與M2.5組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著低于其他各組(P<0.05)；C0.1+M2.5組血清中AKP活性與M2.5組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著高于C0.25+M2.5組(P<0.05)并顯著低于其他各組(P<0.05)；C0.1組血清中AKP活性與C0組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著低于C0.25組(P<0.05)并顯著高于其他各組(P<0.05)。C0、C0.1和C0.25組之間血清中SOD活性無顯著性差異(P>0.05)，但三者均顯著低于其他各組(P<0.05)；M2.5組血清中SOD活性與C0.25+M2.5組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著低于C0.1+M2.5組(P<0.05)并顯著高于其他各組(P<0.05)；C0.1+M2.5組血清中SOD活性與C0.25+M2.5組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)。C0、C0.1、M2.5組之間血清中PO活性無顯著性差異(P>0.05)，但三者均顯著低于C0.25和C0.1+M2.5組(P<0.05)；血清中PO活性以C0.25組最高，與C0.1+M2.5組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)。C0.1組血清中LZM活性顯著高于M2.5和C0.25+M2.5組(P<0.05)，與其他各組無顯著性差異(P>0.05)；血清中LZM活性以C0.25+M2.5組最低，顯著低于C0.1和C0.1+M2.5組(P<0.05)，與其他各組無顯著性差異(P>0.05)。

M2.5、C0.1+M2.5組血清中MDA含量與C0.25+M2.5組無顯著性差異(P>0.05)，但二者均顯著低于其他各組(P<0.05)；C0.1組血清中MDA含量與C0、C0.25組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)。

2.4飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦肝胰腺中非特異性免疫酶活性及MDA含量的影響

由表5可知，C0.1+M2.5組肝胰臟中AKP活性與C0.1、M2.5組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)；肝胰臟中AKP活性以C0.25組最低，與C0.25+M2.5和C0組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著低于其他各組(P<0.05)。肝胰臟中SOD活性僅C0.1組顯著高于C0組(P<0.05)，其他各組之間無顯著性差異(P>0.05)。C0.25組肝胰臟中LZM活性與C0.1、M2.5組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)；C0組肝胰臟中LZM活性與C0.1+M2.5、C0.25+M2.5組無顯著性差異(P>0.05)，但顯著低于其他各組(P<0.05)；C0.1、M2.5、C0.1+M2.5、C0.25+M2.5組之間肝胰臟中LZM活性無顯著性差異(P>0.05)。

C0.25、M2.5、C0.1+M2.5、C0.25+M2.5組肝胰臟中MDA含量無顯著性差異(P>0.05),但均顯著低于C0和C0.1組(P<0.05)，而C0和C0.1組之間無顯著性差異(P>0.05)。

表4 飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦血清中非特異性免疫酶活性和MDA含量的影響

表5 飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦肝胰腺中非特異性免疫酶活性和MDA含量的影響

2.5飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦哈維氏弧菌攻毒后累積死亡率的影響

如圖1所示，C0組的累積死亡率最高，顯著高于各添加組(P<0.05)；M2.5組的累積死亡率雖顯著低于C0組(P<0.05)，但顯著高于其他添加組(P<0.05)；C0.1、C0.25、C0.1+M2.5、C0.25+M2.5組之間累積死亡率無顯著性差異(P>0.05)，但均顯著低于C0和M2.5組(P<0.05)。

