周 偉 徐小艷 徐正軍 王相子 開(kāi) 妍 陳昌海

（溧水區(qū)農(nóng)業(yè)局，江蘇溧水 211200）

重組禽流感病毒H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+ Re-8株）免疫抗體監(jiān)測(cè)與分析

周 偉 徐小艷 徐正軍 王相子 開(kāi) 妍 陳昌海

（溧水區(qū)農(nóng)業(yè)局，江蘇溧水 211200）

為評(píng)估我省使用重組禽流感病毒H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）以來(lái)的雞群免疫效果，筆者對(duì)2016年全省春防、秋防、定點(diǎn)監(jiān)測(cè)及日常監(jiān)測(cè)所采集的規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)及散養(yǎng)戶(hù)樣品進(jìn)行了免疫抗體檢測(cè)與分析。檢測(cè)結(jié)果表明，江蘇省H5亞型高致病性禽流感Re-6株平均免疫抗體合格率為96.39%；Re-7株平均免疫抗體合格率為95.75%；Re-8株平均免疫抗體合格率為95.56%，均超過(guò)國(guó)家和我省規(guī)定的免疫要求。大部分地區(qū)的免疫抗體合格率呈現(xiàn)較高的一致性。在種雞場(chǎng)、商品代飼養(yǎng)場(chǎng)（戶(hù)）、散養(yǎng)戶(hù)中，種雞場(chǎng)的免疫效果最好。

高致病性禽流感；血凝抑制試驗(yàn)；免疫抗體合格率

禽流感是由A型流感病毒引起的以呼吸系統(tǒng)癥狀為主要表現(xiàn)的禽類(lèi)傳染性疾病綜合征。根據(jù)禽流感病毒致病性的不同，可以將禽流感分為高致病性、低致病性、無(wú)致病性禽流感，H5亞型毒株所引起的疾病稱(chēng)為高致病性禽流感（High Pathogenic Avian Influenza，HPAI），它不僅導(dǎo)致禽類(lèi)發(fā)病死亡，而且可以感染人，使人發(fā)病死亡，因而是一種需要嚴(yán)格控制的人畜共患病[1-2]。

當(dāng)前我國(guó)H5亞型AIV主要流行譜系為第2.3.4.4分支、第2.3.2.1c分支和第7.2分支，其對(duì)應(yīng)的疫苗分別為Re-8、Re-6和Re-7。其中，第2.3.4.4分支又可細(xì)分為第2.3.4.4a、2.3.4.4b、2.3.4.4c、2.3.4.4d四個(gè)小分支，Re-8疫苗株屬于第2.3.4.4d分支[3]。H5亞型高致病性禽流感病毒具有高度變異性，為提高疫苗與現(xiàn)流行毒株的匹配性，2014年底，農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)了針對(duì)該分支病毒的Re-8疫苗，我省2016年將對(duì)雞群使用的重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）替換為重組禽流感病毒H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）。為評(píng)估我省使用該疫苗后的雞群免疫效果，更好地開(kāi)展禽流感防控工作，筆者對(duì)2016年更換疫苗后全省春防、秋防、定點(diǎn)監(jiān)測(cè)及日常監(jiān)測(cè)所采集的規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)及散養(yǎng)戶(hù)樣品進(jìn)行了免疫抗體檢測(cè)與分析[4]。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品來(lái)源：2016年江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心在開(kāi)展重大動(dòng)物疫病春防、秋防、定點(diǎn)監(jiān)測(cè)、日常監(jiān)測(cè)等工作中，隨機(jī)抽檢的雞血清樣品942份，所檢雞群均免疫了重組禽流感病毒H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株），免疫密度達(dá)100%。樣品來(lái)自全省13個(gè)市25個(gè)縣（市、區(qū)）49個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的174個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)（戶(hù)）。

檢測(cè)試劑：禽流感病毒H5亞型（Re-6株）血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清；禽流感病毒H5亞型（Re-7株）血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清；禽流感病毒H5亞型（Re-8株）血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清，均由哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司提供，自配1%雞紅細(xì)胞。

1.2 方法

參照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》GB/T 18936-2003中規(guī)定的血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)技術(shù)，首先采用血凝試驗(yàn)（HA）對(duì)禽流感病毒H5亞型Re-6株、Re-7株、Re-8株進(jìn)行血凝價(jià)測(cè)定，再通過(guò)血凝試驗(yàn)結(jié)果配制4HAU的病毒抗原，最后采用血凝抑制試驗(yàn)（HI）檢測(cè)樣品中禽流感病毒H5亞型Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體。

1.3 結(jié)果判定

以完全抑制4個(gè)HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度，即血清效價(jià)。雞免疫21d后，抗體效價(jià)≥24判為免疫合格；抽檢雞群免疫抗體合格率≥80%判為合格。

2 檢測(cè)結(jié)果

2.1 各地區(qū)的疫苗免疫抗體合格率

對(duì)13個(gè)市的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較后可見(jiàn)：13個(gè)市的高致病性禽流感免疫抗體合格率均高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%和我省規(guī)定的80%的標(biāo)準(zhǔn)。其中3市、4市、9市、10市等4個(gè)市H5亞型高致病性禽流感Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率均達(dá)到100%。詳見(jiàn)表1。

