譯校│楊文歡 付雯 張淼潔（中國動物疫病預(yù)防控制中心）

偽狂犬病及其根除：美國經(jīng)歷的回顧—病毒的特性和影響

譯校│楊文歡 付雯 張淼潔（中國動物疫病預(yù)防控制中心）

一、病毒

偽狂犬病毒（PRV），也稱奧耶斯基氏病的病原體，是一種雙鏈DNA包膜病毒，呈二十面體對稱。這種病毒被歸為皰疹病毒科皰疹病毒甲亞科。該亞科的特征包括：宿主范圍廣泛，有在感覺神經(jīng)元中潛伏性感染的能力，復(fù)制時間相對較短、可裂解培育中的細(xì)胞。這種病毒可以在各種細(xì)胞系中進(jìn)行繁殖，最常見的是在來源于腎臟的細(xì)胞系，比如來源于豬、猴和?？苿游锏呢i腎細(xì)胞、綠猴腎細(xì)胞和牛腎細(xì)胞。該病毒也可以在雞胚成纖維細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制。

在負(fù)染色中，病毒表現(xiàn)出從球形到輕微多形的形態(tài)，并且大小各不相同，直徑大約從120～200納米不等（見圖1）。該病毒的基因組大約有143千堿基對，呈線性排列，有一長（UL）一短（US）兩個獨(dú)特區(qū)域。核蛋白殼（NC）直徑大約從100～110納米，由162個衣殼粒組成，其中包括在衣殼頂端的12個五鄰體。除了一個五鄰體之外，所有的衣殼粒都由病毒蛋白、VP5蛋白和VP26蛋白構(gòu)成。而那單個的五鄰體則是由多分子的病毒蛋白UL6構(gòu)成，形成了一個中空的、圓柱形的結(jié)構(gòu)，在這之中，病毒基因組在復(fù)制期間可以進(jìn)行包裝。衣殼粒與由一個VP19c和兩個VP23構(gòu)成的三聯(lián)體結(jié)構(gòu)結(jié)合。在核蛋白殼的周圍是天然殼，由至少14種蛋白構(gòu)成，其中包括轉(zhuǎn)錄起始因子、VP16（αTIF）和一種能夠促進(jìn)病毒控制宿主細(xì)胞機(jī)制能力的VHS蛋白。病毒包膜是一層由修飾后的細(xì)胞膜轉(zhuǎn)化而來的脂雙層薄膜，至少含有15種蛋白，其中11種是糖基化的。這些蛋白（括號中是它們目前被接受的命名）是gII（gB）、gIII（gC）、gp50（gD）、gI（gE）、gX（gG）、gH、gp63（gl）、gK、gL、gM與gN，與影響人類的單純性皰疹病毒1的類似蛋白相對應(yīng)。在這些蛋白中，gB、gD、gH和gL對于病毒復(fù)制是必不可少的。其他糖蛋白（比如gE、gL、衣殼蛋白US9）和非結(jié)構(gòu)蛋白胸苷激酶（TK）則是非必要的，但它們的存在與毒性相關(guān)。gE、gl和US9蛋白需要用于在神經(jīng)系統(tǒng)中的移動。TK則需要用于在非有絲分裂細(xì)胞（比如神經(jīng)元）中的復(fù)制。這些信息為從基因方面設(shè)計(jì)一種新的疫苗株提供了機(jī)會——這種疫苗株不表達(dá)gE或其他一種或多種與毒性相關(guān)的非必要蛋白質(zhì)。不再表達(dá)gE的極好的抗原性提供了一種方法——引入標(biāo)記物來識別這種減毒毒株。事實(shí)證明，這一發(fā)現(xiàn)對于PRV根除項(xiàng)目而言是非常重要的。

PRV只有一個血清組。然而，疫苗和野生型病毒都可以通過物理和生物學(xué)標(biāo)記物的結(jié)合而進(jìn)行區(qū)分和分組（比如：易受熱滅活和胰蛋白酶滅活作用的影響，在肺泡巨噬細(xì)胞中的復(fù)制效率以及對于老鼠、兔子、雞和仔豬的毒性）。將這類標(biāo)記物用于流行病學(xué)、管理和法律目的是不實(shí)際的。通過基因組差異可以明確地區(qū)分野毒株和疫苗株。

