武利宏

（臨江鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)畜牧服務(wù)中心，黑龍江同江 156400）

奶牛布魯氏菌病血清學(xué)診斷方法的比較體會(huì)

武利宏

（臨江鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)畜牧服務(wù)中心，黑龍江同江 156400）

本文主要就對(duì)三種奶牛布魯氏菌病血清學(xué)診斷方法展開(kāi)了對(duì)比分析，即比較了虎紅平板凝集試驗(yàn)、快速診斷試紙卡檢測(cè)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在進(jìn)行奶牛布魯氏菌病血清學(xué)檢測(cè)時(shí)的優(yōu)點(diǎn)與缺陷。結(jié)果顯示：虎紅平板凝集試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)便且成本相對(duì)較低，對(duì)于陽(yáng)性病牛有著較高的檢出率，然而且缺陷則是特異性相對(duì)較差，且較易發(fā)生假陽(yáng)性情況；快速診斷試紙卡檢測(cè)和間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)血清學(xué)診斷方法相對(duì)比，在敏感性、特異性、陽(yáng)性檢出率等方面的比較均無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在實(shí)際的奶牛布魯氏菌病血清學(xué)診斷過(guò)程中還應(yīng)具體結(jié)合以發(fā)病地區(qū)的實(shí)際情況，與自身?xiàng)l件來(lái)選取出適宜的檢測(cè)方法。

奶牛；布魯氏菌??；血清學(xué)診斷；敏感性；特異性；陽(yáng)性檢出率

目前臨床上針對(duì)布魯氏菌病病癥的診斷方法主要是以血清學(xué)檢驗(yàn)為主，較為主流的血清學(xué)檢驗(yàn)方法就包括了虎紅平板凝集試驗(yàn)、快速診斷試紙卡檢測(cè)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等方面，據(jù)此，下文將就這三種血清學(xué)診斷方法的優(yōu)缺點(diǎn)展開(kāi)具體分析。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

于2015年3月～2016年7月，分多次由某規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)采集具備布魯氏菌病典型癥狀奶牛學(xué)樣2627份。

1.1.2 試劑

采用布魯氏菌虎紅平板凝集抗原（生產(chǎn)企業(yè)：上海恪敏生物科技有限公司）、布魯氏菌抗體快速檢測(cè)試劑卡（生產(chǎn)企業(yè)：深圳真瑞生物科技有限公司）、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：上海撫生實(shí)業(yè)有限公司）

1.1.3 儀器

酶標(biāo)儀（產(chǎn)品型號(hào)：南京德鐵HBS-1096A）、自動(dòng)洗板機(jī)（產(chǎn)品型號(hào)：五星行RT-6000）、高速冷凍離心機(jī)（產(chǎn)品型號(hào)：GL-2050MS）、Eppendorf 移液槍（產(chǎn)品規(guī)格：0.1～2.5μl，生產(chǎn)企業(yè)：上海艾研生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 制備血清

將所采集到的血液樣本放置在37℃的環(huán)境下持續(xù)靜置60min，再于4℃條件下靜置60min。而后將樣本放進(jìn)離心套筒當(dāng)中校對(duì)平衡，對(duì)稱置入離心機(jī)內(nèi)，離心機(jī)轉(zhuǎn)速保持在3000r/min。抽取經(jīng)過(guò)離心后的采血管，采用Eppendorf 移液槍抽出上部清液，分配到經(jīng)高壓滅菌處理后的離心管內(nèi)，存儲(chǔ)于-20℃的環(huán)境當(dāng)中。

1.2.2 虎紅平板凝集試驗(yàn)

預(yù)先準(zhǔn)備好布魯氏菌虎紅平板凝集抗原、制備出的陽(yáng)性及陰性血清；要確保所檢測(cè)的血清保持清潔且未出現(xiàn)溶血及腐敗現(xiàn)象；置于清潔玻璃板并聚集于4cm2的格狀區(qū)域內(nèi)，并對(duì)其進(jìn)行均勻攪拌為凝集試驗(yàn)做好準(zhǔn)備。依據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T18646-2002進(jìn)行試驗(yàn)檢測(cè)與結(jié)果判斷。

