徐夢(mèng)琳，王小梅，鐘 金，董剛明，田媛媛

(四川省林業(yè)調(diào)查規(guī)劃院，四川 成都 610081)

一種蚜蟲玻片標(biāo)本制作方法

徐夢(mèng)琳，王小梅，鐘 金，董剛明，田媛媛

(四川省林業(yè)調(diào)查規(guī)劃院，四川 成都 610081)

本文介紹了蚜蟲玻片標(biāo)本的一種制作方法：采用水合三氯乙醛酚混合液、10%NaOH溶液及無水乙醇等試劑，對(duì)蚜蟲蟲體進(jìn)行結(jié)構(gòu)固定、雜質(zhì)排除、透明、脫水、整姿等操作處理，使制作的蚜蟲玻片標(biāo)本完整、美觀且成功率高，利于蚜蟲標(biāo)本的鑒定觀察及長(zhǎng)期保存。

蚜蟲；玻片標(biāo)本；制作

蚜蟲是一類吸食植物汁液的植食性昆蟲，不僅阻礙植物生長(zhǎng)、傳布病菌，還能造成花、葉、芽畸形，是農(nóng)林生產(chǎn)中的一大害蟲[1]，因此需要對(duì)其形態(tài)特征進(jìn)行觀察鑒定，以便有針對(duì)性的進(jìn)行防治。

由于蚜蟲體小而軟，肉眼很難對(duì)其進(jìn)行辨別，通常需要制成玻片標(biāo)本以展現(xiàn)蚜蟲的細(xì)微特征，這就對(duì)蚜蟲標(biāo)本的制作提出了嚴(yán)格要求。對(duì)于蚜蟲玻片標(biāo)本的制作，前人給我們提供了大量的經(jīng)驗(yàn)及方法，讓我們?cè)谥谱鞑Ｆ瑯?biāo)本過程中避免了走不必要的彎路，在實(shí)際操作過程中，我們結(jié)合自身的實(shí)踐，對(duì)其中的一些方法進(jìn)行了改進(jìn)完善，以期獲得更為理想的結(jié)果。

1 制作材料

1.1 試劑及器具

1.1.1 試劑

蒸餾水、無水乙醇、苯酚晶體、水合三氯乙醛、氫氧化鈉晶體、中性樹膠。

1.1.2 器具

燒杯、玻璃棒、玻璃管、采集管、鑷子、刀片、昆蟲針(1號(hào))、載玻片、蓋玻片、解剖鏡、吸水紙、吸管、烘箱。

1.2 試劑配制

1.2.1水合三氯乙醛酚混合液

配制該溶液所需試劑為苯酚及水合三氯乙醛，兩者的體積比為1∶1。配制時(shí)，將一定量的苯酚晶體放入燒杯中，60℃～80℃水浴加熱至苯酚溶解為液體，再向燒杯中徐徐加入等量的水合三氯乙醛，同時(shí)用玻棒輕輕攪拌，混合均勻即可[2]。

1.2.2 10%NaOH溶液

配制該溶液所需試劑為氫氧化鈉和蒸餾水，兩者體積比為1∶9。根據(jù)需要，稱取適量氫氧化鈉晶體放入燒杯中，再向燒杯中加入足量蒸餾水，并用玻璃棒攪拌到晶體溶解，放涼后備用。

1.2.3 75%酒精溶液

配制該溶液，所需試劑為無水乙醇和蒸餾水，兩者體積比為3∶1，配置時(shí)應(yīng)先在玻璃瓶中倒入適量無水乙醇，再根據(jù)配置比例向瓶中緩慢加入蒸餾水，并用玻璃棒攪拌，然后靜置備用。

2 標(biāo)本制作流程

2.1 標(biāo)本預(yù)處理

由于蚜蟲喜歡濕潤(rùn)的環(huán)境，一旦隨寄主植物采回實(shí)驗(yàn)室后，若不能保證其適宜的生存環(huán)境，蟲體就會(huì)迅速死亡并腐爛，因此在采集到蚜蟲標(biāo)本時(shí)需及時(shí)對(duì)其進(jìn)行處理，制成浸泡標(biāo)本，制作時(shí)用刀片將蚜蟲從寄主受害部位輕輕刮下，放于采集管內(nèi)，然后用75%的酒精對(duì)其進(jìn)行浸泡[3]，以保證蚜蟲肢體的完整性。