PRV易被氫氧化鈉、漂白劑、含碘產(chǎn)品、酚類消毒劑、季銨化合物、甲醛和雙氯苯雙胍己烷葡糖酸鹽滅活。在使用消毒劑之前，應(yīng)徹底清潔受過污染的物體，否則這些消毒劑是不會見效的。同時，PRV也容易被熱滅活。

◎圖1 皰疹病毒的電子顯微照片

二、 復(fù)制

PRV主要是通過gC對于易感細(xì)胞附著，較少情況下是通過gB，這兩種蛋白都可以與細(xì)胞表面的硫酸類肝素蛋白多糖結(jié)合。隨后，gD會與表現(xiàn)為三種不同糖蛋白家族的幾種細(xì)胞受體結(jié)合。這三種糖蛋白在感染中所起的作用使它們成為宿主免疫反應(yīng)的首要目標(biāo)。之后，通過將病毒包膜與細(xì)胞質(zhì)膜融合，NC可以進(jìn)入細(xì)胞。這一活動是以gB、gH和gL為媒介的。NC沿著細(xì)胞微管網(wǎng)移動到細(xì)胞核，在細(xì)胞核中完成了病毒脫殼，病毒基因組得到表達(dá)。NC的裝配發(fā)生于細(xì)胞核中。隨著NC從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移至高爾基體，天然殼和病毒包膜被捕獲。包膜病毒體通過囊泡被轉(zhuǎn)移至細(xì)胞的表面并得到釋放。在感染后的大約8～10小時，可以檢測到具有傳染性的子代病毒粒子。感染了PRV的細(xì)胞通?？梢源婊钪炼?0小時，并可以產(chǎn)生102～103個具有傳染性的病毒粒子。

三、 宿主范圍

豬是PRV的自然宿主。在一定環(huán)境下，野豬也是可供選擇的合適宿主，野豬可以通過它們絕大部分的活動進(jìn)入傳播循環(huán)，但野豬并不會永遠(yuǎn)保持傳染性。20世紀(jì)70年代開始進(jìn)行對除了豬以外其他動物在流行病學(xué)中的作用的研究，并持續(xù)到20世紀(jì)80年代。所有易感的動物都被發(fā)現(xiàn)是異常宿主，不會獨(dú)立地保持傳染性。在有感染豬的農(nóng)場上，讓牛與它們直接接觸，或使牛在寒冷天氣中能夠接近豬圈的排氣扇，前一種情況下偶爾會出現(xiàn)感染瘋癢病的牛病例，后一種情況下則是感染腦炎疾病，所有發(fā)病動物均迅速死亡。綿羊極易通過口腔或呼吸道感染PRV。與受感染的、散毒活躍期的豬接觸的綿羊就像是疏忽的哨兵，表現(xiàn)出快速的致命感染。貓極易受感染，狗、浣熊和臭鼬比較容易感染，而大鼠和小鼠對感染則有一定的抵抗力（見圖2）。

這些動物被病毒感染有可能是通過接觸感染PRV的豬尸體，吸入霧化的病毒或是攝取被污染的飼料或水。疾病潛伏期通常少于3天。臨床病例表現(xiàn)出腦炎的癥狀，而狗則會出現(xiàn)瘙癢癥狀。在出現(xiàn)臨床癥狀后2～3天內(nèi)就會死亡。

◎圖2 浣熊死于一個農(nóng)場附近，這個農(nóng)場上的豬正處于PRV感染期

狗也許會將病豬尸體從一個生產(chǎn)區(qū)拖到另一個生產(chǎn)區(qū)，易受感染的豬也許會食用病死動物的尸體，嚙齒動物也許會不知不覺地被磨碎到豬飼料中或隨著感染農(nóng)場的草墊而轉(zhuǎn)移。關(guān)于在有感染豬的地區(qū)所捕獲的野生動物的調(diào)查顯示，并沒有證據(jù)證明PRV在浣熊、臭鼬或負(fù)鼠中可以保持傳染性。鳥和昆蟲并沒有進(jìn)入傳染圈，盡管實(shí)驗(yàn)中，在環(huán)境溫度下將PRV經(jīng)過飼喂給家蠅，能夠使病毒在其消化道中保持3個小時的半衰期，但被病毒污染的蒼蠅只是偶爾會在實(shí)驗(yàn)中通過角膜接觸將PRV傳給豬。