3 討 論

3.1飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦生長性能的影響

由本試驗結(jié)果可知，與對照組相比，飼料中單獨添加COS和MA提高了凡納濱對蝦的特定生長率、增重率和飼料系數(shù)。李振達等[6]的研究表明COS可以顯著提高凡納濱對蝦的增重率、特定生長率和飼料系數(shù)，Qin等[7]發(fā)現(xiàn)COS可以顯著提升羅非魚的β生長因子轉(zhuǎn)錄水平，Lin等[8]研究表明COS可以顯著提高卵形鯧鲹的生長率，Zhou等[12]研究發(fā)現(xiàn)COS可提升肉雞的增重和飼料利用率；MA同樣可以提升動物的生長性能[14-15]，飼料中添加沸石可以提高肉仔雞的生長速度、提高飼料轉(zhuǎn)化率[19]，提升產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能[20]，這些研究結(jié)果與本試驗結(jié)果基本一致。寡糖主要通過以下途徑對動物的生長性能產(chǎn)生影響：促進小腸絨毛生長，維護腸黏膜完整性，促進營養(yǎng)物質(zhì)吸收[7]；優(yōu)化腸道菌群結(jié)構(gòu)，增加有益菌比例，抑制埃希氏桿菌屬(Escherichia)增殖，改善腸道內(nèi)環(huán)境，促進對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，進而促進動物生長[21]。硅鋁酸鹽類吸附劑可能含有多種礦物元素，已有的報道指出Azomite(主要成分為水合硅鋁酸鹽)含有70種以上微量和常量元素，補充了原有飼料礦物元素的不足[18]；微量元素與動物生長發(fā)育密切相關(guān)[22-24]，硅鋁酸鹽吸附劑中含有稀土元素[17]，可以激活體內(nèi)生長因子，促進酶的轉(zhuǎn)化，提高飼料轉(zhuǎn)化率，加快動物的生長速度[25]，并且其良好的吸附和離子交換能力對消化道有害菌有一定吸附作用，可優(yōu)化腸道環(huán)境，提高動物腸道消化酶活性，促進養(yǎng)分的吸收[17,26]，從而促進動物生長。本試驗中，與對照組或單獨添加COS和MA組相比，COS與MA聯(lián)合添加提高了凡納濱對蝦的特定生長率、增重率、蛋白質(zhì)效率，并顯著降低了飼料系數(shù)。此外，C0.1+M2.5組特定生長率或增重率顯著高于M2.5組，但與C0.1組無顯著性差異；C0.25+M2.5組特定生長率或增重率顯著高于M2.5組但與C0.25組無顯著性差異，M2.5組與C0組無顯著性差異，這說明COS可能在復合添加中起了主導作用。寡糖是非消化糖類物質(zhì)，動物不能或極少吸收，添加過量會引起動物不良性腹瀉，造成負效應[27]，C0.25+M2.5組相比C0組，特定生長率、增重率顯著提高，相比C0.1+M2.5組則稍微下降但差異不顯著，這說明C0.25+M2.5組同樣改善了凡納濱對蝦的生長性能，但并不能說明COS是否過量，有關(guān)二者復配的比例問題還有待進一步研究。

3.2飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦體成分的影響

蔡勝昌等[28]的研究表明，飼料中單獨添加COS對大菱鲆(Scophthalmusmaximus)幼魚全魚水分及肌肉粗灰分含量均無顯著影響；Niu等[29]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加不同水平COS對凡納濱對蝦蝦體水分、粗灰分含量均無顯著影響，本試驗結(jié)果與上述研究結(jié)果一致，即飼料中單獨或聯(lián)合添加COS和MA對凡納濱對蝦蝦體水分、粗灰分含量均沒有產(chǎn)生顯著性影響。華雪銘等[30]的研究表明，飼料中單獨或聯(lián)合添加COS、益生菌可降低暗紋東方鲀(Fuguobscurus)體脂肪含量；Niu等[29]研究表明，飼料中殼聚糖添加量在1 g/kg以上時降低了凡納濱對蝦蝦體粗脂肪含量；Zhou等[12]研究表明，COS可調(diào)節(jié)脂肪代謝，使雞腹部總脂肪含量下降；宋濤[31]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加300 g/t的COS可顯著降低鴨體內(nèi)脂肪沉積，腹部、肌肉間脂肪率顯著下降。本試驗所得結(jié)果與上述研究結(jié)果一致，表現(xiàn)為各添加組蝦體粗脂肪含量均顯著低于對照組。Kanauchi等[32]研究報道，殼聚糖可通過其帶正電荷的堿性氨基在帶負電荷的脂肪油滴周圍構(gòu)筑一層屏障，使脂肪油滴不能被機體消化吸收而排出體外，減少腸道內(nèi)小腸上皮細胞對脂肪的吸收而降低脂肪的沉積[33]。COS的性能比殼聚糖更加卓越，因此這可能也是本試驗中凡納濱對蝦蝦體粗脂肪含量下降的原因。然而，任秀芳等[9]的試驗結(jié)果為1%或3%的殼聚糖提高了克氏原螯蝦肌肉中粗脂肪的含量，這可能與測試的部位(本試驗測定的是全蝦)以及試驗對象或COS、殼聚糖聚合度差異有關(guān)。M2.5組蝦體粗脂肪含量相比對照組顯著下降，而C0.1+M2.5組以及C0.25+M2.5組相比C0.1、C0.25組蝦體粗脂肪含量進一步下降，證明COS與MA聯(lián)合添加時對體脂肪沉積的影響更大，原因可能是COS與吸附劑中的稀土元素結(jié)合形成穩(wěn)定的配合物，調(diào)節(jié)了脂質(zhì)的代謝[34]。