2.2 固定蟲體結(jié)構(gòu)

用尖鑷子將蚜蟲移入盛有75%乙醇的玻璃管內(nèi)，對(duì)于體型較小的蚜蟲標(biāo)本，可將采集管內(nèi)的浸泡液緩慢倒出，同時(shí)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)采集管，以使蚜蟲貼于管壁上，待管內(nèi)浸泡液倒完再注入新配置的75%酒精溶液，注入時(shí)可將管壁上的蚜蟲輕沖入管底，最后將混有蚜蟲體的酒精溶液移到玻璃管內(nèi)。塞上棉塞，將玻璃管放入70℃熱水中恒溫水浴10 min，此法使蚜蟲肢體伸展，組織和斑紋固定。由于75%的酒精沸點(diǎn)為約為78℃，若水浴溫度過高易造成酒精溶液沸騰，而蚜蟲在沸騰的酒精溶液中翻滾，極易使其肢體受到損壞，因此在水浴時(shí)因注意加熱溫度。

2.3 排除雜質(zhì)

待蚜蟲肢體固定后，用吸管將玻璃管內(nèi)的酒精溶液吸凈，再加入適量的10%NaOH溶液適量，隨后將玻璃管置于70℃水浴中加熱10 min[4]，此時(shí)蚜蟲體內(nèi)的雜質(zhì)會(huì)被排出并形成大量氣泡，該方法能使蚜蟲體內(nèi)的廢棄物自然排除，而避免用針刺蟲體擠壓出排泄物造成的蚜蟲肢體受損。

2.4 蟲體透明

待蚜蟲在堿液內(nèi)不再釋放氣泡時(shí)，取出玻璃管并用吸管將管中的堿液吸凈，然后加入適量的水合三氯乙醛透明液，再將其置于70℃水浴中加熱約10 min，此法使蚜蟲軀體淡化，以便于后期制成玻片標(biāo)本后更好地觀察蟲體氣孔、紋路等生理結(jié)構(gòu)。

對(duì)于一些淡色蚜蟲及體型較小的深色蚜蟲，用以上方法即可達(dá)到制作玻片標(biāo)本所需要的透明度，但對(duì)于類似于馬尾松大蚜、竹莖扁蚜等大型深色蚜蟲，一定時(shí)間內(nèi)增加在堿液及水合三氯乙醛芬溶液內(nèi)水浴時(shí)間，并不能使蟲體透明度增加，因此，為盡快讓蚜蟲標(biāo)本達(dá)到所需透明度，則需要再增加一步透明操作步驟，既將玻璃管中的水合三氯乙醛酚溶液倒出，并用裹成細(xì)條的吸水紙將殘余的液體吸凈，再滴入適量的10%NaOH，然后將玻璃管置于70℃水浴中加熱約10 min，使殘留在蚜蟲體內(nèi)的排泄物全部釋放出來。

2.5 脫水

待蚜蟲蟲體透明完成后，將玻璃管內(nèi)的浸泡液用吸管吸凈，再注入無水乙醇浸泡靜置5 min，等到需要做標(biāo)本時(shí)，將蚜蟲從酒精液體內(nèi)取出，放于吸水紙上，可使蚜蟲迅速脫水，該法避免了用針插蚜蟲被腹面對(duì)蟲體造成的破損，也降低了操作難度。

2.6 整姿

整姿是蚜蟲整體玻片標(biāo)本制作中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，整姿的好壞直接影響到觀察效果[2]。取載玻片一張，將脫完水的蚜蟲移到載玻片上，為便于整姿可在載玻片上滴一滴無水乙醇，使蟲體漂浮其中，在解剖鏡下用兩根1號(hào)昆蟲針輕輕撥動(dòng)，擺正姿勢(shì)，若酒精揮發(fā)較快應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充酒精，以免蟲體失水過度貼于玻片上，影響整姿效果；對(duì)于有翅蚜可采用同樣方法將蚜蟲移入載玻片上的酒精中，使蚜蟲呈漂浮狀態(tài)，然后用1號(hào)昆蟲針輕輕將其兩翅展開，最后再擺正其觸角及足的姿勢(shì)，此法避免了直接將蟲體置于樹膠上，造成整姿時(shí)膠體黏著使蟲體受損。