四、 傳播

豬之間的直接接觸傳播是PRV最有效的傳播方式。交配傳播和短距離或長距離的空氣傳播也時有發(fā)生。通過攝取受污染的物質(zhì)（包括水，來自病豬的母乳和其他受污染的飼料以及受污染的尸體），PRV也可以通過口腔途徑傳播。

PRV對外界環(huán)境具有較強(qiáng)的抵抗力。PRV在陰冷、潮濕、pH為7.0±1.0的環(huán)境中最為穩(wěn)定。在干燥環(huán)境中或暴露于紫外線時，PRV很快就失去了傳染性。例如，在14～37°C的溫度下，在相對濕度為30%～40%時，當(dāng)病毒懸液置于玻璃片上干燥時，病毒在2個小時內(nèi)就會失去傳染性。與之相反，在豬的唾液和鼻腔液中，PRV可以保持幾天的傳染性。相似地，PRV在霧化之后可以保持幾個小時的傳染性。在相對濕度為55%，溫度分別為22°C和4°C時，傳染性的半衰期為36～44分鐘。在這樣的條件下，在將含有106個空斑的1毫升PRV懸液霧化后，具有傳染性的病毒仍然可以存活24小時。在豬的糞便混合物中，PRV也能保持傳染性，這是一個重要的污染源。在未稀釋的糞便混合物中，在15°C，pH為6.5時，傳染性可以維持至少3天，而在為了貯藏而摻水稀釋后，在4～15°C，pH為6.8時，傳染性可以維持至少23天。在井水中，病毒也可以存活7天，而在受污染的咸水湖水中可以存活2天。

PRV在畜群間和群內(nèi)動物間的傳播，除了通過直接接觸外，主要是通過空氣、水和污染物傳播。PRV的空氣傳播主要是在生產(chǎn)建筑和運(yùn)輸工具之間的短距離傳播。隨著大氣活動，病毒可以移動數(shù)英里。盡管光照和干燥或病毒懸液的分散會使PRV迅速滅活，然而飛沫也許能在一定時間和距離上傳播病毒顆粒。在pH低于4.3或高于9.7時，或者溫度在冰點(diǎn)上下波動時，病毒是極不穩(wěn)定的。實(shí)驗(yàn)中，在環(huán)境溫度下，豬唾液中的PRV在牛仔布、苜蓿干草上和礦井污水中的存活時間少于1天；在橡膠、青草、肉骨粉、木糠、加氯水以及無氧的咸水湖水中，存活的時間為2天；在塑料、鋼鐵、水泥、玉米粒、顆粒狀的豬飼料、稻草墊和井水中存活3～7天。

PRV潛伏期一般為2～5天，病毒主要分布于鼻腔和口腔分泌物中，而在成年豬中，則分布于陰道、包皮和乳汁分泌物中，這些器官的病毒與主要癥狀同時出現(xiàn)，或早于主要癥狀。終生的潛伏性感染一般都在臨床康復(fù)或隱性感染之后，病毒會存在于三叉神經(jīng)節(jié)和扁桃體中。潛伏感染豬在暫時壓制之后，會在患病、產(chǎn)小豬、擁擠、與不熟悉的動物混合或運(yùn)輸?shù)膲毫χ略俅伪┌l(fā)。初次感染時脫落的病毒可存活1～3周，而再次復(fù)發(fā)時，可以存活3～4天。長期或復(fù)發(fā)時的脫落物是病毒傳播到先前未感染的畜群或部分畜群的一個常見來源（見五、潛伏）。

通常，PRV是通過鼻黏膜進(jìn)入易感豬的（當(dāng)它們吸入病毒的時候），或是通過扁桃體或口腔/消化道黏膜進(jìn)入（當(dāng)它們攝入病毒的時候）。在繁殖過程中，受到病毒污染的精液也許會感染母豬。懷孕早期病毒并不會傳播給胚胎；但在懷孕后期，胎兒有可能在子宮中受到感染。

與未接種疫苗的豬相比，當(dāng)暴露于病毒時，接種過的豬可以抵御更高劑量的病毒。接種過的豬可以避免發(fā)生臨床癥狀。如果受到感染，與未接種的豬相比，接種過的豬不會通過胎盤傳播病毒，并且它們排出更少的病毒，整個排毒周期也更短。但是，當(dāng)接種過疫苗的豬被感染時，仍然會有潛伏性感染，也可能會再次復(fù)發(fā)并排毒。

