黨國旗 楊新宇 許 晴 崔 嘉 陳寶江

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，保定 071001)

殼寡糖對斷奶仔豬免疫力及相關(guān)理化指標(biāo)的影響

黨國旗 楊新宇 許 晴 崔 嘉 陳寶江*

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，保定 071001)

本試驗(yàn)旨在探討殼寡糖對斷奶仔豬免疫力及相關(guān)理化指標(biāo)的影響。試驗(yàn)選用21日齡“杜長大”雜交斷奶仔豬256頭，隨機(jī)分為4個組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)16頭豬。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加50、100和150 g/t殼寡糖的飼糧。預(yù)試期7 d，試驗(yàn)期28 d。結(jié)果表明：1)與對照組相比，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活性分別降低了26.71%(P<0.01)、7.56%(P>0.05)和16.64%(P<0.05)，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性分別降低了47.26%(P<0.05)、47.28%(P<0.01)和21.88%(P>0.05)，血清堿性磷酸酶活性分別提高了6.37%、16.78%和1.24%(P>0.05)；試驗(yàn)組血清總蛋白含量均高于對照組(P>0.05)。2)與對照組相比，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組血清免疫球蛋白A含量分別提高了45.40%(P<0.05)、2.62%(P>0.05)和137.26%(P<0.01)；試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組血清免疫球蛋白G含量分別較對照組提高了4.47%和10.92%(P>0.05)，血清免疫球蛋白M含量分別比對照組提高了9.29%和5.69%(P>0.05)；與對照組相比，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組血清腫瘤壞死因子-α含量分別提高了51.76%(P<0.01)、29.42%(P>0.05)和88.29%(P<0.01)。3)與對照組相比，試驗(yàn)組血清偽狂犬、豬瘟、藍(lán)耳抗體效價均有不同程度提高，其中試驗(yàn)3組血清偽狂犬和藍(lán)耳抗體效價顯著高于對照組(P<0.05)。由此可知，飼糧中添加適宜殼寡糖能一定程度提高斷奶仔豬能體液免疫與細(xì)胞免疫能力以及血清抗體效價，緩解斷奶應(yīng)激。

殼寡糖；斷奶仔豬；理化指標(biāo)；免疫力

抗生素作為飼料添加劑應(yīng)用已經(jīng)有幾十年的歷史，飼料中添加抗生素己成為提高養(yǎng)殖效益的“非常手段”。但隨著抗生素的使用越來越廣泛，問題也開始慢慢出現(xiàn)。濫用抗生素引發(fā)雙重感染，細(xì)菌耐藥性使得常見疾病的治愈越發(fā)困難；畜產(chǎn)品中抗生素殘留引起消費(fèi)者中毒或者過敏；殘留物排放污染水體和土壤，破壞生態(tài)平衡。

為減少抗生素的使用，抗生素替代類添加劑開發(fā)與篩選成為研究熱點(diǎn)。寡糖就是其中一類逐漸被人們重視的產(chǎn)品。研究證實(shí)，殼寡糖能減少畜禽腹瀉發(fā)生，并緩解其他與感染有關(guān)的現(xiàn)象，對動物生長性能、干物質(zhì)和氮表觀消化率有積極影響[1-2]。本試驗(yàn)擬通過探討殼寡糖對斷奶仔豬細(xì)胞免疫、體液免疫以及抗體效價的影響，以了解殼寡糖對斷奶仔豬理化指標(biāo)及免疫力的影響，并獲得殼寡糖在仔豬飼糧中的應(yīng)用方案。

1 材料及方法

1.1試驗(yàn)材料

殼寡糖：由秦皇島領(lǐng)先生物農(nóng)業(yè)股份有限公司提供，有效成分含量75%，深褐色，平均分子質(zhì)量≤2 500 u，脫乙?；取?0%。

1.2試驗(yàn)設(shè)計與動物

選擇品種相同、體重相近、21日齡斷奶、健康“杜長大”雜交斷奶仔豬256頭，按照遺傳背景相同、性別比例一致的原則隨機(jī)分為4個組，每組設(shè)4個重復(fù)，每個重復(fù)16頭仔豬，各組之間初始體重差異不顯著(P>0.05)。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加50、100和150 g/t殼寡糖的試驗(yàn)飼糧。預(yù)試期7 d，試驗(yàn)期28 d。