本試驗中，C0.1+M2.5組蝦體粗蛋白質(zhì)含量比C0.1、M2.5組顯著上升，說明COS和MA的聯(lián)合添加促進了蛋白質(zhì)的合成和累積。曹丹等[10]研究發(fā)現(xiàn)，攝食殼聚糖后魚體內(nèi)RNA/DNA值顯著上升，而RNA/DNA值反映蛋白質(zhì)的代謝速率，表明魚體內(nèi)肌肉蛋白質(zhì)合成加快，劉梅[35]在飼糧中添加不同水平的殼聚糖，結(jié)果表明，隨著殼聚糖添加水平的增加，肉雞肌肉粗蛋白質(zhì)含量呈增多趨勢，這與本試驗結(jié)果一致。殼聚糖能夠提高水產(chǎn)動物機體粗蛋白質(zhì)含量的原因可能是：殼聚糖能促進腸道對營養(yǎng)成分的吸收，提高飼料中蛋白質(zhì)的利用效率，加快機體蛋白質(zhì)合成；此外，殼聚糖可能還有提高細胞中RNA翻譯效率的作用，從而加快細胞中多肽鏈的合成[11]。而硅鋁酸鹽類MA含有多種微量元素，在動物體內(nèi)吸收后促進了物質(zhì)代謝，其較大的表面積和吸附能力可延長飼料在消化道的停留時間，使機體消化吸收率提高[26]。本試驗中，COS與MA協(xié)同作用提高了凡納濱對蝦蝦體的粗蛋白質(zhì)含量。

數(shù)據(jù)柱標注不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Date columns with different small letters differ significantly (P<0.05).

圖1飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦哈維氏弧菌攻毒后累積死亡率的影響

Fig.1 Effects of dietary COS and/or MA on CMR ofLitopenaeusvannameiafter challenged byVibrioharveyi

3.3飼料中添加COS和/或MA對凡納濱對蝦非特異性免疫力及抗病力的影響

COS具有促進巨噬細胞的吞噬功能、提高水解酶的活性、促進細胞因子的釋放等作用。其增強養(yǎng)殖動物免疫的機制有如下解釋：1)COS作為陽性趨向劑，可促進單核細胞形成巨噬細胞，使活性氧的含量增加，再通過活性氧的氧化性殺菌機制發(fā)揮免疫防御功能；2)COS含大量游離氨基，可吸附氫離子(H+)，活化T淋巴細胞，誘導Ⅳ型超敏反應，致使細胞侵潤和變形壞死，也可直接或間接激活巨噬細胞，增強其殺菌活性[34]。飼料中添加MA則主要是吸附了有害物質(zhì)如細菌、重金屬等，保護胃腸道，還可為機體補充礦物元素，更有一些微量元素可以激活酶的活性，從而提升動物的健康水平[36]。