表1 各市免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同類(lèi)別雞群的免疫抗體合格率

2016年，共檢測(cè)各類(lèi)養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)174個(gè)。檢測(cè)種雞場(chǎng)3個(gè)，Re-6株檢測(cè)樣品45份，合格44份，合格率97.78%；Re-7株檢測(cè)樣品45份，合格45份，合格率100%；Re-8株檢測(cè)樣品45份，合格45份，合格率100%。檢測(cè)商品代飼養(yǎng)場(chǎng)（戶(hù)）25個(gè)，Re-6株檢測(cè)樣品354份，合格340份，合格率96.05%；Re-7株檢測(cè)樣品356份，合格345份，合格率96.91%；Re-8株檢測(cè)樣品349份，合格333份，合格率95.42%。檢測(cè)散養(yǎng)戶(hù)146個(gè)，Re-6株檢測(cè)樣品542份，合格523份，合格率96.49%；Re-7株檢測(cè)樣品541份，合格512份，合格率94.64%；Re-8株檢測(cè)樣品530份，合格505份，合格率95.28%。詳見(jiàn)表2。

2.3 不同時(shí)間段的免疫抗體合格率

2016年上半年全省H5亞型高致病性禽流感Re-6株共檢測(cè)樣品121份，合格117份，合格率為96.69%，Re-7株共檢測(cè)樣品121份，合格113份，合格率93.39%，Re-8株共檢測(cè)樣品119份，合格107份，合格率89.92%；2016年下半年H5亞型高致病性禽流感Re-6株共檢測(cè)樣品820份，合格790份，合格率96.34%，Re-7株共檢測(cè)樣品821份，合格789份，合格率96.10%，Re-8株共檢測(cè)樣品805份，合格776份，合格率96.40%。詳見(jiàn)表3。

共檢測(cè)雞血清樣品2807份，合格2692份，合格率95.90%。其中H5亞型高致病性禽流感Re-6株共檢測(cè)樣品941份，合格907份，合格率96.39%，Re-7株共檢測(cè)樣品942份，合格902份，合格率95.75%，Re-8株共檢測(cè)樣品924份，合格883份，合格率95.56%。

3 討論

從2016年江蘇省13個(gè)市的H5亞型高致病性禽流感免疫抗體檢測(cè)結(jié)果看，Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率均超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（70%）和我省標(biāo)準(zhǔn)（80%），且免疫抗體整體水平較高，說(shuō)明我省自推廣使用重組禽流感病毒H5亞型三價(jià)滅活苗（Re-6株+ Re-7株+ Re-8株）以來(lái)，H5亞型高致病性禽流感整體免疫情況良好。

具體對(duì)比各市檢測(cè)結(jié)果，13個(gè)市H5亞型Re-6株平均免疫抗體合格率為96.39%，其中最高的市為100.00%，最低的市為85.25%； Re-7株平均免疫抗體合格率為95.75%，其中最高的市為100.00%，最低的市為87.10%； Re-8株平均免疫抗體合格率為95.56%，其中最高的市為100.00%，最低的市為85.00%。13個(gè)市H5亞型高致病性禽流感Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率離散程度較小，合格率低于90%的只有1個(gè)市，說(shuō)明我省絕大多數(shù)地區(qū)均按照合理的免疫程序、正確的接種方法開(kāi)展免疫，免疫效果良好。從圖1可見(jiàn)，絕大多數(shù)市Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率較整齊，但1市、7市Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率差異較大，導(dǎo)致這一結(jié)果的原因可能是這些地區(qū)的某些雞群由于品種、健康狀況等因素，對(duì)同一疫苗不同疫苗株的免疫反應(yīng)強(qiáng)弱不一致，或是受到之前接種的禽流感二價(jià)苗（Re-6株+ Re-7株）干擾，影響對(duì)三價(jià)苗（Re-6株+ Re-7株+ Re-8株）的反應(yīng)，對(duì)于這一類(lèi)場(chǎng)點(diǎn)，應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)養(yǎng)殖管理，加大日常監(jiān)測(cè)，及時(shí)補(bǔ)免，降低疫情隱患。

表2 不同類(lèi)別雞群的免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 不同時(shí)間段免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

