呂見(jiàn)濤 陳法榮 楊玉瀾 江海玲 李苗德 方朝柱 呂 濛

(1.新昌縣畜牧獸醫(yī)局，新昌，312500；2.新昌縣沃產(chǎn)生物制品有限公司，新昌，312500)

青(成)年梅花鹿口蹄疫疫苗免疫試驗(yàn)報(bào)告

呂見(jiàn)濤1陳法榮1楊玉瀾1江海玲1李苗德1方朝柱1呂 濛2

(1.新昌縣畜牧獸醫(yī)局，新昌，312500；2.新昌縣沃產(chǎn)生物制品有限公司，新昌，312500)

采用?？谔阋咭呙鐚?duì)梅花鹿進(jìn)行不同時(shí)段不同劑量免疫注射，定期進(jìn)行抗體檢測(cè)，以了解和掌握梅花鹿注射疫苗后鹿只免疫抗體的產(chǎn)生和消長(zhǎng)規(guī)律，進(jìn)而探明梅花鹿口蹄疫免疫的最佳程序和方法，確定梅花鹿口蹄疫的免疫計(jì)劃，為廣大梅花鹿飼養(yǎng)者進(jìn)一步做好梅花鹿口蹄疫疫病的防控工作、提高梅花鹿群體保護(hù)率提供依據(jù)和方法。

梅花鹿；口蹄疫疫苗；免疫程序

1 前言

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄類動(dòng)物(包括梅花鹿Cervusnippon)共患的急性、熱性、接觸性傳染病。目前我國(guó)梅花鹿口蹄疫免疫只是參照牛羊免疫方法進(jìn)行免疫，國(guó)內(nèi)公開(kāi)發(fā)表的文獻(xiàn)中未見(jiàn)有關(guān)梅花鹿口蹄免疫方案與免疫程序方面的研究報(bào)道，因此，參照牛羊免疫方法來(lái)對(duì)免疫梅花鹿，缺乏充分的科學(xué)依據(jù)，而且防治效果也不確切。為探索和掌握梅花鹿注射牛口蹄疫疫苗后，梅花鹿免疫抗體的產(chǎn)生和消長(zhǎng)規(guī)律，從而確定梅花鹿的免疫計(jì)劃程序，降低發(fā)病率，為梅花鹿人工飼養(yǎng)產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展提供保障。2005年，在寧波市北侖區(qū)科學(xué)技術(shù)局的支持下，設(shè)立了《梅花鹿口蹄疫免疫程序研究》課題項(xiàng)目。我們對(duì)梅花鹿的口蹄疫免疫效果開(kāi)展了試驗(yàn)研究。

2 材料與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

新昌縣鏡嶺鎮(zhèn)張伯華梅花鹿場(chǎng)提供體重50～100 kg/頭，1周歲以上成(青)年梅花鹿15頭。

2.2 麻醉、蘇醒藥物

陸眠靈(曾用名：鹿眠寧、特制眠乃寧注射液)，吉獸藥試字(2004)005009，規(guī)格為2 mL×10支/盒，2005年6月19日生產(chǎn)，保質(zhì)期3 a。

陸醒寧(曾用名：速醒靈、特制蘇醒靈4號(hào)注射液)，吉獸藥試字(2004)005010，規(guī)格為2 mL×10支/盒，2005年6月20日生產(chǎn)，保質(zhì)期3 a。

2.3 口蹄疫疫苗和測(cè)定診斷液

一免用疫苗：內(nèi)蒙古生物藥品廠生產(chǎn)的?？谔阋逜siaI-O型雙價(jià)滅活疫苗，批號(hào)20050516。二免用疫苗：乾元浩生物股份有限公司保山生物藥廠生產(chǎn)的?？谔阋逴型-亞洲1型雙價(jià)滅活疫苗(獸用)，生產(chǎn)批號(hào)20050925004。

檢測(cè)診斷液由中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸藥研究所提供，口蹄疫抗原批號(hào)為060531。

