張愛(ài)朝

（平頂山市飼草飼料管理站，河南平頂山 467000）

規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥物試驗(yàn)

張愛(ài)朝

（平頂山市飼草飼料管理站，河南平頂山 467000）

從數(shù)例疑似副豬嗜血桿菌病豬的病料中分離袋3株細(xì)菌，通過(guò)細(xì)菌形態(tài)特征、培養(yǎng)特性和生長(zhǎng)特性的觀察，確診該病的病原菌是副豬嗜血桿菌。同時(shí)，對(duì)分離菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，為今后防控該病提供試驗(yàn)依據(jù)。

副豬嗜血桿菌；分離；鑒定；藥敏試驗(yàn)

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（HPS）引起豬的以纖維素性漿膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎和腦膜炎為特征的傳染病[1]。臨床主要癥狀為發(fā)熱、呼吸困難、關(guān)節(jié)腫脹、跛行、運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)、不愿活動(dòng)等副豬嗜血桿菌只感染豬，一般多發(fā)生于斷奶前后及保育豬，感染高峰期通常見(jiàn)于4周～6周，病死率可達(dá)50%，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大損失。為了解羅山縣該病流行血清型情況，本試驗(yàn)對(duì)疑似副豬嗜血桿菌病病料分離并鑒定，并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 病料

無(wú)菌采取疑似副豬嗜血桿菌病豬心包液、腹腔液、關(guān)節(jié)液、呼吸道分泌物等。

1.2 試驗(yàn)試劑與培養(yǎng)基

NAD鮮血瓊脂培養(yǎng)基、5%血液巧克力瓊脂平板、2%蛋白胨瓊脂平板等其他基礎(chǔ)培養(yǎng)基按常規(guī)試驗(yàn)方法制備。半乳糖、蔗糖、甘露醇、果糖、葡萄糖、木糖等微量生化鑒定管購(gòu)自杭州華康微生物試劑有限公司。氧氟沙星、丁胺卡那霉素、阿莫西林等抗生素藥敏紙片購(gòu)自上海博亞生物技術(shù)公司。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)菌株

金黃色葡萄球菌，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.4 細(xì)菌純化培養(yǎng)

挑去病料接種于含NAD鮮血培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24～48h，然后，再挑去圓形、光滑濕潤(rùn)、無(wú)色透明的菌落分別接種于5%血液巧克力瓊脂平板和2%蛋白胨瓊脂平板培養(yǎng)基，進(jìn)行細(xì)菌純化培養(yǎng)，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)形態(tài)。

1.5 菌體形態(tài)及染色

挑去上述純化培養(yǎng)物，涂片，革蘭氏染色，鏡檢，觀察觀察細(xì)菌形態(tài)。

1.6 衛(wèi)星現(xiàn)象觀察

無(wú)菌采集上述菌落，接種于2%蛋白胨瓊脂平板血平板上，再挑取金黃色葡萄球菌作兩條平行劃線(xiàn)在血平板上，置CO2培養(yǎng)箱，37℃培養(yǎng)18～24h后觀察細(xì)菌生產(chǎn)情況。

1.7 生化鑒定試驗(yàn)

將分離菌單個(gè)菌落分別接種于半乳糖、蔗糖、甘露醇、果糖、葡萄糖、木糖等微量生化鑒定管，置CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h，觀察反應(yīng)結(jié)果。

表1 分離菌生化特性

1.8 藥敏試驗(yàn)

按常規(guī)方法進(jìn)行，將分離到的單個(gè)細(xì)菌菌落均勻涂于氧氟沙星、丁胺卡那霉素、阿莫西林、環(huán)丙沙星、替米考星等10種抗生素藥敏試紙，37℃培養(yǎng)24h后，觀察測(cè)定抑菌圈的大小。

2 結(jié)果

2.1 菌落形態(tài)及鏡檢特征

革蘭氏染色鏡檢，可見(jiàn)革蘭氏陰性菌，短桿狀多見(jiàn)，也有球狀、桿狀、長(zhǎng)絲狀。5%血液巧克力瓊脂平板和2%蛋白胨瓊脂平板上可見(jiàn)呈露珠、閃光、無(wú)色透明、圓形、光滑濕潤(rùn)、直徑1 mm左右的小菌落。分離到的3株細(xì)菌被別命名為L(zhǎng)S1、LS2、LS3。

2.2 衛(wèi)星現(xiàn)象觀察

在金黃色葡萄球菌兩側(cè)有菌落生長(zhǎng)，距葡萄球菌近的較大，遠(yuǎn)的較細(xì)小，直到不生長(zhǎng)。表明分離菌均有衛(wèi)星現(xiàn)象。

2.3 生化特性結(jié)果

生化特性結(jié)果見(jiàn)表1

表1可以看出，分離到的3株細(xì)菌都符合副豬嗜血桿菌生化特性[2]，進(jìn)一步證明3株分離菌為副豬嗜血桿菌。

2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3株分離細(xì)菌對(duì)頭孢唑啉、頭孢拉定、替米考星、慶大霉素、氧氟沙星均高度敏感；對(duì)阿米卡星均中度敏感；對(duì)諾氟沙星、丁胺卡那霉素、阿莫西林呈低度敏感；對(duì)鏈霉素、多西環(huán)素、金霉素、四環(huán)素、均為耐藥。

3 討論與小結(jié)

本試驗(yàn)表明，從羅山縣養(yǎng)豬場(chǎng)分離到的3株細(xì)菌為副豬嗜血桿菌。這為今后羅山豬病診斷、防控該病提供了試驗(yàn)依據(jù)。

對(duì)副豬嗜血桿菌的預(yù)防主要是注射疫苗，但是由于副豬嗜血桿菌血清型比較多，按Kieletein-Rapp-Gabrielson（KRG）血清分型方法，目前副豬嗜血桿菌至少可分為15個(gè)血清型[3]，而不同血清型之間不存在交叉免疫，所以疫苗不能達(dá)到很好的免疫效果，對(duì)該病的治療臨床上目前還是以使用抗生素為主。但是由于抗生素的耐藥性，不同菌株對(duì)同一種抗生素的敏感性有很大差異，因此，要在進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇藥物，不能長(zhǎng)期、大劑量使用同一種藥，要交替輪換使用。

[1] 馬增軍.副豬嗜血桿菌重要生物學(xué)特性測(cè)定[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2005，（1）：28-29.

[2] 陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2001：258-261.

[3] 蔡保祥.家畜傳染病學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001：258-259.