甲殼動物以非特異性免疫為主，非特異性免疫包括細胞免疫和體液免疫，細胞免疫受體液免疫因子的介導和影響[27]，體液免疫因子包括PO、SOD、LZM及AKP等，PO在血細胞內(nèi)以酚氧化酶原的形式存在，能夠被一些蛋白質(zhì)或多糖激活而轉(zhuǎn)變成有活性的PO[37]，有活性的PO可以將苯酚氧化成醌，醌再轉(zhuǎn)換成可以包裹入侵病原體的黑色素[38]，從而清除有害物質(zhì)。本試驗中，各添加組血清和肝胰腺中PO活性相比對照組均有不同程度的提高，C0.1+M2.5組血清PO活性顯著高于C0.1、M2.5組，說明COS與MA聯(lián)合添加能更好地提高凡納濱對蝦的非特異免疫力。任秀芳等[9]研究報道，殼聚糖可以顯著提高克氏原螯蝦幼蝦或親蝦血清中PO活性；李振達等[6]報道0.2% Azomite可以顯著提高凡納濱對蝦血清中PO活性，COS顯著提高了血細胞中小顆粒細胞數(shù)目。

SOD通過消除體內(nèi)多余的自由基，從而免除自由基對生物體的傷害，增強吞噬細胞的防御能力，在預防機體衰老、抵抗生物分子損傷及改善機體的免疫功能等方面具有極為重要的作用[37]。MDA是膜脂過氧化的終產(chǎn)物之一，具有很強的生物毒性。MDA主要損傷生物膜結(jié)構(gòu)，改變膜的通透性，影響生理生化反應，因此MDA含量可以反映出機體細胞受自由基氧化損傷的程度[39]，作為考察細胞受脅迫嚴重程度的指標之一。本試驗中C0.1+M2.5組血清中SOD活性最高并顯著高于C0、C0.1和M2.5組，各添加組肝胰腺中SOD活性均有不同程度的提高，這與李振達等[6]研究中COS能提高凡納濱對蝦血清中總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性以及Lin等[8]研究中COS能提高卵形鯧鲹血清中SOD活性的結(jié)果一致。MA也可提高動物的抗氧化能力，陳繼發(fā)等[14]研究顯示蒙脫石可以顯著提升產(chǎn)蛋雞血清中T-SOD活性和總抗氧化能力，譚崇桂[17]的研究表明0.2%Azomite可顯著提高凡納濱對血清中SOD活性。本試驗中C0.1+M2.5組血清和肝胰腺中MDA含量顯著低于C0和C0.1組，這與Niu等[40]在斑節(jié)對蝦(Penaeusmonodon)中的研究結(jié)果一致。

蝦類血清中的AKP主要來源于肝臟，是一種重要的代謝調(diào)控酶，直接參與磷酸基團的轉(zhuǎn)移及鈣磷代謝，在動物活體內(nèi)作為磷蛋白磷酸酶參與細胞中的物質(zhì)代謝，是甲殼動物吞噬溶酶體的重要組成部分[37]。任秀芳等[9]、白陽[11]的試驗中均顯示低添加量的COS對試驗動物血清中AKP活性無顯著性影響，一定量的COS可以提高其活性，而本試驗結(jié)果顯示，C0.1+M2.5、C0.25+M2.5組血清中AKP活性均顯著低于對照組。研究報道，當動物發(fā)生阻塞性黃疸、原發(fā)性肝癌、膽汁淤積性肝炎等疾病時，肝細胞過度制造AKP進入血液，同時由于肝內(nèi)膽道膽汁排泄障礙，反流入血而引起血清AKP活性明顯升高[41]。吳垠等[42]發(fā)現(xiàn)，患病的中國對蝦血清AKP活性顯著高于正常蝦，重癥期病蝦血清中AKP活性提高幅度增至82.3%～93.7%。Omkar等[43]研究發(fā)現(xiàn)，將一種淡水蝦Macrobrachiumlamarrei暴露于敵敵畏后，發(fā)現(xiàn)其血清中AKP活性增強。因此，本試驗中各添加組對蝦血清中AKP活性維持在較低水平，而在肝胰腺中AKP活性較高，可能恰好說明機體處于一個健康的狀態(tài)。