1.3試驗(yàn)飼糧

仔豬飼喂玉米-豆粕型飼糧，不含抗生素。飼糧參照NRC(2012)和我國《豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 65—2004)配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.4飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在河北漢唐牧業(yè)有限公司內(nèi)的同一棟封閉式豬舍內(nèi)進(jìn)行，試驗(yàn)仔豬采用分欄飼養(yǎng)，豬舍內(nèi)溫濕度適合；試驗(yàn)豬自由采食和飲水，常規(guī)的消毒免疫，試驗(yàn)由專人負(fù)責(zé)。參照本品種仔豬的飼養(yǎng)規(guī)程進(jìn)行管理。

1.5樣品采集與處理

試驗(yàn)結(jié)束前3天，每個組隨機(jī)取8頭豬，頸靜脈采血20 mL，其中10 mL加入肝素抗凝管中做抗凝處理，另10 mL于普通離心管中，低溫靜止30 min，3 000 r/min離心15 min，收集上清液即血清，-20 ℃保存待測。

1.6測定指標(biāo)及方法

血清抗體：采用豬的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒測定血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)的含量以及豬瘟、偽狂犬、藍(lán)耳抗體效價，所有指標(biāo)檢測嚴(yán)格按照試劑盒上的說明步驟進(jìn)行。

細(xì)胞免疫：采用ELISA試劑盒按照說明書步驟測定血清中白細(xì)胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量。

全血常規(guī)生理指標(biāo)：采用邁瑞醫(yī)療國際有限公司BC-2800Vet全自動血液分析儀測定白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、血小板數(shù)等。

血清生化指標(biāo)：采用荷蘭威圖Microlab300半自動生化分析儀，按照試劑盒(購自中生北控生物科技股份有限公司)說明書測定谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、堿性磷酸酶(APK)活性以及總蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、白蛋白(ALB)、肌酐(CREA)和甘油三酯(TG)含量。用天門冬氨酸底物法測定血清GOT活性，用丙氨酸底物法測定血清GPT活性，用NPP底物-AMP緩沖液法測定APK活性；用雙縮脲法測定血清TP含量，用溴甲酚綠法測定血清ALB含量。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 Premix provided the following per kg of the diet：VA 5 175 IU，VD31 150 IU，VE 11.5 IU，VK31.15 mg，VB10.575 mg，VB23.45 mg，VB60.23 mg，VB1214.5 μg，核黃素 riboflavin 3.45 mg，煙酸 nicotinic acid 11.5 mg，泛酸 pantothenic acid 5.75 mg，生物素 biotin 11.5 μg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 75 mg，Cu (as copper sulfate) 125 mg，Mn (as manganese sulfate) 20 mg，I (as potassium iodide) 0.5 mg，Se (as sodium selenite) 0.175 mg。

2)消化能為計算值，其余為實(shí)測值。DE was a calculated value, while the others were measured values.

1.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件的ANOVA模型進(jìn)行單因素方差分析，LSD法進(jìn)行多重比較，結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，以P<0.05作為差異顯著，以P<0.01作為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1飼糧中添加殼寡糖對斷奶仔豬免疫力的影響

由表2可知，與對照組相比，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組血清IgA含量分別提高了45.40%(P<0.05)、2.62%(P>0.05)和137.26%(P<0.01)；試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組血清IgG含量分別較對照組提高了4.47%和10.92%(P>0.05)，血清IgM含量分別比對照組提高了9.29%和5.69%(P>0.05)；與對照組相比，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組血清TNF-α含量分別提高了51.76%(P<0.01)、29.42%(P>0.05)和88.29%(P<0.01)；試驗(yàn)2組血清IL-6含量較對照組提高了14.28%(P>0.05)。

與對照組相比，各試驗(yàn)組血清偽狂犬抗體效價均有不同程度提高，其中試驗(yàn)3組提高了46.51%(P<0.05)；與對照組相比，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組豬瘟抗體效價均高于對照組，分別提高了5.40%、5.40%和18.92%(P>0.05)；試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組藍(lán)耳抗體效價與對照組相比分別提高了17.65%(P>0.05)、29.41%(P>0.05)和47.06%(P<0.05)。

表2 飼糧中添加殼寡糖對斷奶仔豬免疫力的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或相同小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same small letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean extremely significant difference (P<0.01). The same as below.

