石姍姍，陳星，周鵬，欒萌

(1山東大學(xué)齊魯醫(yī)院，濟(jì)南250012；2山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所)

山東漢族人群ATP2B1基因單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系

石姍姍1，陳星2，周鵬2，欒萌2

(1山東大學(xué)齊魯醫(yī)院，濟(jì)南250012；2山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所)

探討山東漢族人群細(xì)胞膜鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶1(ATP2B1)基因單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系。方法選擇450例山東地區(qū)漢族原發(fā)性高血壓患者為病例組，450例健康體檢者為對照組。采用高分辨率溶解曲線法觀察ATP2B1基因6個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(rs2854371、rs957525、rs2681472、rs2070759、rs11105357和rs17249754)的基因型。結(jié)果兩組受檢者ATP2B1基因上述6個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)基因型和等位基因分布相比，P均>0.05。結(jié)論山東漢族人群ATP2B1基因單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性高血壓無關(guān)。

單核苷酸多態(tài)性；ATP2B1基因；原發(fā)性高血壓；山東??；漢族

血壓過高不僅引起心腦腎血管疾病的危險性增高，還可導(dǎo)致血脂代謝異常、胰島素抵抗、糖耐量異常等一系列病理綜合征群，嚴(yán)重危害患者的生命安全及生活質(zhì)量[1～6]。原發(fā)性高血壓是一種環(huán)境與遺傳因素相互作用的多基因遺傳性疾病，闡明患者血壓升高的遺傳機(jī)制，尋找高血壓相關(guān)基因，不僅能更好地理解原發(fā)性高血壓發(fā)生的病理生理機(jī)制，而且能指導(dǎo)臨床醫(yī)生對原發(fā)性高血壓進(jìn)行預(yù)防、早期診斷和治療[7～10]。遺傳因素在原發(fā)性高血壓的發(fā)生過程中起重要作用。研究表明，細(xì)胞膜鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶1(ATP2B1)基因可能與原發(fā)性高血壓有關(guān)。中國漢族人群遺傳背景復(fù)雜，ATP2B1基因與原發(fā)性高血壓關(guān)系的研究結(jié)果在不同地域、種族的人群中往往不盡相同。本研究觀察了山東漢族人群ATP2B1基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇濟(jì)南市第五人民醫(yī)院2003～2006年收治的原發(fā)性高血壓患者450例為病例組?；颊呔鶠闈h族且無親緣關(guān)系，所有病例均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)/國際高血壓聯(lián)盟(ISH)的高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)，即收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg，排除繼發(fā)性高血壓、心肌病、心臟瓣膜疾病、腎功能衰竭、糖尿病患者。450例中，男252例、女198例，年齡(54.53±11.36)歲，BMI(22.91±2.94)kg/m2，血清甘油三酯(2.03±1.43)mmol/L，血清總膽固醇(5.21±1.02)mmol/L，吸煙116例。另選同期于濟(jì)南市第五人民醫(yī)院體檢的健康志愿者450例為對照組。對照組均為漢族，無高血壓病史。其中男252例、女198例，年齡(54.31±10.92)歲，BMI(22.74±3.01)kg/m2，血清甘油三酯(1.96±1.51)mmol/L，血清總膽固醇(5.11±1.05)mmol/L，吸煙103例。兩組性別、年齡、BMI、血清甘油三酯、血清總膽固醇及吸煙情況相比，P均>0.05。本研究已獲山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 ATP2B1基因多態(tài)性觀察方法 抽取兩組受試者外周靜脈血5 mL，抗凝后-80 ℃冰箱保存待測。采用富士全血DNA提取試劑盒提取兩組受試者外周血基因組DNA。根據(jù)NCBI Map View和UCSC(the University of California Santa Cruz)的Genome Browser(http://genome.ucsc.edu/)，結(jié)合國內(nèi)外文獻(xiàn)的陽性報(bào)道，選出ATP2B1基因的6個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，分別是rs2854371、rs957525、rs2681472、rs2070759、rs11105357和rs17249754。根據(jù)ATP2B1基因序列設(shè)計(jì)上述位點(diǎn)的上下游引物。PCR總反應(yīng)體系(12.5 μL)包括0.1 μL的Fermantas，Taq DNA合成酶，0.75 μL的上下游引物，3.75 μL的SYTO9，5 μL的模板基因組DNA，1.25 μL的10×緩沖液，0.75 μL的Mg2+，0.25 μL的dNTPs。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，55～60 ℃退火與延伸60 s(50個循環(huán))；72 ℃延伸7 min。PCR產(chǎn)物于4 ℃保存。采用高分辨率溶解曲線(HRM)法觀察受檢者上述6個位點(diǎn)的基因型。實(shí)驗(yàn)在Rotor-Gene 6000熒光實(shí)時定量PCR儀上進(jìn)行，先94 ℃變性60 s，然后40 ℃復(fù)溫3 min，最后緩慢升溫(溫度上升速度為0.1 ℃/s，溫度上升范圍65～85 ℃)進(jìn)行HRM檢測。用Rotor-Gene 6000 series1.7確定受檢者基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件?；蛐秃偷任换驑?gòu)成比比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組受檢者ATP2B1基因6個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)基因型分布見表1，等位基因分布見表2。兩組ATP2B1基因6個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(rs2854371、rs957525、rs2681472、rs2070759、rs11105357和rs17249754)基因型和等位基因分布相比，P均>0.05。