疫苗接種影響了PRV的流行病學(xué)特征。在空氣中和受感染場點(diǎn)的污染物中，病毒水平降低了。畜群內(nèi)和畜群間的傳播也減少了，在受感染的畜群中，畜群的總損失也大大地減少了。但同時，無法再通過臨床癥狀來識別受感染的畜群或個體動物，而通過血清學(xué)發(fā)現(xiàn)病例也變得沒有把握。

五、 潛伏

PRV根除項(xiàng)目能否成功的幾個關(guān)鍵因素之一就是了解PRV在感染豬中潛伏的能力，即病毒有再活化和傳播的可能性。非常清楚的一點(diǎn)是，如果在臨床恢復(fù)的豬中普遍存在潛伏性感染，且這類豬最終并不容易被分辨是否曾經(jīng)感染過（比如抗體的診斷水平），這個問題就會變得特別棘手。為了避免這個問題，項(xiàng)目成功地將潛伏感染的影響最小化，也就是將任何已知的或疑似暴露于PRV的豬看成是潛伏性感染的攜帶者。通過采用這一謹(jǐn)慎的方法，項(xiàng)目得以順利開展。然而，潛伏的問題不能被忽視，人們對于潛伏的實(shí)踐啟示繼續(xù)保持活躍的研究。

多個研究嘗試模仿病毒潛伏和再活化，但結(jié)果并非總是與自然情況一致。例如，豬總是被暴露于高劑量的病毒中，以使其感染或有病毒潛伏；或是之后以極高劑量的皮質(zhì)類固醇處理，以使病毒再活化。通常，這兩種情形都很常見。而且，基于從有問題的豬身上收集鼻腔或扁桃體標(biāo)本中檢測到PRV，人們經(jīng)常假設(shè)再活化病毒傳播的可能性—并非通過直接接觸傳播來證實(shí)。

其他研究表明，潛伏是在豬感染了PRV強(qiáng)野毒株之后一種常見的（如果說不是確定的話）的結(jié)果。在接觸了無毒性的或低毒性的病毒株之后（比如那些包含了修飾過的活性病毒疫苗的毒株），潛伏的頻率就不太清楚了。在這樣的情況下，再活化達(dá)到一個可以通過體外病毒分離或?qū)σ赘胸i的傳播而檢測到的水平是不常發(fā)生的。此外，在接觸過有毒力強(qiáng)的野毒株之后，主動或被動獲得的已經(jīng)在豬體內(nèi)循環(huán)存在的PRV抗體的水平，都并不一定能夠阻止?jié)摲陌l(fā)生。實(shí)際上，至少在一個經(jīng)免疫豬的攻毒試驗(yàn)研究中，在通過皮質(zhì)類固醇處理而再活化之后，疫苗株和野毒株后來都被分離出來了。

從對再活化的應(yīng)激源的處理（通常是高劑量的皮質(zhì)類固醇）到從鼻腔標(biāo)本中分離出再活化的PRV，這段時間是1～11天甚至更長。在控制實(shí)驗(yàn)的情況下，影響時間長短的因素并不明確，但也許是來源于宿主的差異，比如說年齡、品種和健康狀況，以及其他的變量，比如病毒毒力，被用于實(shí)現(xiàn)感染和潛伏的病毒劑量，被用于引發(fā)再活化的物質(zhì)的劑量，以及嚴(yán)重感染與嘗試的再活化之間可以忽略的時間長度。順便提一下，實(shí)驗(yàn)上在更短的時間內(nèi)檢測到病毒也許提供了一種解釋—為什么在狩獵期，狗在接觸追趕野豬的幾天之后會致命地感染上PRV。

在一個實(shí)驗(yàn)中，豬被接種了減毒的PRV疫苗，之后被暴露于毒性的PRV中（攻毒），并且之后通過地塞米松或是再次接觸大劑量的毒性PRV進(jìn)行處理。這個實(shí)驗(yàn)有助于簡明地闡明豬身上PRV潛伏與再活化的許多特點(diǎn)。在病毒脫落的基礎(chǔ)上，之前接種過疫苗的豬和被攻毒的豬，對之后一次跟毒性病毒的外源性接觸有了抵抗力。相比起來，那些最初以同樣方式（即：接種和攻毒）處理過的豬—但沒有被二次暴露于毒性PRV中，而是用地塞米松進(jìn)行處理，在更長的時間里脫落了更多的病毒。一種可能的解釋是壓力（正如在實(shí)驗(yàn)中通過地塞米松處理而模仿的壓力）并非僅僅導(dǎo)致了PRV的再活化，同時也給豬的免疫系統(tǒng)對這種病毒的控制能力帶來了不利的影響。同時也要注意到，在再活化之后，從鼻腔（鼻黏膜）中分離出了高濃度的病毒——而鼻腔是豬最容易暴露于空氣傳播和區(qū)域傳播的部位。