2.4 分組

選定新昌縣鏡嶺鎮(zhèn)張伯華梅花鹿場(chǎng)1周歲以上健康成(青)年梅花鹿15頭，隨機(jī)分為4個(gè)組。第1組梅花鹿4頭，用?？谔阋唠p價(jià)苗2 mL/頭，免疫1次后定期測(cè)定口蹄疫免疫抗體消長(zhǎng)規(guī)律；第2組梅花鹿4頭，用牛口蹄疫雙價(jià)苗2 mL/頭，相同劑量(間隔20 d)免疫2次后定期測(cè)定口蹄疫免疫抗體消長(zhǎng)規(guī)律；第3組梅花鹿4頭，?？谔阋唠p價(jià)苗不同劑量(首免2 mL/頭，間隔20 d二免3 mL/頭)免疫2次后定期測(cè)定口蹄疫免疫抗體消長(zhǎng)規(guī)律；第4組梅花鹿3頭，未經(jīng)?？谔阋唠p價(jià)苗免疫，也進(jìn)行抗體測(cè)定，用于對(duì)照。

2.5 具體實(shí)施免疫采血的方法

首先將試驗(yàn)梅花鹿用陸眠靈麻醉[1 ]，再實(shí)施免疫采血(或采血免疫)，然后再用陸醒寧將試驗(yàn)梅花鹿蘇醒，具體操作方法和要求詳見(jiàn)本文作者制訂的《梅花鹿口蹄疫免疫技術(shù)操作規(guī)范》。

2.6 試驗(yàn)鹿只口蹄疫免疫抗體檢測(cè)

采用正向間接血凝試驗(yàn)，操作方法按說(shuō)明書進(jìn)行，在血凝板上將待檢血清用稀釋液依次稀釋為1∶0、1∶2、1∶4……1∶1 024，同時(shí)設(shè)陰性血清和陽(yáng)性血清對(duì)照組，每孔各加25 μL正向間接血凝抗原，充分振蕩均勻。室溫靜止2 h后判斷結(jié)果。以50%紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集的最大稀釋倍數(shù)為該血清的效價(jià)。血清抗體血凝結(jié)達(dá)到≥1∶32(根據(jù)浙牧防發(fā)〔2006〕25號(hào)要求)(即log25)判為免疫合格(具有保護(hù)力)，否則判為免疫不合格。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組抗體水平測(cè)量結(jié)果

第1組經(jīng)牛口蹄疫雙價(jià)苗給鹿只1次免疫，首免日、首免后20 d、40 d、60 d、120 d、180 d采血測(cè)定抗體(圖1)，平均抗體水平分別為2.75、3.75、6.25、8、6.25、4.5。

第2組用?？谔阋唠p價(jià)苗相同劑量(間隔20 d)給鹿只2次免疫，首免日、二免日(首免后20 d)、二疫后20 d(首免后40 d)、首免后60 d、首免后120 d、首免后180 d采血測(cè)定抗體(圖1)，平均抗體水平分別為2.0、3.0、5.75、9.0、7.0、5.0。

第3組用?？谔阋唠p價(jià)苗不同劑量(間隔20 d)給鹿只2次免疫，首免日、二免日(首免后20 d)、二疫后20 d(首免后40 d)、首免后60 d、首免后120 d、首免后180 d采血測(cè)定抗體(圖1)，平均抗體水平分別為2.0、3.25、7.75、8.5、7.75、5.75。

第4組未經(jīng)?？谔阋唠p價(jià)苗免疫(用于對(duì)照)。在試驗(yàn)開(kāi)始日、20 d、40 d、60 d、120 d、180 d測(cè)定抗體(圖1)，平均抗體水平分別為2.0、2.0、2.67、2.67、2.33、2.67。

圖1 青(成)年梅花鹿口蹄疫疫苗免疫抗體水平變化曲線Fig.1 The change curve of immune antibody level of FMD vaccine on youth(adult)sika deer

3.2 各組抗體有效保護(hù)率結(jié)果

第1組有效保護(hù)率分別為0%、0%、100%、100%、100%、50%。第2組有效保護(hù)率分別為0%、0%、100%、100%、100%、100%。第3組有效保護(hù)率分別為0%、0%、100%、100%、100%、100%。第4組有效保護(hù)率全部為0%(表1)。