2.2飼糧中添加殼寡糖對斷奶仔豬血液指標(biāo)的影響

由表3可知，飼糧中添加殼寡糖對斷奶仔豬血液白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)、血小板數(shù)和血紅蛋白含量沒有顯著影響(P>0.05)，且試驗(yàn)組間無顯著差異(P>0.05)；與對照組相比，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組血液白細(xì)胞數(shù)分別降低了16.45%、16.71%和16.29%，但各組間差異不顯著(P>0.05)；與對照組相比，試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組血液紅細(xì)胞數(shù)提高了26.65%、1.74%，試驗(yàn)1組降低了8.04%；試驗(yàn)組血液血小板數(shù)均不同程度高于對照組，但差異不顯著(P>0.05)。

與對照組相比，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組血清GOT活性分別降低了26.71%(P<0.01)、7.56%(P>0.05)和16.64%(P<0.05)，血清GPT活性分別降低了47.26%(P<0.05)、47.28%(P<0.01)和21.88(P>0.05)，血清APK活性分別提高了6.37%、16.78%和1.24%(P>0.05)；試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組血清CREA含量分別提高了12.25%和26.41%(P>0.05)；試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組血清TG含量分別提高了25.84%和5.62%(P>0.05)；與對照組相比，各試驗(yàn)組血清TP、ALB以及GLB含量均不同程度提高，但均差異不顯著(P>0.05)。

表3 飼糧中添加殼寡糖對斷奶仔豬血液指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1飼糧中添加殼寡糖對斷奶仔豬免疫力的影響

免疫球蛋白是一類重要的免疫效應(yīng)分子，IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，也是體內(nèi)最主要的免疫球蛋白，它的含量反映生物體的免疫狀況；IgM是分子量最大的免疫球蛋白，在機(jī)體的初次免疫應(yīng)答中最早產(chǎn)生的免疫球蛋白；IL-6和TNF-α是被激活的巨噬細(xì)胞分泌的2種重要的細(xì)胞因子，IL-6可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖并參與T淋巴細(xì)胞、細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)、自然殺傷(NK)細(xì)胞和淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)的活化。IL-6和TNF-α在提高機(jī)體免疫力的同時，可促進(jìn)炎癥反應(yīng)，是具有抗炎和促炎雙重作用的細(xì)胞因子，血清中IL-6和白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)含量是應(yīng)激時炎癥反應(yīng)最具代表性的指示物[3]。

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，寡糖的添加可以調(diào)節(jié)血清中的免疫球蛋白含量[4-5]。Huang等[6]研究了殼寡糖對肉雞的影響，發(fā)現(xiàn)殼寡糖組肉雞血液中的免疫球蛋白數(shù)量顯著增加，殼寡糖對提高肉雞的免疫力有一定的作用。Tang等[7]報道，飼糧中添加250 mg/kg殼寡糖，可提高血液中白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)和IL-6以及IgA、IgM和IgG含量。殼寡糖對仔豬血清免疫球蛋白也有影響，飼糧中添加0.01%～0.05%的殼聚糖可提高血清免疫球蛋白含量，并與添加劑量有關(guān)系[8-9]，Yin等[10]亦有類似報道。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，仔豬飼糧中添加殼寡糖顯著提高了血清IgA和TNF-α含量，這與上述報道一致。而血清IgG、IgM以及IL-6的結(jié)果卻與報道并不一致，可能是因?yàn)轱曫B(yǎng)環(huán)境不同、試驗(yàn)所選擇動物種類不同以及殼寡糖的添加量不同而導(dǎo)致。

添加甘露聚糖酶可以提高機(jī)體的細(xì)胞免疫功能和體液免疫功能，當(dāng)仔豬進(jìn)行豬瘟、偽狂犬等免疫接種后，體內(nèi)B淋巴細(xì)胞通過對抗原的識別、活化、增殖，最后分化成漿細(xì)胞并分泌抗體，產(chǎn)生的抗體進(jìn)入血液。李學(xué)儉等[11]研究報道，甘露寡糖可以提高豬瘟抗體效價，這可能是由于寡糖可以競爭性吸附排除病原菌及特異性結(jié)合毒素，作為這些外源抗原的佐劑，減緩了抗原的吸收時間，從而增強(qiáng)了抗原的效價[12]。本試驗(yàn)中添加殼寡糖確實(shí)在不同程度上提高了斷奶仔豬偽狂犬、豬瘟、藍(lán)耳的抗體效價。