2.7 封片

待酒精揮發(fā)完后，蚜蟲肢體因脫水基本固定，并且粘于載玻片上時(shí)，用1號(hào)昆蟲針蘸取少量中性樹膠，將樹膠輕輕覆于蚜蟲四肢跗節(jié)處，使蚜蟲蟲體固定，此法避免滴入膠體太多造成的蟲體漂移，改變整姿效果；待覆蓋的樹膠干后，隨即可用滴管滴1至2滴中性樹膠于蚜蟲上，然后再將蓋玻片從一側(cè)輕輕放下，此法避免了酒精與中性樹膠混合時(shí)在蟲體周圍產(chǎn)生白色膠狀物，從而降低標(biāo)本的透明度。

2.8 烘干保存

將寫好的標(biāo)簽貼于載玻片上，再把玻片放到烘箱內(nèi)，調(diào)至45℃恒溫保存2 d～3 d，此法可將制作玻片標(biāo)本時(shí)造成的少量氣泡排除，使玻片內(nèi)的樹膠更為融和，增加玻片標(biāo)本的觀察效果，待玻片標(biāo)本烘干拿出后，即可成為永久性玻片標(biāo)本。

圖1 馬尾松大蚜玻片標(biāo)本

蚜蟲玻片標(biāo)本制作是一個(gè)即困難又重要的步驟，能夠清晰完整展現(xiàn)蚜蟲特征的標(biāo)本能夠?yàn)楹笃诘难芯刻峁┮罁?jù)。本文所述的方法步驟是在多次試驗(yàn)操作后總結(jié)得出的，具有耗時(shí)短，操作難度低，蟲體姿態(tài)保存完整等特點(diǎn)，在實(shí)際標(biāo)本制作過程中提高了工作效率和標(biāo)本質(zhì)量。四川省林業(yè)調(diào)查規(guī)劃院采用上述方法通過林業(yè)有害生物普查項(xiàng)目制作了大量蚜蟲玻片標(biāo)本，蟲體透明度較好，結(jié)構(gòu)及特征清晰完整，能較好地用于鑒定及保存。

圖2 板栗大蚜玻片標(biāo)本

[1] 羅益鎮(zhèn).蚜蟲玻片標(biāo)本簡(jiǎn)易制作法[J].應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào),1957(2):34～35.

[2] 李定旭.一種改進(jìn)的蚜蟲整體玻片標(biāo)本制作方法[J].豫西農(nóng)專學(xué)報(bào),1990(4):40～41,45.

[3] 劉增.蚜蟲整體玻片標(biāo)本制作方法[J].應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào),1987(6):39.

[4] 高占林,李耀發(fā),黨志紅,等.蚜蟲玻片標(biāo)本的制作方法與技巧[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,13 (3):159,168.

AMethodforMakingGlassSlideSpecimenPreparationofAphids

XU Meng-lin WANG Xiao-mei ZHONG Jin DONG Gang-ming TIAN Yuan-yuan

(Sichuan Forestry Investigation and Plan Institute,Chengdu 610081,Sichuan，China)

A method was described to make the glass slide specimen for aphids.Reagents included the mixed solution of saturated chloral hydrate and Phenol,10%NAOH,Ethanol and the others.The treatments of aphid included the structural fixation of aphid,exclusion of impurity,transparency of aphid,dehydration of aphids shaping of aphids which could make the production of aphid glass slide specimens complete and beautiful,being of high success rate and conducive to the identification and long-term preservation of aphid specimens.

Aphids，Glass slide specimens，Production

2017-07-04

徐夢(mèng)琳(1988-)，女，四川自貢人，助理工程師，碩士研究生，從事林業(yè)有害生物調(diào)查工作。

10.16779/j.cnki.1003-5508.2017.05.036

S763.3

A

1003-5508(2017)05-0148-03