張愛(ài)朝
(平頂山市飼草飼料管理站,河南平頂山 467000)
規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥物試驗(yàn)
張愛(ài)朝
(平頂山市飼草飼料管理站,河南平頂山 467000)
從數(shù)例疑似副豬嗜血桿菌病豬的病料中分離袋3株細(xì)菌,通過(guò)細(xì)菌形態(tài)特征、培養(yǎng)特性和生長(zhǎng)特性的觀察,確診該病的病原菌是副豬嗜血桿菌。同時(shí),對(duì)分離菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn),為今后防控該病提供試驗(yàn)依據(jù)。
副豬嗜血桿菌;分離;鑒定;藥敏試驗(yàn)
副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌(HPS)引起豬的以纖維素性漿膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎和腦膜炎為特征的傳染病[1]。臨床主要癥狀為發(fā)熱、呼吸困難、關(guān)節(jié)腫脹、跛行、運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)、不愿活動(dòng)等副豬嗜血桿菌只感染豬,一般多發(fā)生于斷奶前后及保育豬,感染高峰期通常見(jiàn)于4周~6周,病死率可達(dá)50%,給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大損失。為了解羅山縣該病流行血清型情況,本試驗(yàn)對(duì)疑似副豬嗜血桿菌病病料分離并鑒定,并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。
無(wú)菌采取疑似副豬嗜血桿菌病豬心包液、腹腔液、關(guān)節(jié)液、呼吸道分泌物等。
NAD鮮血瓊脂培養(yǎng)基、5%血液巧克力瓊脂平板、2%蛋白胨瓊脂平板等其他基礎(chǔ)培養(yǎng)基按常規(guī)試驗(yàn)方法制備。半乳糖、蔗糖、甘露醇、果糖、葡萄糖、木糖等微量生化鑒定管購(gòu)自杭州華康微生物試劑有限公司。氧氟沙星、丁胺卡那霉素、阿莫西林等抗生素藥敏紙片購(gòu)自上海博亞生物技術(shù)公司。
金黃色葡萄球菌,購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。
挑去病料接種于含NAD鮮血培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)24~48h,然后,再挑去圓形、光滑濕潤(rùn)、無(wú)色透明的菌落分別接種于5%血液巧克力瓊脂平板和2%蛋白胨瓊脂平板培養(yǎng)基,進(jìn)行細(xì)菌純化培養(yǎng),觀察細(xì)菌生長(zhǎng)形態(tài)。
挑去上述純化培養(yǎng)物,涂片,革蘭氏染色,鏡檢,觀察觀察細(xì)菌形態(tài)。
無(wú)菌采集上述菌落,接種于2%蛋白胨瓊脂平板血平板上,再挑取金黃色葡萄球菌作兩條平行劃線(xiàn)在血平板上,置CO2培養(yǎng)箱,37℃培養(yǎng)18~24h后觀察細(xì)菌生產(chǎn)情況。
將分離菌單個(gè)菌落分別接種于半乳糖、蔗糖、甘露醇、果糖、葡萄糖、木糖等微量生化鑒定管,置CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h,觀察反應(yīng)結(jié)果。
表1 分離菌生化特性
按常規(guī)方法進(jìn)行,將分離到的單個(gè)細(xì)菌菌落均勻涂于氧氟沙星、丁胺卡那霉素、阿莫西林、環(huán)丙沙星、替米考星等10種抗生素藥敏試紙,37℃培養(yǎng)24h后,觀察測(cè)定抑菌圈的大小。
革蘭氏染色鏡檢,可見(jiàn)革蘭氏陰性菌,短桿狀多見(jiàn),也有球狀、桿狀、長(zhǎng)絲狀。5%血液巧克力瓊脂平板和2%蛋白胨瓊脂平板上可見(jiàn)呈露珠、閃光、無(wú)色透明、圓形、光滑濕潤(rùn)、直徑1 mm左右的小菌落。分離到的3株細(xì)菌被別命名為L(zhǎng)S1、LS2、LS3。
在金黃色葡萄球菌兩側(cè)有菌落生長(zhǎng),距葡萄球菌近的較大,遠(yuǎn)的較細(xì)小,直到不生長(zhǎng)。表明分離菌均有衛(wèi)星現(xiàn)象。
生化特性結(jié)果見(jiàn)表1
表1可以看出,分離到的3株細(xì)菌都符合副豬嗜血桿菌生化特性[2],進(jìn)一步證明3株分離菌為副豬嗜血桿菌。
3株分離細(xì)菌對(duì)頭孢唑啉、頭孢拉定、替米考星、慶大霉素、氧氟沙星均高度敏感;對(duì)阿米卡星均中度敏感;對(duì)諾氟沙星、丁胺卡那霉素、阿莫西林呈低度敏感;對(duì)鏈霉素、多西環(huán)素、金霉素、四環(huán)素、均為耐藥。
本試驗(yàn)表明,從羅山縣養(yǎng)豬場(chǎng)分離到的3株細(xì)菌為副豬嗜血桿菌。這為今后羅山豬病診斷、防控該病提供了試驗(yàn)依據(jù)。
對(duì)副豬嗜血桿菌的預(yù)防主要是注射疫苗,但是由于副豬嗜血桿菌血清型比較多,按Kieletein-Rapp-Gabrielson(KRG)血清分型方法,目前副豬嗜血桿菌至少可分為15個(gè)血清型[3],而不同血清型之間不存在交叉免疫,所以疫苗不能達(dá)到很好的免疫效果,對(duì)該病的治療臨床上目前還是以使用抗生素為主。但是由于抗生素的耐藥性,不同菌株對(duì)同一種抗生素的敏感性有很大差異,因此,要在進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選擇藥物,不能長(zhǎng)期、大劑量使用同一種藥,要交替輪換使用。
[1] 馬增軍.副豬嗜血桿菌重要生物學(xué)特性測(cè)定[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2005,(1):28-29.
[2] 陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2001:258-261.
[3] 蔡保祥.家畜傳染病學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2001:258-259.