3.2飼糧中添加殼寡糖對斷奶仔豬全血生理指標(biāo)的影響

本試驗(yàn)中，各殼寡糖添加組的白細(xì)胞數(shù)與對照組相比有降低的趨勢，白細(xì)胞能直接參與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)和吞噬作用[13]。Lin等[14]在基礎(chǔ)飼糧中添加2 000 mg/kg殼寡糖，飼養(yǎng)錦鯉后研究發(fā)現(xiàn)，血清中的總白細(xì)胞數(shù)顯著增加。蘇鵬等[15]在紅鰭東方紅鱒飼糧中添加殼寡糖，結(jié)果顯示對紅鰭東方純血清中白細(xì)胞數(shù)量無顯著影響。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)飼糧中添加殼寡糖對斷奶仔豬中白細(xì)胞數(shù)有降低的趨勢，但差異不顯著。這與其他人的研究有一定的差異，具體原因還需進(jìn)一步的研究證明。

3.3飼糧中添加殼寡糖對斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

動物機(jī)體血清生化指標(biāo)與機(jī)體代謝、營養(yǎng)狀況和疾病有密切的關(guān)系，血清生化指標(biāo)可在一定程度上反映動物機(jī)體在生理和病理上的變化[16]?；羝杂畹萚17]試驗(yàn)中表明，飼料中添加殼寡糖后大菱鲆幼魚血液GOT和GPT活性沒有顯著變化，其中添加量為200 mg/kg殼寡糖組這2種酶活性明顯低于對照組。劉含亮等[18]在研究中發(fā)現(xiàn)殼寡糖降低了虹鱒血清GOT和GPT活性，但差異不顯著。GOT和GPT主要存在心肌細(xì)胞和肝細(xì)胞中，只有當(dāng)這些細(xì)胞受損時，才可使血清中這2種酶含量升高，試驗(yàn)證實(shí)，添加適量的殼寡糖對仔豬肝臟、心肌有一定的保護(hù)作用[19-20]。本試驗(yàn)中，GOT和GPT活性降低，與報道一致，說明殼寡糖對肝功能的調(diào)節(jié)有一定的作用。

血清TP含量也可以反映機(jī)體的營養(yǎng)和免疫狀況[21]，其含量升高是蛋白質(zhì)代謝旺盛的體現(xiàn)，有利于機(jī)體對蛋白質(zhì)的吸收和利用，從而降低飼料消耗[22]。孫立威等[23]研究表明，飼糧中添加適量的殼寡糖可以顯著降低吉富羅非魚幼魚血清中總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量。Tang等[7]研究了殼寡糖對豬仔的影響，發(fā)現(xiàn)飼糧中添加寡糖可以降低血清總膽固醇和TG含量，減少斷奶時血清中抗體水平的負(fù)面影響。Li等[24]研究了殼寡糖對鴨的影響，發(fā)現(xiàn)作為膳食補(bǔ)充劑，殼寡糖有降低肉雞血脂的作用，能降低肉雞血清TG和總膽固醇含量。而血脂保持在較低水平時有助于防治高血脂疾病的發(fā)生，在一定程度上提高了機(jī)體的免疫力。本試驗(yàn)中，不同添加量殼寡糖能夠提高血清TP含量，說明殼寡糖對斷奶仔豬的蛋白質(zhì)沉積和合成具有一定的促進(jìn)作用。且本試驗(yàn)前期試驗(yàn)表明，試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組與對照組相比，生長速度分別顯著提高了7.93%和14.02%，料重比顯著降低了11.02%和12.27%[25]，更加驗(yàn)證了一致性。

血清中的APK與脂肪糖類和蛋白質(zhì)的吸收與運(yùn)輸密切相關(guān)[22,26]。李振達(dá)等[27]研究發(fā)現(xiàn)，添加殼寡糖對三疣梭子蟹APK活性無顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，不同殼寡糖添加量對仔豬血清APK活性的影響不顯著，這與上述研究結(jié)果一致。