表1 青(成)年梅花鹿口蹄疫疫苗免疫抗體有效保護(hù)率(%)

Tab.1 The antibody effective rate of protection on young(adult) sika deer which were injected with FMD vaccine

4 討論

4.1 未經(jīng)?？谔阋唠p價(jià)苗免疫的鹿只，不具有效保護(hù)率。

4.2 ?？谔阋唠p價(jià)苗用于梅花鹿口蹄疫免疫是可行的，梅花鹿免疫后所產(chǎn)生的抗體有效保護(hù)率達(dá)到了該型號(hào)口蹄疫的預(yù)防要求。

4.3 用于試驗(yàn)接種的一免和二免疫苗均由浙江省統(tǒng)一采購(gòu)，雖廠家不同，但疫苗型號(hào)一致，得到的免疫效果說(shuō)明用不同廠家牛口蹄疫O型-亞洲1型雙價(jià)滅活疫苗試驗(yàn)同樣保證了抗體有效保護(hù)率。

4.4 間隔20 d實(shí)施2次免疫，比只有1次免疫的梅花鹿有效保護(hù)率要高，且保護(hù)期長(zhǎng)；相同劑量間隔20 d 2次免疫與不同劑量間隔20 d 2次免疫，其免疫有效保護(hù)率有一定差異，但不明顯。

4.5 梅花鹿?？谔阋唠p價(jià)苗1次免疫后20 d內(nèi)抗體水平較低(3個(gè)組平均抗體分別為3.25、3.0、3.25)，未能達(dá)到有效保護(hù)率。分析認(rèn)為：?？谔阋唠p價(jià)苗是油佐劑疫苗，對(duì)機(jī)體的免疫刺激緩而長(zhǎng)有關(guān)，有待進(jìn)一步查證。

4.6 根據(jù)口蹄疫免疫抗體的消長(zhǎng)規(guī)律和試驗(yàn)結(jié)果的綜合分析，推薦青(成)年梅花鹿的口蹄疫免疫計(jì)劃程序和方案為：首免后20 d實(shí)施二免，首免后190 d左右再次免疫，以后每年免疫2次，一免疫苗用量為2 mL/頭，二免疫苗用量為3 mL/頭。

[1 ] 鄭興濤.茸鹿飼養(yǎng)新技術(shù)[M].北京：金盾出版社，1998：182-188.

The Immunity Test Report of Foot-and-Mouth Disease Vaccine on Juvenile and Adult Sika Deer

Lv Jiantao1Chen Farong1Yang Yulan1Jiang Hailing1Li Miaode1Fang Chaozhu1Lv Meng2

(1.Xinchang Animal Husbandry and Veterinary Bureau，Xinchang，312500，China；2.Xinchang Wochan Biological Products Co.，Ltd.，Xinchang，312500，China)

Sika deer(Cervusnippon)were injected with different doses of bovine foot-and-mouth disease(FMD)vaccine in different periods.We checked the antibody regularly to understand the growth and decline of antibodies after injection.We identified the optimal schedule and methods for immunizations for FMD in sika deer.We designed a procedure to enhance immunity.Our results provide sika deer feeders with the scientific foundation and methods to promote prevention and control of FMD，and to increase the efficiency of sika deer population protection.

Sika deer；Foot-and-mouth disease vaccine(FMD)；Immunization procedure

稿件運(yùn)行過(guò)程

2016-11-21

修回日期：2016-12-08

發(fā)表日期：2017-08-10

S858.25

A

2310-1490(2017)03-491-03

寧波市北侖區(qū)科學(xué)技術(shù)局《梅花鹿口蹄疫免疫程序研究》課題項(xiàng)目(200502C1011017)

呂見(jiàn)濤，男，56歲，高級(jí)獸醫(yī)師；主要從事動(dòng)物疫病防控工作方面的研究。E-mail：j6022896@163.com