六、 免疫

在美國PRV根除項(xiàng)目正式開始的很久之前，已經(jīng)確定免疫—不管是主動獲得（通過接種或自然感染）還是被動獲得（通過攝取初乳中的抗體）—可以保護(hù)豬不受感染或者可以減輕臨床癥狀的嚴(yán)重程度。此外，體內(nèi)存在的抗體，可能與細(xì)胞免疫有關(guān)，被認(rèn)為是在暴露或再次暴露于病毒時明顯地減少了病毒復(fù)制的數(shù)量和持續(xù)時間。

許多研究表明，對小豬成功接種大概可以提供至少幾個月的臨床保護(hù)，并且通?？梢员Ｗo(hù)到豬只銷售的月齡。給加入生產(chǎn)種豬的豬進(jìn)行額外接種，有利于保持甚至是提升其免疫力。由被動（從初乳中）獲得的免疫所提供的臨床保護(hù)的程度和持續(xù)時間是更加多變的，并與新生的小豬所攝取和吸收的抗體數(shù)量有關(guān)。而攝取抗體的數(shù)量，主要是由產(chǎn)小豬時母豬所貯存的抗體水平?jīng)Q定的。

被動獲得的抗體的積極方面是：這種抗體為小豬提供了早期的保護(hù)，否則這些小豬極易受到感染。作為根除項(xiàng)目的附屬物，這種早期的保護(hù)，雖然短暫，但也在小豬相對能夠抵御感染，不太可能成為病毒攜帶者的時候，為將這些小豬轉(zhuǎn)移到無病毒環(huán)境（通常被稱為后代隔離）提供了機(jī)會。而消極的方面是被動獲得的抗體會干擾疫苗的效力。因此，為了保證對小豬的成功接種，確定被動獲得的抗體何時消失（通常是通過血清測試）是十分重要的。

不幸的是，不管是通過疫苗主動獲得的免疫，還是被動獲得的免疫，都不能保證在接觸野毒之后不會發(fā)生病毒復(fù)制。持續(xù)的病毒復(fù)制會使豬獲得潛伏性感染，可能會在之后出現(xiàn)病毒再活化和脫落（見五、潛伏）。疫苗免疫也會使對潛在感染的攜帶者的鑒別診斷更為復(fù)雜。識別之前與PRV接觸的最有效、最可靠的方法，即檢測有問題的豬的血清抗體，可以驗(yàn)證豬是接種過疫苗或是從野毒感染中復(fù)原了，還是兩者皆有之。在后面的兩個例子中，血清反應(yīng)陽性的豬是PRV潛在的攜帶者和脫落者。因此，需要采用的是一種不管是否有接種史，都能夠識別過去被野毒感染的檢測方法。

20世紀(jì)80年代后期，荷蘭萊利斯塔德動物科學(xué)與健康學(xué)會的J·T·范·奧斯楚特（J. T. Van Oirschot）與其同事進(jìn)行了精確觀察。在此基礎(chǔ)上，發(fā)明了上述的檢測方法，并在項(xiàng)目期間得到使用。他們注意到，來自PRV減毒疫苗株的一種蛋白凝膠丟失了一段（蛋白），而這種蛋白存在于來自PRV毒株的凝膠中。范·奧斯楚特的團(tuán)隊(duì)很快意識到他們觀察的實(shí)際意義。如果：

（1）所有的毒株都編碼這種蛋白（即gE）；

（2）所有感染了PRV野毒的豬都對gE有免疫反應(yīng)（體液中的抗體）；

（3）在豬接觸過PRV野毒很久之后，針對gE的抗體仍舊存在它們的血清中；

（4）可以發(fā)明一種合算的、可靠的檢測方式，用于具體識別針對gE的血清抗體，能夠標(biāo)記出野毒株的感染。只有當(dāng)那些用于誘導(dǎo)免疫的疫苗被限制在不含gE的疫苗之時，這種標(biāo)記物的存在才有價值。