表1 兩組受檢者ATP2B1基因6個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)基因型分布(例)

表2 兩組受檢者ATP2B1基因6個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)等位基因分布(例)

3 討論

多年的全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)發(fā)現(xiàn)了許多與原發(fā)性高血壓有關(guān)的基因和單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)[11,12]，ATP2B1基因便是其中之一。ATP2B1基因是細(xì)胞膜鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶基因家族成員之一，這個基因家族至少包括4個基因，為ATP2B1、ATP2B2、ATP2B3、ATP2B4。ATP2B1基因定位于12q21.33，編碼ATP2B1蛋白，這種轉(zhuǎn)運(yùn)酶可逆濃度梯度將鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外，對維持細(xì)胞內(nèi)的鈣穩(wěn)態(tài)起至關(guān)重要的作用，并且其與血管平滑肌的收縮與舒張密切相關(guān)。

研究[11,12]首先發(fā)現(xiàn)歐洲人群中ATP2B1基因一些位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性高血壓相關(guān)；隨后韓國學(xué)者選取了8 842個研究對象，發(fā)現(xiàn)了10個與原發(fā)性高血壓相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，其中ATP2B1基因rs17249754位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性高血壓相關(guān)性最明顯[13]。有報(bào)道日本人群ATP2B1基因rs2070759和rs11105378位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與高血壓的發(fā)生有關(guān)。中國學(xué)者也開展了漢族人群ATP2B1基因單核苷酸多態(tài)性與高血壓關(guān)系的研究[14]，但研究結(jié)果不一致。Liu等[15]對FGF5、CYP17A1、MTHFR、ZNF652、PLCD3、ATP2B1、c10orf107基因單核苷酸多態(tài)性與高血壓的相關(guān)性進(jìn)行研究，未發(fā)現(xiàn)ATP2B1基因單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性高血壓相關(guān)。但另有文獻(xiàn)報(bào)道ATP2B1基因rs17249754位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與上海、寧波漢族人群原發(fā)性高血壓發(fā)生密切相關(guān)[16,17]。本研究篩選出既往有陽性報(bào)道的6個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，觀察其與山東漢族人群原發(fā)性高血壓是否存在關(guān)聯(lián)，結(jié)果顯示這6個位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性均與原發(fā)性高血壓無關(guān)。

目前對基因單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性高血壓關(guān)系的陽性報(bào)道不少，但可穩(wěn)定重復(fù)的結(jié)果很少，這可能是由多方面的因素導(dǎo)致的。一方面，原發(fā)性高血壓為高度異質(zhì)性疾病，不同國家、地域、民族的患者群體遺傳背景不同，原發(fā)性高血壓是由于不同的基因引發(fā)。另一方面，原發(fā)性高血壓是一種多基因疾病，發(fā)病機(jī)制涉及到復(fù)雜的生物化學(xué)代謝網(wǎng)絡(luò)，其中的一個或幾個基因病變都能引起相同的臨床癥狀，這些基因分散在不同染色體的不同位置，它們之間有著復(fù)雜的相互作用，同一種表型可能是同一代謝途徑或信號傳導(dǎo)途徑上不同基因突變的結(jié)果，所以在一個群體中，孤立地針對某個熱門候選基因進(jìn)行分析，不容易發(fā)現(xiàn)顯著性差異。

目前原發(fā)性高血壓的各相關(guān)研究基礎(chǔ)扎實(shí)、研究資料齊備，各種經(jīng)典研究方法應(yīng)用相對成熟，積累了大量相關(guān)數(shù)據(jù)，這些前期工作的積累為進(jìn)一步揭示原發(fā)性高血壓發(fā)病機(jī)制奠定了良好的基礎(chǔ)。今后研究者可以充分利用前期研究成果進(jìn)行深入分析、互相驗(yàn)證，并運(yùn)用系統(tǒng)生物學(xué)的思維方式，將其搭建成“基因-mRNA-蛋白質(zhì)-功能”的立體網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，從而能夠較完整地闡明導(dǎo)致原發(fā)性高血壓發(fā)生的遺傳學(xué)機(jī)制。本研究的樣本數(shù)量較少，下一步計(jì)劃擴(kuò)大樣本數(shù)量并且針對山東地區(qū)原發(fā)性高血壓核心家系的樣本進(jìn)行研究，以期待有新的發(fā)現(xiàn)。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.39.024

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B

1002-266X(2017)39-0076-03

山東省自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(ZR2014HQ030，ZR2014HQ042);山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2013WS0364)。

欒萌(E-mail: mengluan113@sina.com)

2017-06-20)