圖1 13個(gè)市重組禽流感三價(jià)苗免疫抗體合格率分布

2016年共檢測(cè)174個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)（戶(hù)）的樣品，其中種雞場(chǎng)3個(gè)，Re-6株平均免疫抗體合格率為97.78%，Re-7株平均免疫抗體合格率為100%，Re-8株平均免疫抗體合格率為100%，3個(gè)種雞場(chǎng)各株型免疫抗體合格率均高于80%；商品代飼養(yǎng)場(chǎng)（戶(hù)）25個(gè)，Re-6株平均免疫抗體合格率為96.05%，平均免疫抗體合格率高于80%的場(chǎng)有23個(gè)，占92%，Re-7株平均免疫抗體合格率為96.91%，平均免疫抗體合格率高于80%的場(chǎng)有24個(gè)，占96%，Re-8株平均免疫抗體合格率為95.42%，平均免疫抗體合格率高于80%的場(chǎng)有22個(gè)，占88%；散養(yǎng)戶(hù)146個(gè)，Re-6株平均免疫抗體合格率為96.49%，平均免疫抗體合格率高于80%的場(chǎng)有136個(gè)，占93.15%，Re-7株平均免疫抗體合格率為94.64%，平均免疫抗體合格率高于80%的場(chǎng)有128個(gè)，占87.67%，Re-8株平均免疫抗體合格率為95.28%，平均免疫抗體合格率高于80%的場(chǎng)有132個(gè)，占90.41%。從圖2可見(jiàn)：1.各類(lèi)型場(chǎng)點(diǎn)雞群Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率均處于高位，種雞場(chǎng)、存欄量大于1萬(wàn)只的商品代養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）的H5亞型禽流感疫苗整體免疫效果較存欄量小于1萬(wàn)只的商品代飼養(yǎng)場(chǎng)（戶(hù)）、散養(yǎng)戶(hù)好。2.各類(lèi)型場(chǎng)點(diǎn)群體合格率（免疫抗體合格率≥80%的場(chǎng)點(diǎn)數(shù)/監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)數(shù)×100%）均處于高位，種雞場(chǎng)、存欄量大于1萬(wàn)只的商品代養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）群體合格率較存欄量小于1萬(wàn)只的商品代養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）、散養(yǎng)戶(hù)高。分析原因，可能有以下幾方面：（1）種雞場(chǎng)和大、中型商品代養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）對(duì)疫病防控的意識(shí)較強(qiáng)，多按合理程序免疫；而部分小型商品代養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）、散養(yǎng)戶(hù)缺乏對(duì)雞群日齡、健康狀況、免疫檔案的管理，免疫程序不規(guī)范或通過(guò)春、秋季開(kāi)展的集中免疫行動(dòng)進(jìn)行免疫，造成漏免或補(bǔ)免不及時(shí)。（2）種雞場(chǎng)和大、中型商品代養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）養(yǎng)殖環(huán)境優(yōu)、養(yǎng)殖管理嚴(yán)格、動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)好、健康少病，免疫應(yīng)激小，抗體產(chǎn)生早且維持時(shí)間長(zhǎng)；而部分小型商品代養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）、散養(yǎng)戶(hù)養(yǎng)殖環(huán)境、養(yǎng)殖管理、動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)、健康狀況相對(duì)較差，免疫應(yīng)激大，影響免疫效果。（3）種雞場(chǎng)和大、中型商品代養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）疫苗保存和接種方法得當(dāng)，免疫效果好；而部分小型商品代養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）、散養(yǎng)戶(hù)疫苗保存不符合要求或在注射疫苗時(shí)稀釋方法不當(dāng)、稀釋后未及時(shí)使用等導(dǎo)致免疫失敗或效果不好。綜上所述，規(guī)范的養(yǎng)殖管理、規(guī)范的免疫程序、及時(shí)的免疫監(jiān)測(cè)、妥善的疫苗保存、正確的接種方法都可以提高免疫效果，多方并舉對(duì)有效控制高致病性禽流感更為有利。

圖2 不同類(lèi)型場(chǎng)點(diǎn)抗體合格率、群體合格率分布圖

2016年上半年，H5亞型Re-6株免疫抗體合格率為96.09%，Re-7株免疫抗體合格率為93.39%，Re-8株免疫抗體合格率為89.92%；2016年下半年，H5亞型Re-6株免疫抗體合格率為96.34%，Re-7株免疫抗體合格率為96.10%，Re-8株免疫抗體合格率為96.40%。比較發(fā)現(xiàn)，重組禽流感病毒H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）的持續(xù)使用對(duì)抗體水平產(chǎn)生了以下影響：1.三種毒株免疫抗體合格率均有所提高，特別是Re-8株，合格率提高了6.48個(gè)百分點(diǎn)。2.三種毒株免疫抗體合格率之間的差異顯著縮小。表明重組禽流感病毒H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）替換并持續(xù)使用后，H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）對(duì)Re-6株、Re-7株平均免疫抗體合格率的影響逐漸減小，Re-8株免疫抗體水平不斷提高，推動(dòng)我省高致病性禽流感免疫抗體水平持續(xù)向好。

[1] 蘭德增.高致病性禽流感[J].生命科學(xué)，2005，17（1）：60-63.

[2] 徐小艷.重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗免疫抗體監(jiān)測(cè)與分析[J].畜牧與獸醫(yī)，2011，43（6）：50-52.

[3] 蔣文明.H5亞型高致病性禽流感病毒抗原性變異分析[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2016，33（9）：27-32.

[4] 王相子.重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）免疫抗體監(jiān)測(cè)分析[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊，2017，264（1）：198-199.