在范·奧斯楚特等人發(fā)現(xiàn)PRV自然“缺失突變”株（最初從豬上分離之后，通過在體外反復(fù)的傳代而在基因上明顯有所改變的毒株）報(bào)道后，在商業(yè)實(shí)驗(yàn)室和公共研究實(shí)驗(yàn)室中開展了一系列研究，鑒別或通過基因工程創(chuàng)造其他的缺失突變株、弱毒株并在同時開發(fā)與之對應(yīng)的鑒別診斷方法。盡管標(biāo)記性疫苗的概念看似很簡單，只缺失非必需的病毒蛋白，即在病毒復(fù)制中并沒有必要作用的蛋白，是可以用于缺失的。此外，所選擇的一種（或幾種）蛋白必須是高度抗原性的，以促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生可以測量到的、持久的抗體，這個要求為開發(fā)這類標(biāo)記性疫苗帶來了挑戰(zhàn)。

盡管有許多限制，有幾個研究組還是成功了。然而，隨著這種成功而來的是一個問題：哪一種類型的缺失突變疫苗和對應(yīng)的鑒別診斷檢測是最可靠的，可用于根除項(xiàng)目。缺失了gE、gC或gG（都是非必要蛋白）中的全部或部分蛋白的疫苗成了首要的候選者。但很明顯，除非對每一頭接種過的豬使用的疫苗類型都是已知的，否則檢測會變得復(fù)雜，且結(jié)果也可能會有誤導(dǎo)性。

最終，牲畜保護(hù)學(xué)會委員會與技術(shù)咨詢組一起做出了選擇。研究人員檢測了來自野豬的血清，這是已經(jīng)很少或幾乎沒有接種過的或以其他方式接觸過疫苗病毒的豬。最初是通過一種高敏感性的乳膠凝集試驗(yàn)檢測血清，這種試驗(yàn)可以針對供體豬是否自然接觸過PRV野毒給出一個血清學(xué)的答案。同一個血清的等分試樣接下來則通過針對gE、gC或gG的酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）進(jìn)行檢測。盡管乳膠凝集試驗(yàn)結(jié)果和ELISA的結(jié)果并不是完美地匹配，但在乳膠凝集試驗(yàn)的結(jié)果與關(guān)于gE和gC的ELISA試驗(yàn)結(jié)果之間有一種非常緊密的關(guān)聯(lián)。之后不久，這兩個委員會的成員決定了這個項(xiàng)目中所使用的所有減毒疫苗都應(yīng)符合gE ELISA檢測。

七、 流行病學(xué)