蝦類血清中LZM主要來源血液，LZM是一種堿性蛋白，它能水解革蘭氏陽性菌細胞壁中黏性多肽的乙酰氨基多糖，并使之裂解釋放出來，形成一個水解酶體系，破壞和消除侵入蝦體的異物，從而擔負起機體防御的功能[37]。Suzuki等[44]發(fā)現(xiàn)COS可以增強T細胞表面白介素-2(IL-2)受體的表達，加速T細胞的成熟以及分化成熟為效應T細胞。本試驗結(jié)果顯示，血清或肝胰腺中LZM活性C0.1、C0.1+M2.5組相比C0組均有不同程度提升。研究報道，飼料中添加COS可以提高凡納濱對蝦血清或肝胰腺中LZM活性[6]，提高動物機體的免疫力[4]。任秀芳等[9]研究顯示，一定量殼聚糖顯著提高克氏原螯蝦血清或肝胰腺中LZM活性，與本試驗結(jié)果一致。因此，COS與MA聯(lián)合添加提升了凡納濱對蝦血清中LZM活性，增強了凡納濱對蝦的非特異性免疫力。

哈維氏弧菌攻毒試驗結(jié)果顯示，單獨或聯(lián)合添加COS和MA均能顯著提高凡納濱對蝦的抗病力，從累積死亡率結(jié)果可知，單獨添加MA的抗病效果不如單獨添加COS或聯(lián)合添加COS與MA，且以高劑量聯(lián)合添加COS與MA(250 mg/kg COS+2 500 mg/kg MA)的抗病效果最好。研究報道，COS能提高雜交羅非魚抗嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)感染的能力[7]，4.0 g/kg的COS可以顯著提高卵形鯧鲹抗哈維氏弧菌感染的能力[8]，Azomite可降低對蝦攻毒溶藻弧菌后的死亡率[17]，以上結(jié)果與本試驗結(jié)果相似。對于COS的抑菌機理，主要是由于其具有質(zhì)子化銨，能與細菌帶負電荷的細胞膜作用，干擾細菌細胞膜功能，造成細菌體內(nèi)細胞質(zhì)流失，同時，水溶性的COS由于分子質(zhì)量小，能進一步進入菌體內(nèi)部，擾亂細胞的正常生理代謝[45]。

本試驗中C0.25+M2.5組血清和肝胰腺中AKP、PO、SOD、LZM活性比C0.1+M2.5組均有所下降，而血清和肝胰腺中MDA含量有所升高，結(jié)合生長性能指標和哈維氏弧菌攻毒后的累積死亡率，說明250 mg/kg COS+2 500 mg/kg MA的促生長和免疫效果減弱，但具有最強的抗病力，有關(guān)二者聯(lián)合添加比例還需進一步深入系統(tǒng)的研究。

4 結(jié) 論

本試驗條件下，飼料中添加一定量的COS和/或MA均能促進凡納濱對蝦的生長、提高非特異性免疫力和抗病力，綜合來看，以100 mg/kg COS和2 500 mg/kg MA聯(lián)合添加時作用效果較佳。

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*Corresponding author, professor, E-mail: dongxiaohui2003@163.com

EffectsofDietaryChitosanOligosaccharideand/orMycotoxinAdsorbentonGrowthPerformance,NonspecificImmunityandDiseaseResistanceofLitopenaeusvannamei

HUANG Qincheng1SHEN Guangrong2TAN Beiping1ZHANG Shuang1HEI Wenjing2DONG Xiaohui1*