1.2.3 快速診斷試紙卡檢測(cè)

把未開(kāi)啟的快速診斷試紙卡以及檢測(cè)樣本置于正常室溫環(huán)境下；吸取血清直至達(dá)到刻度線位置，于平面內(nèi)所置入的試紙卡加樣孔逐步滴加血清。對(duì)試紙卡加樣孔內(nèi)逐漸底滴加經(jīng)稀釋處理后的液體。依據(jù)試紙卡操作說(shuō)明要求判定檢測(cè)結(jié)果。

1.2.4 間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

此項(xiàng)試驗(yàn)操作過(guò)程可依據(jù)試劑盒應(yīng)用說(shuō)明書(shū)來(lái)開(kāi)展，把完成包裝后的抗原板置入檢測(cè)血清，對(duì)陽(yáng)性血清樣本及陰性血清樣本進(jìn)行對(duì)比分析，而后再通過(guò)孵育、洗板、加酶標(biāo)抗體、加終止液等處理后再依據(jù)OD值對(duì)其結(jié)果做出判斷。

1.3 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用SPSS22.0軟件開(kāi)展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析研究，以（%）來(lái)表示計(jì)數(shù)資料，采用x2來(lái)對(duì)三種不同診斷方法的陽(yáng)性檢出率進(jìn)行組間對(duì)比驗(yàn)證，比較結(jié)果以P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

虎紅平板凝集試驗(yàn)、快速診斷試紙卡檢測(cè)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)三種診斷方法的陽(yáng)性檢出率分別達(dá)到了50.4%、45.26%、45.72%，其中虎紅平板凝集試驗(yàn)的陽(yáng)性檢出率明顯高于另外兩種診斷方法，且組間對(duì)比差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但在檢出靈敏性方面相對(duì)較低?？焖僭\斷試紙卡檢測(cè)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)兩種方法的組間對(duì)比結(jié)果無(wú)明顯差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 三種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 （份）

3 討論

奶牛布魯氏菌病的傳染來(lái)源主要為患病牲畜。其糞尿、乳汁等排出物均存在有不同程度的病原菌，在接觸到周圍環(huán)境后便會(huì)導(dǎo)致牲畜飲水、圈舍、飼料槽等將會(huì)受到病菌污染。在患病母畜流產(chǎn)時(shí)，病原菌也將會(huì)隨子宮分泌物、胎衣等一起排出，其危害將更加巨大。布魯氏菌病的爆發(fā)不但會(huì)導(dǎo)致養(yǎng)殖戶將面臨巨大的經(jīng)濟(jì)虧損，同時(shí)還會(huì)導(dǎo)致人體患病，所產(chǎn)生的安全隱患極其嚴(yán)重。

本次研究結(jié)果表明虎紅平板凝集試驗(yàn)相較于快速診斷試紙卡檢測(cè)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在陽(yáng)性檢出率方面準(zhǔn)確性較高，但其檢出靈敏性相對(duì)較差。而后兩種血清學(xué)診斷方面比較無(wú)明顯差異。對(duì)此，在實(shí)際的奶牛布魯氏菌病血清學(xué)診斷過(guò)程中還應(yīng)具體結(jié)合以發(fā)病地區(qū)的實(shí)際情況與自身?xiàng)l件來(lái)選取相對(duì)更加科學(xué)、合理的檢測(cè)方法。

[1] 王雙山，王真，馬延光，等.奶牛布魯氏菌病微量凝集試驗(yàn)診斷方法的建立[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2013，40（5）：206-210.

[2] 張鵬，弓瑞娟.淺談奶牛布魯氏菌病的診斷及防治[J].中國(guó)畜禽種業(yè)，2014，10（10）：104-105.