專家通過實(shí)例描述了PRV最初進(jìn)入易感群體時動物的臨床表現(xiàn)。

第一種流行在臨床上表現(xiàn)為毀滅性的疾病，成了典型的PRV。這種流行狀況在三個互相關(guān)聯(lián)的、地理位置明確的區(qū)域傳播了16個月。極為有力的流行病學(xué)證據(jù)表明，病毒是通過攜帶病毒的豬進(jìn)入各個地區(qū)的。在第一個地區(qū)，在一群明顯易感的混合架子豬中傳播，開始的時候有22%的發(fā)病率。當(dāng)這種傳染病蔓延到另一個由同一個主人所經(jīng)營的豬場時，發(fā)病率超過了93%。顯然，病毒是通過第一個地區(qū)受感染的農(nóng)場中帶來的母豬而引入到第二個地區(qū)的。之后，病毒又在無意中經(jīng)攜帶病毒的公豬引入到了第三個地區(qū)。來自愛荷華州立大學(xué)的研究人員追蹤了這個地區(qū)PRV傳播的流行病學(xué)特征。除了在同一個主人的養(yǎng)豬場之間的豬的流動，在該病所涉及的農(nóng)場間并沒有豬的流動。在第一個地區(qū)飼養(yǎng)了豬的75個農(nóng)場中，只有11個農(nóng)場記錄有疾病的暴發(fā)。此外，可以確定有一個農(nóng)場的豬感染了PRV，但在臨床上并沒有被發(fā)現(xiàn)。證據(jù)表明，在混合了血清呈陰性的種畜和血清呈陽性的康復(fù)母豬與公豬的地方，只有在運(yùn)輸、產(chǎn)小豬或哺乳的非常時期，才在易感家畜中出現(xiàn)臨床病例。同一批愛荷華州立大學(xué)的研究人員跟蹤了在發(fā)病農(nóng)場的疾病流行中狗、貓和野生動物所起的作用。狗普遍地被診斷為受感染。在12個養(yǎng)了豬的農(nóng)場中，有11個農(nóng)場，還有一個非農(nóng)場的住宅中都有狗。報(bào)告說，感染了PRV的狗出現(xiàn)在5個有病豬的農(nóng)場中，在1個沒有病豬的農(nóng)場上，以及一個非農(nóng)場的住宅中。在這7個例子中，所涉及的狗都接觸或食用過死豬的尸體或是感染母豬的胎盤。所有狗的病例都與豬的病例同時發(fā)生，并且全部都是致命的。沒有證據(jù)表明，狗可能將這種病毒傳給了豬或者其他狗。所有涉及的農(nóng)場中都有貓，研究人員懷疑有6個農(nóng)場的貓死于該病。三具交給實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查的尸體中有兩具確定感染了PRV。在這些農(nóng)場中，在豬出現(xiàn)PRV之前的1～3周，在貓中出現(xiàn)了一個確診病例和一個疑似病例。農(nóng)場經(jīng)營者報(bào)告在出現(xiàn)病豬的同時，發(fā)現(xiàn)7只臭鼬疑似病例死于豬場中或豬場附近；在出現(xiàn)病豬的期間，發(fā)現(xiàn)6只浣熊疑似病例在豬群中或豬群附近染病或死去，另外有一個病例發(fā)生在豬出現(xiàn)PRV的一個星期之前。交給實(shí)驗(yàn)室診斷的那具浣熊尸體呈PRV陽性。一旦在農(nóng)場上出現(xiàn)了豬的臨床病例，5天到4周之內(nèi)就在豬群中蔓延開來。血清學(xué)研究表明，豬群中100%的豬只都受到了感染。

第二種流行影響了三個農(nóng)場，臨床癥狀不明顯。流行病學(xué)證據(jù)表明，這種病毒是通過1976年8月和9月初的展會被引入的。在1976年10月，發(fā)現(xiàn)了一頭血清呈陽性的公豬，這頭公豬被賣給了沒有被PRV感染地區(qū)的農(nóng)場。在所研究的三個農(nóng)場，由愛荷華州的研究人員通過血清學(xué)進(jìn)行監(jiān)控。感染是在所研究的三個農(nóng)場中的病毒性感染呈現(xiàn)出獨(dú)特而相似的特征：通過這種毒株引起的感染完全是亞臨床的，涉及的豬最初血清呈陰性，盡管這三個農(nóng)場有各種年齡的豬以及處于妊娠、生產(chǎn)和哺乳等不同階段的豬，但也并沒有發(fā)現(xiàn)臨床或病理學(xué)特征；毒株在畜群間的傳播相對較慢；康復(fù)動物的血清病毒中和滴度相對較低，平均為1∶12；血清滴度下降相對較快，有一些下降到能檢測到的水平以下。在2月和3月檢測的118只動物中，68只動物的滴度保持穩(wěn)定，23只動物的滴度下降，其中有20只動物的血清從陽性變?yōu)殛幮?；沒有證據(jù)證明在三個農(nóng)場上疾病的傳播涉及豬以外的動物；最后，一個農(nóng)場將斷奶后血清呈陰性的豬轉(zhuǎn)移到一個隔離的豬場中，而在原來的農(nóng)場中，血清呈陽性的豬在6～8周齡的時候失去了它們從母體獲得的抗體。轉(zhuǎn)移到隔離豬場的斷奶仔豬總共有194只，在4月齡的時候血清仍然呈陰性。其中10只仔豬被帶到實(shí)驗(yàn)室的隔離場所，并用物理和藥物刺激了5天；在2周的監(jiān)控中，血清和病毒檢測結(jié)果始終保持為陰性。

關(guān)于個別農(nóng)場暴發(fā)疾病的流行病學(xué)研究仍在繼續(xù)。研究人員分析了動物宿主、引起傳染病的皰疹病毒的變異以及其他關(guān)于PRV流行病學(xué)的信息，并報(bào)告：病毒在分散的戶外畜群中傳播緩慢，畜群與環(huán)境中的弱毒株病接觸的劑量較低，畜群染病的癥狀并不明顯。在封閉環(huán)境下大規(guī)模、集中的豬群中，受感染的豬排泄出大量的病毒，這些病毒在圈養(yǎng)場所中以氣流模式迅速流動，病毒選擇壓力轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂懈旄腥灸芰?、更快排放出的病毒。停止使用含PRV抗體的豬瘟抗血清，不再為小豬提供被動保護(hù)。由于無臨床癥狀的感染豬的流動（在壓力下會散播病毒），出現(xiàn)了病毒株的快速傳播。這些豬被認(rèn)為是新的病毒來源。