4 結(jié) 論

① 殼寡糖可以顯著降低斷奶仔豬血清GOT和GPT活性，提高血清TP含量。

② 殼寡糖可以提高斷奶仔豬體液免疫和細(xì)胞免疫能力。飼糧中添加50和150 g/t殼寡糖可以顯著提高斷奶仔豬血清IgA含量，顯著提高斷奶仔豬血清TNF-α含量。

③ 殼寡糖可以顯著提高仔豬血清抗體效價，改善機(jī)體健康水平。飼糧中添加150 g/t殼寡糖可以顯著提高斷奶仔豬血清偽狂犬抗體效價和藍(lán)耳抗體效價。

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*Corresponding author, professor, E-mail: chenbaojiang@vip.sina.com

EffectsofChitosanOligosaccharideonImmunityandRelativePhysiologicalandBiochemicalIndicesofWeanedPiglets

DANG Guoqi YANG Xinyu XU Qing CUI Jia CHEN Baojiang*

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,HebeiAgricultureUniversity,Baoding071001,China)

This study was conducted to investigate the effects of chitosan oligosaccharide (COS) on the immunity and relative physiological and biochemical indices of weaned piglets. A total of 256 Duroc×Landrace×Yorkshire piglets weaned at 21 days of age were randomly divided into 4 groups with 4 replicates each and 16 piglets per replicate. Piglets in the control group were fed a basal diet, and piglets in the experimental groups were fed the basal diets supplemented with 50, 100 and 150 g/t COS, respectively. The trial lasted for 28 days after 7 days pre-experiment. The results showed as follows: 1) compare with the control group, the glutamic oxalacetic transaminase activities of pigs in experimental groups 1, 2 and 3 were decreased by 26.71% (P<0.01), 7.56% (P>0.05) and 16.64% (P<0.05), the serum glutamic-pyruvic transaminase activities of pigs in experimental groups were decreased by 47.26% (P<0.05), 47.28% (P<0.01) and 21.88% (P>0.05), and serum alkaline phosphatase activities of pigs in experimental groups were increased by 6.37%, 16.78% and 1.24% (P>0.05), respectively. The serum total protein content of pigs in experimental groups was higher than that in the control group (P>0.05). 2) Compare with the control group, the serum immunoglobulin A content of pigs in experimental groups 1, 2 and 3 was increased by 45.40% (P<0.05), 2.62% (P>0.05) and 137.26% (P<0.01); the serum immunoglobulin G content of pigs in experimental groups 1 and 2 was increased by 4.47% and 10.92% (P>0.05), and the serum immunoglobulin M content of pigs in experimental groups 1 and 2 was increased by 9.29% and 5.69% (P>0.05). Compare with the control group, the serum tumor necrosis factor-α content of pigs in experimental groups 1, 2 and 3 was increased by 51.76% (P<0.01), 29.42% (P>0.05) and 88.29% (P<0.01), respectively. 3) Compare with the control group, the serum antibody titers of pseudorabies virus, classical swine fever and porcine reproductive and respiratory syndrome of pigs in experimental groups were increased in different degrees, and the serum antibody titers of pseudorabies virus and porcine reproductive and respiratory syndrome of pigs in experimental group 3 were significantly higher than those in the control group (P<0.05). In conclusion, dietary COS in optimum dose can increase the ability of humoral immunity and cellular immunity as well as the serum antibody titer of weaned piglets, thus alleviates the stress caused by weaning.[ChineseJournalofAnimalNutrition,2017,29(11)：3980-3986]

chitosan oligosaccharide; weaned piglets; physiological and biochemical indices; immunity

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.11.018

S816.7

A

1006-267X(2017)11-3980-07

2017-06-14

河北省科技廳項(xiàng)目——規(guī)?；i場仔豬腹瀉防治技術(shù)研究與示范(162266110)；企業(yè)橫向：殼寡糖在乳仔豬飼料中應(yīng)用研究

黨國旗(1990—)，男，陜西綏德人，碩士研究生，研究方向?yàn)閱挝竸游餇I養(yǎng)。E-mail： 472527027@qq.com

*通信作者：陳寶江，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail： chenbaojiang@vip.sina.com

(責(zé)任編輯 田艷明)