(1.LaboratoryofAquaticAnimalNutritionandFeed,FisheriesCollege,GuangdongOceanUniversity,Zhanjiang524088,China; 2.ShenzhenYunongScience&TechnologyCo.,Ltd.,Shenzhen518110,China)

An 8-week feed trial was carried out to investigate the effects of single or combined supplementation of chitosan oligosaccharide (COS) and mycotoxin adsorbents (MA) on the growth performance, nonspecific immunity and disease resistance ofLitopenaeusvannamei. Six isonitrogenous and isolipid diets were prepared. Firstly, a basal diet was formulated as control diet (C0 group), and then 5 diets were formulated by adding 100 mg/kg COS (C0.1 group), 250 mg/kg COS (C0.25 group), 2 500 mg/kg MA (M2.5 group), 100 mg/kg COS+2 500 mg/kg MA (C0.1+M2.5 group), 250 mg/kg COS+2 500 mg/kg MA (C0.25+M2.5 group), respectively. TheLitopenaeusvannameiwith an initial average weight of (0.23±0.02) g were randomly assigned into 6 groups with 3 replicates per group and 40 shrimps per replicate. The results showed as follows: 1) the weight gain rate (WGR) and specific growth rate (SGR) in C0.1+M2.5 group were significantly higher than those in M2.5 groups (P<0.05), the feed conversion ratio (FCR) in C0.1+M2.5 group was significantly lower than that of other groups (P<0.05) and showed the minimum value, the maximum protein efficiency rate (PER) was occurred in C0.1+M2.5 group and was significantly higher than that of other groups (P<0.05) except C0.25+M0.25 group. The crude protein content of shrimp body in C0.1+M2.5 group was significantly higher than that in C0.1 group (P<0.05), and the crude lipid content of shrimp body in C0.1+M2.5 group was significantly lower than that in C0.1 group (P<0.05). 2) In the serum, the activity of alkaline phosphatase (AKP) in C0.1+M2.5 and C0.25+M2.5 groups was significantly lower than that in C0.1 and C0.25 groups (P<0.05), the activities of superoxide dismutase (SOD) and phenoloxidase (PO) in C0.1+M2.5 group were significantly higher than those in M2.5 and C0.1 groups (P<0.05), and the content of malondialdehyde (MDA) in C0.1+M2.5 group was significantly lower than that in C0.1 and C0.25 groups (P<0.05). In the hepatopancreas, the content of MDA in C0.1+M2.5 group was significantly lower than that in C0.1 group (P<0.05), and the activities of AKP, PO, SOD and lysozyme (LZM) in C0.25+M2.5 group were lower than those in C0.1+M2.5 group, but the content of MDA was higher inversely. 3) Shrimps were challenged byVibrioharveyifor the next 7 days, the cumulative mortality rate in C0.1+M2.5 and C0.25+M2.5 groups was significantly lower than that in C0 and M2.5 groups (P<0.05). It can be concluded that adding a certain amount of COS and/or MA in diets can do good to the growth, nonspecific immunity and disease resistance ofLitopenaeusvannamei, the combined supplementations of COS and MA show better growth, nonspecific immunity and disease resistance than single supplementation of COS and MA, and the combined supplementation of 100 mg/kg COS and 2 500 mg/kg MA under this experimental condition shows the better effect.[ChineseJournalofAnimalNutrition,2017,29(11)：4036-4047]

chitosan oligosaccharide; mycotoxin adsorbent;Litopenaeusvannamei; growth performance; nonspecific immunity; disease resistance

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.11.025

S963

A

1006-267X(2017)11-4036-12

2017-05-09

深圳市戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項(SWCYL20150331010019)；廣東省科技計劃項目(2015A020209170)；漁港建設(shè)和漁業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項(A201608C06)

黃欽成(1993—)，男，湖北孝感人，碩士研究生，研究方向為水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料。E-mail: qinchengh0814@163.com

*通信作者：董曉慧，教授，博士生導師，E-mail: dongxiaohui2003@163.com

(責任編輯 菅景穎)