◎圖3 死于PRV的年幼的仔豬

八、 臨床癥狀

畜群中PRV最初的臨床表現(xiàn)：頻繁有不到3周齡的、毛發(fā)粗糙、精神萎靡的新生小豬停止喝奶，出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，在24～36小時內(nèi)死亡，幼崽死亡率達(dá)到90%或以上（見圖3）。

在其他畜群中，PRV臨床癥狀首先出現(xiàn)在種畜中，懷孕母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎或弱仔，這些仔豬經(jīng)常在一天或兩天內(nèi)死亡。伴隨繁殖障礙而來的是呼吸系統(tǒng)疾病、精神萎靡，在3天或更久的日子里缺乏食欲，這些是僅僅能觀察到的臨床癥狀。在開放的種畜中，觀察者注意到妊娠失敗的現(xiàn)象，或在妊娠早期出現(xiàn)胚胎吸收和返情。在農(nóng)場暴發(fā)疾病的過程中，斷奶仔豬經(jīng)常出現(xiàn)以下臨床病癥：精神萎靡、厭食、鼻炎、呼吸困難以及劇烈咳嗽，在1周內(nèi)可以完全康復(fù)。出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的豬通常會有其他后遺癥。在育肥豬中，觀察者經(jīng)常能夠發(fā)現(xiàn)沮喪、厭食、輕微到嚴(yán)重的呼吸疾病，體重下降，但可以快速康復(fù)。在有臨床癥狀不明顯的胸膜肺炎或多殺巴斯德菌的大齡豬或種畜中，PRV的感染偶爾會導(dǎo)致臨床胸膜肺炎或巴斯德菌病惡化。

九、 病理學(xué)

最初，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)和診斷專家注意到，在感染了PRV的豬身上，很少可以發(fā)現(xiàn)眼觀病變。然而，他們很快發(fā)現(xiàn)一些仔豬有明顯的可見病變，因此認(rèn)識到對死亡仔豬進(jìn)行尸檢可以幫助診斷。

在一些仔豬中明顯的可見病變可能包括以下病變中的一種或全部：根據(jù)纖維素性滲出物或腐蝕性的纖維素性壞死性的病變，可以觀察到扁桃體炎。在肝臟或脾臟中，有小的（＜1 毫米）白點(diǎn)。這些小病變通常有稍微不規(guī)則的或不明確的邊緣，并沒有明確的、界限分明的外觀。在肺胸膜上分布著紅點(diǎn)。微觀病變包括：擴(kuò)散的非化膿性腦炎，通常表現(xiàn)為血管袖套現(xiàn)象和神經(jīng)變性。大腦內(nèi)一般有稀疏的包涵體。經(jīng)常會有神經(jīng)節(jié)神經(jīng)炎，這促使診斷專家采集腦神經(jīng)節(jié)用于組織病理學(xué)和病毒鑒定。細(xì)致的觀察者發(fā)現(xiàn)，在肝臟和脾臟中也有小的壞死灶和一些退化的細(xì)胞。伴隨這些現(xiàn)象出現(xiàn)的還有—在含有一些不同清晰度的核內(nèi)包涵體的邊緣有一些細(xì)胞。一些病理學(xué)家似乎將這一問題看得比其他人簡單得多。在扁桃體中觀察到了更多一般性的壞死病灶。

在觀察可見病變和微觀病變之外，關(guān)于PRV的最終確診取決于病毒檢測。最早的診斷方法之一是將從感染仔豬中獲取的少量組織提取物，皮下注射到兔子背中線附近。這一方法是非常敏感的，僅允許少量的病毒顆粒通過，引起了強(qiáng)烈的瘙癢，使兔子去搔抓這塊區(qū)域。兔子很快會被實(shí)施安樂死。很快就研制出了敏感的組織培養(yǎng)系統(tǒng)用于PRV分離，以及其他更快的技術(shù)（例如：熒光抗體染色），用以加快診斷過程，并調(diào)節(jié)所需要的樣品數(shù)量。